HPLC法测定羟乙磺酸喷他脒的含量

王 健,姜洪波

(1.新乡市食品药品检验所，河南 新乡 453000;2.新乡医学院第三附属医院营养科, 河南 新乡 453000)



HPLC法测定羟乙磺酸喷他脒的含量

王 健1,姜洪波2

(1.新乡市食品药品检验所，河南 新乡 453000;2.新乡医学院第三附属医院营养科, 河南 新乡 453000)

目的：建立高效液相色谱法测定羟乙磺酸喷他脒的含量的方法。方法:C18色谱柱，甲醇—醋酸铵溶液(30g/L醋酸铵水溶液，用三乙胺调pH为7.5)(50 ：50)，流速1.0mL/min，检测波长265nm。结果：羟乙磺酸喷他脒在9.98～99.66μg/mL浓度范围内呈良好的线性关系。结论:测定方法简便，重现性好。

羟乙磺酸喷他脒；HPLC法；含量测定

羟乙磺酸喷他脒 别名： 戊烷脒、英文名：Pentamidine Isethionate 为无色结晶性粉末，无臭、味苦。可溶于水或甘油，微溶于乙醇，几乎不溶于氯仿、丙酮、乙醚。 药理和应用： 本品为芳香双脒类药物。本品作用机制尚不够清楚，可能干扰核苷酸生物合成和DNA的复制，也可干扰叶酸盐的转换。对利什曼原虫有直接杀灭作用。是治疗癌艾滋病并发卡氏肺孢子虫肺炎的首选药[1]，是治疗黑热病的有效药物，但因其毒副作用较严重，故临床仅用于锑剂无效或对锑剂过敏等不宜用锑剂的患者。本品还可用于非洲锥虫病的早期治疗。本文采用HPLC法测定其含量，方法简便快捷，准确[2]，重现性及稳定性好，测定结果满意。

1 仪器与试药

Waters2695高效液相色谱仪,2996PDA检测器，Empower数据处理软件。羟乙喷他脒对照品(SIGMA公司)，色谱甲醇(天津四友)，醋酸铵(分析纯)。供试品：羟乙磺酸喷他脒(河南龙泉药业) 。

2 实验方法

2.1 色谱条件

色谱柱：C18(4.6×250mm)；流动相：甲醇—醋酸铵溶液(30g/L醋酸铵水溶液，用三乙胺调pH为7.5)(50 ：50)，流速1mL/min；检测波长265nm；理论板数：7000。

图1 羟乙磺酸喷他脒对照品色谱图

2.2 线性关系考察[3]

精密称取干燥至恒重的羟乙磺酸喷他脒对照品适量，加流动相溶解并定量稀释成每1mL中含羟乙磺酸喷他脒9.98～9.66μg的溶液；分别精密量取上述溶液各10μL，注入液相色谱仪。

2.3 精密度实验[4]

精密称定羟乙磺酸喷他脒对照品适量于100mL容量瓶中，加流动相使其溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得(40μg/mL)，作为供试品溶液；精密量取10μL，注入液相色谱仪。

2.4 回收率实验

精密量取0.08229g、0.10701g、0.12205g的羟乙磺酸喷他脒对照品各三份，分别置100mL容量瓶中，加流动相使其溶解，并稀释至刻度，摇匀。各精密吸取2mL于50mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀作为供试品溶液；另取0.10701g 的羟乙磺酸喷他脒对照品置100mL容量瓶中，加流动相使其溶解，并稀释至刻度。精密吸取2mL于50mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀作为对照品溶液。分别精密量取供试品溶液与对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪。

2.5 稳定性实验[5]

精密称定羟乙磺酸喷他脒对照品适量于100mL容量瓶中，加流动相使其溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得(40μg/mL)， 作为供试品溶液。 在规定时间精密量取供试品溶液10μL注入液相色谱仪， 进样三次测定。

2.6 样品含量测定

分别精密称取3批样品各两分，每份约0.1g于100mL量瓶中，加流动相40mL后使完全溶解，用流动相稀释至刻度，摇匀。移取此溶液2mL，用流动相稀释定容至50mL，摇匀，作为供试品溶液。精密量取10μL，注入液相色谱仪，进样两次，记录色谱图；另取干燥至恒重的羟乙磺酸喷他脒对照品两份。每份0.1g，同法测定。

3 实验结果

3.1 线性关系

按“2.2”实验方法，记录色谱图，量取峰面积，平行三次，结果取平均值，见表1。

表1 含量HPLC法线性考察结果

以浓度χ(μg/mL)对峰面积Y进行回归的线性方程为：у=28518χ-8787.4 г=1.0000

结果表明：本法在9.98～99.66μg/mL范围内呈良好的线性关系。

3.2 精密度实验

按“2.3”实验方法，记录色谱图，量取峰面积，平行测定6次，见表2。

表2 含量进样精密度测定结果

结果表明：进样精密度(RSD)小于2.0%，符合规定。

表3 回收率实验结果

样品NO．对照品加入量(g)峰面积回收率(%)对照品10．10701122509320．10701122529030．10701121549580%10．0822992656799．2320．0822992647499．2230．0822993312999．93100%40．107011216227100．1650．107011219776100．4560．107011221555100．60120%70．122051385016100．0180．12205138407699．9490．122051384900100．00

3.3 回收率实验

按“2.4”实验方法，记录色谱图，量取峰面积，求回收率，平均回收率=99.95% RSD=0.47%,见表3。

3.4 稳定性实验

按“2.5”实验方法，记录色谱图，峰面积取平均值，见表4。

表4 供试品溶液稳定性考察结果

峰面积RSD%为：0.13%，结果表明：本品溶液在8h内基本稳定。

3.5 样品含量测定

按“2.6”实验方法，记录色谱图，按外标法以峰面积计算，含量结果(以羟乙磺酸喷他脒计)，见表5。

表5 含量测定结果(%)

4 讨论

曾采用甲醇—水和乙腈—水按不同比例为流动相进行实验[6]，结果色谱图峰形较差，经多次实验，流动相中加入一定量醋酸铵，并用三乙胺调pH到7.5，以甲醇—醋酸铵溶液(30g/L醋酸铵水溶液，用三乙胺调pH为7.5)(50 ：50)为流动相结果峰形良好，理论板数高。通过上述试验表明，采用本文的HPLC法测定羟乙磺酸喷他脒的含量，方法简便，结果准确，重复性好，其专属性较好，可用于羟乙磺酸喷他脒的质量控制，为药品的注册申报提供依据。

[1]陈红. 喷他脒治疗卡氏肺孢子虫肺炎的最新见解[J].新药与临床，1990,9(5)：309-310

[2]沈德凤，张启星，计莹，等. HPLC法测定止泻片中穿心莲内酯的含量 [J].黑龙江医药科学，2006,29(1)：38

[3]王海英. 高效液相色谱法测定更昔洛韦凝胶的含量[J].黑龙江医药科学，2009,32(3)：26

[4]王健. HPLC梯度法测定复方氯霉素咪康唑乳膏中氯霉素和硝酸咪康唑的含量 [J].黑龙江医药科学，2008,31(5)：21-22

[5]王海英. HPLC法测定鼻炎糖浆中黄芩苷的含量 [J].黑龙江医药科学，2009,32(2)：22

[6]丁立新，韩宁，高金波. 美沙拉嗪肠溶片质量标准研究[J].黑龙江医药科学，2007,30(2)：24

王健(1980～)男，黑龙江佳木斯人，本科，双学士学位，主管药师。

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1008-0104(2016)06-0127-02

2016-07-12)