骨金散治疗糖皮质激素性骨质疏松的实验研究

2016-12-28宋丽娜陆洪军赵锦程

黑龙江医药科学 2016年6期

关键词：佳木斯大学皮质激素骨密度

宋丽娜，陆洪军，赵锦程

(1.佳木斯大学附属第一医院，黑龙江佳木斯 154003；2.佳木斯大学基础医学院，黑龙江佳木斯 154007)

骨金散治疗糖皮质激素性骨质疏松的实验研究

宋丽娜1，陆洪军1，赵锦程2

(1.佳木斯大学附属第一医院，黑龙江佳木斯 154003；2.佳木斯大学基础医学院，黑龙江佳木斯 154007)

目的：研究骨金散治疗糖皮质激素性骨质疏松的效果及可能的作用机制。方法：选择3.5月龄健康清洁级雌性SD大鼠60只，随机分为正常对照组(A组)，模型对照组(B组)，低剂量治疗组(C组)和高剂量治疗组(D组)，每组15只，除A组外其余各组大鼠在左后肢臀部肌肉注射地塞米松2.5 mg/kg·d建立糖皮质激素骨质疏松模型，连续9周，低钙饲料正常喂养。A组大鼠给予全价饲料喂养。3周后C、D两组大鼠开始分别按1.8g/kg和3.6g/kg的骨金散配比l mL/100g生理盐水灌服，1次/d，A、B两组等量生理盐水灌服，连续服用9周。检测大鼠体质量、骨密度、括血清钙(Ca)、磷(P)、血清雌二醇(E2)、血清骨钙素(Osteocalcin或Bone Gla Protein，OC或BGP、血清降钙素：(Calcitonin，CT)、血清抗酒石酸酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase , TRACP)。结果：实验前与实验后各组大鼠体质量均有增加， A组平均体质量增加最明显， B、C、D三组体质量增加幅度依次为D>C>B，表明糖皮质激素性骨质疏松大鼠模型建立成功，影响大鼠体质量增加，骨金散治疗可以缓解大鼠体质量缓慢，组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。各组大鼠股骨骨密度测定差异显著，B、C、D组大鼠骨密度均低于A组，但应用骨金散治疗的C、D两组骨密度高于B组，且使用高剂量骨金散的D组更接近A组值，可见，中药骨金散对提高糖皮质激素性骨质疏松大鼠的骨密度有效，且随着剂量增加疗效增强。糖皮质激素使B、C、D组大鼠血清Ca、血清雌二醇E2、血清骨形成标志物骨钙素BGP、降钙素CT均有所下降，但C、D组在给药骨金散后各指标数值明显提升，且随着剂量的增加提升明显，组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。但血清P含量变化无显著差异(P>0.05)，血清骨吸收标志物抗酒石酸酸性磷酸酶TRACP值在注射糖皮质激素后明显升高，但给药骨金散后数值明显下降，且随剂量增加，效果明显。组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：骨金散治疗糖皮质激素性骨质疏松效果显著，值得逐步转向临床，且骨金散可通过改善骨代谢生化指标，增加骨含量，拮抗骨丢失，达到防治骨质疏松的作用，这可能与其治疗骨质疏松的机制有关。

骨金散；骨代谢；骨密度；糖皮质激素性骨质疏松症(GIOP)

糖皮质激素性骨质疏松症(glucocorticoid induced osteoporosis，GIOP)是一种因为內源或外源糖皮质激素导致的代谢性骨病[1,2]。长期使用糖皮质激素治疗的患者一半以上都会发生骨质疏松症状，表现为骨量减少、骨微结构破坏、强度降低、骨折风险增加等。GIOP导致的骨折愈合困难，致残率高[3]。因此，寻找预防和治疗该病症的药物是目前医学研究的重要课题，本研究以GIOP大鼠为研究对象，采用中药骨金散治疗，观察骨金散的疗效以及探讨其作用机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料

选择3.5月龄健康清洁级雌性SD大鼠60只，体质量200～250g，平均(230±20)g，所有SD大鼠均在恒温、恒湿的条件下喂养，实验室温度恒定为(24±1)℃，相对湿度50%～70% ，保持环境清洁，每12h黑白交替光照，自主进食饲料和自来水。实验药物为天津药业集团新郑股份有限公司购买的地塞米松磷酸钠注射液(批号:1101264)；佳木斯大学第一附属医院购买骨金散，其主要成分为三七、血蝎、乳香、没药、龙骨、方虫、桂枝等十余味中药材，低剂量组用量为1.8 g/kg体质量，高剂量组用量为3.6g/kg体质量。实验仪器为上海江莱生物科技有限公司的雌激素(E2)酶联免疫吸附试剂盒，美国NORLAND的XR-2626型双能X线骨密度仪，中国人民解放军总医院科技开发中心的骨钙素、降钙素试剂盒，美国Harris的R-404A低温冰箱，北京医用离心机厂的LDZ4型微量离心机等[4,5]。

1.2 实验方法

所有实验大鼠依据随机数字表法分为正常对照组(A组)，模型对照组(B组)，低剂量治疗组(C组)和高剂量治疗组(D组)，每组15只。除A组外其余各组大鼠在左后肢臀部肌肉注射地塞米松2.5mg/kg·d建立糖皮质激素骨质疏松模型，连续9周，低钙饲料正常喂养。A组大鼠给予全价饲料喂养。3周后C、D两组大鼠开始分别按1.8g/kg和3.6g/kg的骨金散配比1mL/100g生理盐水灌服，1次/d，A、B两组等量生理盐水灌服，连续服用9周。于取材前24h终止给药，各组大鼠麻醉摘眼球取血，收集血液离心(3000 r/min，10min)，分离血清，-80℃冰箱冻存备骨生化指标测定，处死大鼠；取大鼠右侧股骨剔除肌肉等组织，用生理盐水纱布包裹，浸透于生理盐水中-20℃冰箱保存，备作骨密度测定[6,7]。

1.3 检测指标

实验前后称量大鼠体质量，对大鼠离体股骨上1/3处骨采用双能X线骨密度仪测定骨密度，实验结果骨密度采用单位面积内的骨矿物质含有量表示(g/cm2)[8,9]。取血清进行下列血生化指标检测，具体检测步骤按试剂盒说明书进行，包括血清钙(Ca)、磷(P)、血清雌二醇(E2)、血清骨钙素(Osteocalcin或Bone Gla Protein，OC或BGP、血清降钙素：(Calcitonin，CT)、血清抗酒石酸酸酸性磷酸酶(tartrate resistant acid phosphatase , TRACP)。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 各组大鼠体质量及骨密度变化

实验前与实验后各组大鼠体质量均有增加， A组平均体质量增加最明显， B、C、D三组体质量增加幅度依次为D>C>B，表明GIOP大鼠模型建立成功，影响大鼠体质量增加，骨金散治疗可以缓解大鼠体质量缓慢，组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。各组大鼠股骨骨密度测定差异显著，B、C、D组大鼠骨密度均低于A组，但应用骨金散治疗的C、D两组骨密度高于B组，且使用高剂量骨金散的D组更接近A组值，可见，中药骨金散对提高GIOP大鼠的骨密度有效，且随着剂量增加疗效增强。见表1。

表1 各组大鼠体质量及骨密度变化±s，n=15)

2.2 各组大鼠骨生化指标的变化

糖皮质激素使B、C、D组大鼠血清Ca、血清雌二醇E2、血清骨形成标志物骨钙素BGP、降钙素CT均有所下降，但C、D组在给药骨金散后各指标数值明显提升，且随着剂量的增加提升明显，组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。但血清P含量变化无显著差异(P>0.05)，血清骨吸收标志物抗酒石酸酸性磷酸酶TRACP值在注射糖皮质激素后明显升高，但给药骨金散后数值明显下降，且随剂量增加，效果明显。组间比较差异均有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 各组大鼠骨生化指标的变化±s，n=15)

3 讨论

骨质疏松症(osteoporosis)是一种骨强度受损、骨密度下降、骨的微细结构破坏的系统性骨病，骨质疏松患者骨折的发生率和危险性都会增加，且骨折不易愈合，易反复骨折，致残率极高。近年骨质疏松的发病率明显上升，已跃居世界常见病第六位，这可能与饮食习惯及食品安全有关。骨质疏松分原发性和继发性，继发性骨质疏松多为疾病或药物副反应引起，GIOP使发病率较高的继发性骨质疏松，系长期服用糖皮质激素类药物引起机体代谢异常，导致骨流失，骨密度下降等[10]。本研究为应用中药骨金散对GIOP进行治疗，观察疗效及探讨可能的作用机制，通过对实验大鼠骨密度、血清Ca、血清P、血清雌二醇E2、血清骨形成标志物骨钙素BGP、降钙素CT、抗酒石酸酸性磷酸酶TRACP等指标的检测发现骨金散可以使GIOP大鼠的骨密度、血清Ca、血清雌二醇E2、血清骨形成标志物骨钙素BGP、降钙素CT含量增加，使抗酒石酸酸性磷酸酶TRACP含量下降，且随骨金散剂量变大这种作用在增强，因此可以判断骨金散治疗GIOP效果显著，值得逐步转向临床，且骨金散可通过改善骨代谢生化指标，增加骨含量，拮抗骨丢失，达到防治骨质疏松的作用，这可能与其治疗骨质疏松的机制有关。

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[4]金海英.中药骨金散对去卵巢大鼠骨密度及细胞因子的影响[D].佳木斯大学,2006

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[10]唐壮.中药骨金散对老龄雄性小鼠骨量及骨代谢相关激素的影响[D].佳木斯大学,2006

黑龙江省教育厅科学技术研究项目，编号：12541820。

宋丽娜(1973～)女，黑龙江佳木斯人，本科，主管护师。