全自动生化检验微量反应检测技术研究与应用

唐敬强，姚思薇，刘丽梅

(乐昌市中医院检验科，广东 乐昌 512200)



全自动生化检验微量反应检测技术研究与应用

唐敬强，姚思薇，刘丽梅

(乐昌市中医院检验科，广东 乐昌 512200)

目的 在满足仪器的最大性能基础上，对全自动生化检验微量反应检测技术的实际应用进行研究探讨。方法 通过对最小样本量、最小试剂量的设置，定标曲线数据对比，质控品回收测定，测定试剂比例改变后的实验结果。收集乐昌市中医院检验科保存的患者新鲜血清30份，进行比对分析，每份血清分装两份按要求保存，且在本实验检测线性范围内。结果 CysC测定参数修改前后实验结果对比差异无统计学意义(P>0.05)；拟合直线回归方程及R2值，得到Y=1.008 3X+15.645，R2=0.986，R2>0.950，符合线性评价要求，参数改变前后的测定具有良好的一致性。结论 试剂比例的相近改变后，实验结果的准确性与原来的对比不存在差异，实验结果准确可靠，仍然能符合临床需求。

全自动生化分析仪； 生化检验； 微量； 反应检测

随着医疗技术的不断进步，临床检验中全自动生化检验得到了广泛应用，全自动生化分析仪的主要原理是根据光电比色来对受检标本中某种特定的化学成分进行测量，具有准确性高、速度快、节省试剂等优势。本研究在满足仪器最大性能的前提下，选取30份新鲜血清，通过对最小样本量、最小试剂量的设置，对全自动生化检验微量反应检测技术的实际应用进行研究探讨。

1 材料

1.1 仪器

全自动生化分析仪由迈瑞公司提供，型号为BS-420，性能介绍：BS-420恒速400/H，样本量2～45 μL，0.1 μL递增；第一试剂最小吸液量150～350 μL，1 μL递增；第二、三、四试剂最小吸液量均为20～350 μL，1 μL递增；反应杯5 mm×5 mm×30 mm(长×宽×高),光径5 mm，反应杯容量750 μL；光学系统为静态光纤传光系统，全息凹面平场光栅后分光；分析原理为比色法和透射比浊法。分析方法：终点法，固定时间法，动力学法，支持双试剂、双波长。

1.2 实验试剂

广州科方生物试剂有限公司生产的胱氨酸蛋白酶抑制剂(CysC)，试剂盒R1试剂为40 mL、R2试剂10 mL(试剂盒要求R1试剂设置为200 μL，R2试剂50 μL)。生产批号：150807，有效期1年。

1.3 实验标本

收集乐昌市中医院检验科保存的患者新鲜血清30份，具有高、中、低浓度，且在本实验检测线性范围内，每份血清分装两份按要求保存。

2 方法与结果

2.1 检测原理与检测方法

本院检验科于2015年3月起采用迈瑞BS-420全自动生化仪进行检测，以测定CysC为例，通过透射比浊法检测。把R1试剂用量控制在满足空白R0点吸光度最小反应体积160 μL，调整R2试剂为30 μL 与样本为2 μL的检验项目，参数设计修改后进行实验设计论证。采用胶乳增强比浊法，在反应体系中R1试剂为甘氨缓冲液，R2试剂为大小均一的聚苯乙烯胶乳颗粒悬液，表面包被抗人CysC特异性抗体，可与样品中CysC结合产生凝集，并与CysC的含量成正比，在600 nm波长下测定吸光度的变化并计算其含量。试剂盒内试剂不匹配现象多见于试剂不足量或者仪器本来防止被稀释而多吸一点，R1、R2试剂不匹配现象造成了严重的试剂浪费[1]。通过改变R1、R2试剂比例，参照NCCLS-EPA文件[2]，在保证质量的前提下[3]，修改检验参数前后用标准品校准仪器，每天测试30份标本2次，连续5 d，在2015年3—6月收集共300个实验数据。

2.2 质控品回收率分析

本实验原来的试剂比例R1:R2：样本为200:50:3，更改后的试剂比例为160:30:2，是微量检测范畴,比例与原来相近似，试剂R0点吸光度无太大的区别，因此定标曲线不存在太大差异。根据实验要求，修改实验参数后利用多点非线性规则进行定标，用多浓度的质控品进行实验质控回收，每个浓度进行20次的测试，以求出其检出均值，回收率在96%～106%，证明该方法有效可行。实验结果见表1。

表1 质控品回收率情况 n=20

2.3 配对t检验

将收集到的实验数据进行统计学处理，t=1.812，自由度为n-1=29,查t值表t0.05(29)=2.045，P>0.05，表明CysC测定参数修改前后实验结果对比差异无统计学意义。

2.4 相关性分析

以CysC改变前的均值为X轴，改变后的为Y轴，将所有实验结果用EXCEL2003软件作散点图，拟合直线回归方程及R2值，得到Y=1.008 3X+15.645，R2=0.986，R2>0.950，符合线性评价要求[4-5]，参数改变前后的测定具有良好的一致性。

2.5 临床可接受评价

参数改变前后的实验数据偏倚均在医学决定水平范围内，证明预期偏倚较小，其修改参数后的实验检测性能仍符合临床使用要求。

2.6 自动化生化检验微量反应经济效益分析

以测定CysC为例，原来说明书设定样本为3 μL，R1为200 μL，R2为50 μL，R1/R2=4/1。试剂盒理论上R1试剂为40 mL、R2试剂10 mL(试剂盒要求R1试剂设置为200 μL，R2试剂50 μL)，实际上R2试剂经常不足10 mL(多数在8.5 mL左右)，存在R1与R2试剂不匹配的情况，按原来试剂盒上的要求只有160人份左右。R2试剂不足就造成了R1试剂的浪费，此时每人份的试剂成本为20.77元。如果对检验项目参数设计进行修改，把R1试剂用量控制在满足空白R0点吸光度最小反应体积160 μL，调整R2试剂为30 μL与样本为2 μL的实验设计，可达到250人份左右，试剂成本降为12.625元。以每天35人次，全年12 775人工作量进行评估，节约试剂成本104 052.00元，经济效益相当可观[6]。

3 讨论

全自动生化检验微量反应检测技术是一项具有广泛应用前景的新技术，当前大部分医疗卫生单位的检验人员都是按照试剂盒内的说明书设定检验项目的实验参数，与全自动生化检验仪器的最低检测限仍有很大的调整空间。然而目前很多生化系列仪器的性能非常优秀，因此按照试剂盒上的参数进行设置，会形成不必要的试剂浪费。缩小实验参数进行测试，对本研究的检测性能重新评估就尤为重要。通过对最小样本量、最小试剂量的设置，使实验的线性不受太大影响，仍能满足日常检验需求是今后生化检验的发展方向，可有效节约检验资源，提高经济效益。

但在实际应用过程中常可发现，在双试剂测试项目中当R2试剂用完后R1试剂仍有剩余的情况，而且这种情况随着检验次数增加而显著增加，这成为检验科急需解决的问题。在双试剂测定过程中，R1试剂作为缓冲剂，其单次使用量较大，而R2试剂单次使用量小。R1、R2试剂混合过程中，物质构成比不变，反应成分不变，改变的是反应物浓度，不同反应物浓度并不会影响反应实质，只是影响物质反应时的检测线性范围，因此，在样品使用量不变的情况下，适当增加物质反应浓度时，反应线性范围则适当增加，而减低物质浓度时，可导致线性反应范围变窄。若适当减少试剂用量，并不会影响检测结果，只是使得线性范围变窄，斜率轻微下降，灵敏度稍有降低，但对线性范围的影响非常小。因此可按照上述方法调整原来试剂用量，从而减少R1试剂浪费情况。使用迈瑞公司BS-420全自动生化分析仪进行实验时，修改检验项目参数设计，保持与原有相近的试剂比例，使实验的线性不受太大影响，仍能较大程度地满足日常检验需求。

此外，本研究所用的仪器保养完好，试剂性能稳定。本科经过长时间的工作实践，对仪器的各项技术指标进行了多次的检测，参数的设计与修改均符合仪器的性能与检测范围，实验结果与之前对比不存在明显差异，检测结果仍能准确可靠。

[1] 罗万义，王艺霓.改变不配套试剂比在全自动分析仪测定中的一致性分析[J].检验医学与临床，2013，10(7)：868-869.

[2] National Committee Clinical Laboratory Standards.Method comparison and bias estimation using patient samplesapproved guideline.EP9-A[S].Wayne，PA，USA：NCCLS，1995.

[3] 叶应妩，王毓三.中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程[M].2版.南京：东南大学出版社，1997：329-335.

[4] 马斌荣.医学统计学[M].4版.北京：人民卫生出版社，2005：36-38.

[5] 杨有业，张秀明.临床检验方法学评价[M].北京：人民卫生出版社，2008：46-48.

[6] 孙志强.AUTOLAB-18全自动生化分析仪淀粉酶测定节省试剂的方法[J].现代检验医学杂志，2011，26(4)：164.

(责任编辑：钟荣梅)

2015-11-05

东昌市卫生局科技计划项目(韶卫计局Y15136号)

R446.11+2

A

1009-8194(2016)03-0008-02

10.13764/j.cnki.lcsy.2016.03.003