FBXW7与KLF5在乳腺癌中的表达及临床意义

王 新，周 昱，廉奇鑫

(佳木斯大学附属第一医院肿瘤科，黑龙江 佳木斯 154003)



FBXW7与KLF5在乳腺癌中的表达及临床意义

王 新，周 昱，廉奇鑫

(佳木斯大学附属第一医院肿瘤科，黑龙江 佳木斯 154003)

目的：研究FBXW7与KLF5在乳腺癌病变组织中的表达程度及两个因子同临床相应病理学特征之间的联系以及两者内在联系，并阐明其在人类乳腺癌形成过程中的作用机制。方法：选取经佳木斯大学附属第一医院确诊为乳腺癌并行手术治疗的患者病理蜡块，且再次由资深病理科医生证实，通过采用ElivisionTM Plus/HRP免疫组化方法，分别检测45例乳腺癌组织标本中FBXW7和KLF5两个与癌症相关基因的表达状况，同时在应用软件SPSS17.0的帮助下，采用传统的统计学计算方法分析上述两因子同临床相应的病理学特点间的关系，最后探讨FBXW7和KLF5是否存在相关的临床指导意义。结果：乳腺癌中KLF5阳性表达率为82.22%，高于正常乳腺的17.78%；乳腺癌中FBXW7蛋白阳性表达为53.33%，低于正常乳腺中的100.00%；二组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论：KLF5在乳腺癌中表达明显增强，FBXW7在乳腺癌中表达明显降低，提示在乳腺癌发生中KLF5和FBXW7发挥一定作用，对KLF5、FBXW7的检测可作为重要生物学指标。

乳腺癌； FBXW7；KLF5；表达

乳腺癌是最常见的人类恶性肿瘤之一，发病部位多见乳腺外上象限，肿块多呈卵圆形或橄榄形，肿瘤通常平滑且边界清楚，同乳房周围组织无黏连，肿块在乳腺内可以无阻推动，通常无自发痛和触痛现象。根据最近世界卫生组织对乳腺癌患者人数递增人数调查发现，在一些发达地区由于人群医疗保障制度建设的合理，在一些常规检查中就及时发现乳腺疾病。乳腺疾病发现的越早治疗效果越好。

FBXW7也叫F框/WD-40域蛋白(F-box/WD repeat-containing protein 7，FBXW7)它还是是F-box蛋白家族成员[1]，又有学着给它其为CDC4、FBW7(F-盒和含蛋白7的WD重复结构域)、hCDC4、AGO、SEL-10，是泛素SCF连接酶的靶蛋白识别组分[2]。最近几年研究表明，FBXW7是一种抑癌因子，在宫颈癌、胃癌、直肠癌中都发现了FBXW7的缺失和突变。目前发现FBXW7的靶蛋白包括CyclinE，c-myc，c-jun，Notch 1 and Notch 4等多种癌蛋白，FBXW7可以介导这些癌蛋白并发生降解。当发生细胞突变不但影响FBXW7蛋白的表达，而且还会使CyclinE，c-myc，c-jun，Notch 1 and Notch 4等信号通路异常，并导致细胞的分裂、细胞生长、凋亡以及细胞分化等进程紊乱。

近几年发现一种新的转录因子人类 Kruppel 样因子 5(KLF5)，它主要起调控基因的转录水平，更进一步影响了细胞的增殖及分化[3]，从而控制细胞的发生与发展，许多学者研究KLF5参与了多种肿瘤转录、已经有学者证明KLF5在胃癌组织其表达的高低与胃癌的恶性程度及预后显著相关[3]。本课题研究通过免疫组化方法测验45例乳腺癌、45例癌旁正常组织中FBXW7、KLF5两因子的表达情况，并探索其临床意义和FBXW7与KLF5在乳腺中是否有关系。

1.1 资料与方法

选取经佳木斯大学附属第一医院确诊为乳腺癌并行手术治疗的患者病理蜡块，且再次由资深病理科医生证实，病例选自佳木大学附属医院2012-08～2014-08的手术标本,全部病例均经病理诊断证实。临床诊断和病理分类依据WHO标准。其中正常乳腺组45例，年龄23～57岁，平均(45.1±4.1)岁，乳腺癌组45例，年龄26～65岁，平均(47.4±4.9)岁，两组患者年龄无统计学差异(P>0.05)。研究对象术前均未进行选择的对象均无放疗、化疗及激素替代治疗史。

1.2 主要试剂

FBXW7兔抗单克隆抗体KLF5兔抗单克隆抗体都由北京博奥森生物技术有限公司产品生产，通用Elivision法试剂盒以及DAB显色试剂都是从北京中衫金桥生物技术有限公司买入。

1.3 免疫组化

通过采用ElivisionTM Plus/HRP免疫组化方法，探讨FBXW7、KLF5在乳腺癌及正常癌旁组织中的表达情况。

1.4 结果判定

FBXW7和KLF5评分标准:阳性细胞的百分率标准为：0分为0%；1分为1%～25%；2分为26%～50%；3分为51%～75%；4分为76%～100%；细胞的染色强度标准为：0分为无色；1分为淡黄色；2分为黄色；3分为棕黄色，以二者乘积为最终判定标准，1分以上为阳性。

1.5 统计学方法

采用SPSS19.0软件包处理。用卡方检验，两因子与各因素相关性采用秩相关；均以α=0.05作为检验水准，P<0.05差异有统计学意义。

2 结果

乳腺癌中KLF5阳性表达率为82.22%，高于正常乳腺的17.78%；组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。见表1。KLF5的表达与癌组织大小、瘤体组织分化程度、病变淋巴转移以及肿瘤TNM分期有关(P<0.05)；与患者的性别、发病年龄、病理学类型无关(P>0.05)。见表2。

表1 乳腺癌及正常乳腺中KLF5表达情况(n=45)

表2 KLF5的表达与乳腺癌临床病理参数的关系

KLF5的表达与组织学分级、淋巴结转移、肿块大小和临床分期均有相关性，差异有统计学意义(P<0.05)。

乳腺癌中FBXW7蛋白阳性表达为53.33%，低于正常乳腺中的100.00%；组间差异均具有统计学意义(P<0.05)。见表3。FBXW7的表达与癌组织的大小、瘤体组织分化程度、病变淋巴转移以及肿瘤TNM分期有关(均P<0.05)；与患者的性别、发病年龄、病理学类型无关(P>0.05)。见表4。

表3 乳腺癌及正常乳腺中FBXW7表达情况(n=45)

表4 FBXW7表达与乳腺癌临床病理参数的关系

FBXW7的表达与组织学分级、淋巴结转移、肿块大小和临床分期均有相关性，差异有统计学意义(P<0.05)。

3 讨论

FBXW7(F框/WD-40域蛋白7)是一种近年来新发现的抑癌基因，很多学着在乳癌、卵巢癌、胰腺癌、直肠癌中都发现FBXW7的突变。并发现FBXW7通过介导泛素蛋白酶体途径降解cyclinE蛋白、c-myc、c-jun、Notch、MCL1、KLF5和c-myb等多种癌蛋白[4～8]，在癌细胞的发展、转移以及规律性变化的过程中能够起到一定的控制作用。他在很多肿瘤细胞内里表达几乎都是上升的，这是癌细胞以及潜在的癌细胞的共同结果。FBWX7与泛素连接酶E3结合作用在乳腺癌中，并且发挥生物学功能。FBWX7、SKP1/CUL1和RBX1形成SCF复合物后能够形成泛素连接酶，并且发挥生物学功能。Mutsuko Ibusuki等[9]等人在研究FBXW7基因及其蛋白在187例乳腺癌患者中的表达水平时发现，在组织学分化高、ER(-)、PgP(-)的患者中，FBXW7mRNA的表达明显受到抑制，这也支持FBXW7mRNA影响肿瘤细胞的细胞周期的观点，按形态学对肿瘤细胞胞质进行评价时，组织学分级可以反映DNA的合成和有丝分裂[10]。在激素受体阴性的亚组中,FBXW7mRNA低表达。另外,FBXW7mRNA低表达还与Ki-67有这密切的关系。Yu等认为FBXW7第二内含子中的纯和单核苷酸多态性与ER(-)和临床分期较高的乳腺癌患者相关[2，11]。虽然现在还没有更多的有关FBXW7和激素受体之间关系的报道,但在高分化类型乳腺癌患者中,有可能基因异常有增强癌细胞侵袭能力，在激素受体阴性的患者里。虽然FBXW7蛋白与mRNA的表达水平正相关,并能明确的反应患者预后,但它的临床意义还是受到一定的束缚。为进一步了解FBXW7蛋白水平表达情况，本研究选择了乳腺正常组织、乳腺癌组织，采用免疫组化的方法进行检测，并结合临床特征进行分析，结果回报：乳腺正常组织中FBXW7高表达，乳腺癌组织中FBXW7低表达，而且与乳腺癌分化程度、淋巴结转移、临床分期有关。FBXW7与患者岁数、病理类型无关。由此推测出癌组织的恶性程度、转移情况都与FBXW7有这密切相关，有可能成为新的乳腺癌患者判定预后的新标准。

KLF 家族实质上可以说是蛋白质家族，它的家族中的因子基本结构域差不多，每个结构域的主要作用几乎都是调节因子转录的，它们含有特定的锌结构，锌结构在表达过程中起了承上启下作用，KLF家族共同特点作用在加入与调控生物内主要的细胞的生长及病理生理过程。国内外学者研究KLF家族与很多肿瘤都存在着一定关系，并且KLF5还在许多肿瘤(结肠、前列腺、胰腺、肺、乳腺等)的发生进展过程中都发挥了重要作用。大量研究结果表明，KLF5参加激活了PKC、MAPK通路等很多细胞增殖信号，并调节了许多细胞周期蛋白的表达，例如上调细胞周期正调节本周蛋白 D1,下调细胞周期 P21、P15 并加速了细胞分裂增殖以及细胞周期进程。KLF5也主动参加LPS介导的肠道腺上皮细胞炎症病理反应[12]。在胃癌、结肠癌、直肠癌等[13]胃肠道肿瘤等其他肿瘤组织中，均可检测到 KLF5 表达水平增高。然而在乳腺浸润性导管癌中KLF5 的表达尚不十分清楚。因此对 KLF5在乳腺癌等其他相关肿瘤的发生、发展以及治疗、预测预后等方面的研究逐渐广泛[3]。

本研究结果显示，正常乳腺全部表达为阳性，而45例乳腺癌中有24例FBXW7蛋白的表达为阳性，考虑可能为FBXW7基因突变或缺失所致，或FBXW7蛋白合成减少或分解旺盛所致。而KLF5蛋白在乳腺癌中阳性表达率为82.22%，明显高于正常组的17.78%，说明KLF5蛋白参与乳腺癌的发生和发展。KLF5在乳腺癌中表达明显增强，FBXW7在乳腺癌中表达明显降低，提示在乳腺癌发生中KLF5和FBXW7发挥一定作用，对FBXW7、KLF5的检测可作为重要生物学指标。乳腺癌在产生时是取决癌细胞的增长和细胞死亡之间的平衡性丧失导致的。因此当乳腺癌组织出现细胞生长和死亡失去控制的时候，或者细胞出现突变等，则表示细胞生存状态高于细胞的死亡率，则表明癌细胞有所发展。可以根据FBXW7、KLF5的检测判断肿瘤恶性程度情况。

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1.黑龙江省青年基金项目，编号：QC2013C013；2.佳木斯大学青年基金项目，编号：sq2013-013。

王新(1962～)男，黑龙江佳木斯人，硕士，主任医师，硕士研究生导师。

周昱(1969～)男，黑龙江集贤人，学士，副主任医师，硕士研究生导师。E-mail:zhouyu731@126.com。

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1008-0104(2016)06-0049-03

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