结核感染T细胞斑点试验与结核抗体试验对肺外结核的诊断价值分析

张巧凤



·诊治分析·

结核感染T细胞斑点试验与结核抗体试验对肺外结核的诊断价值分析

张巧凤

目的 分析结核感染T细胞斑点(T-SPOT.TB)试验与结核抗体试验对肺外结核的诊断价值。方法 选取2014年4月—2016年3月包头市九原区医院收治的疑诊肺外结核患者173例(最终确诊为肺外结核125例，非肺外结核48例)，分别进行T-SPOT.TB试验及结核抗体试验，比较两种方法的阳性检出率及诊断价值。结果 以痰液标本细菌学检查结果作为诊断肺外结核的金标准，T-SPOT.TB试验对肺外结核的阳性检出率为73.99%，高于结核抗体试验的62.43%(P<0.05)。T-SPOT.TB试验诊断肺外结核的灵敏度为99.20%，特异度为91.67%，诊断符合率为97.11%；结核抗体试验诊断肺外结核的灵敏度为81.60%，特异度为87.50%，诊断符合率为83.24%；T-SPOT.TB试验诊断肺外结核的特异度、灵敏度、诊断符合率高于结核抗体试验(P<0.05)。结论 T-SPOT.TB试验诊断肺外结核的灵敏度、特异度和诊断符合率高于结核抗体试验。

结核病；结核感染T细胞斑点试验；结核抗体；诊断

张巧凤.结核感染T细胞斑点试验与结核抗体试验对肺外结核的诊断价值分析[J].实用心脑肺血管病杂志，2016，24(10)：78-80.[www.syxnf.net]

ZHANG Q F.Diagnostic value of T-SPOT.TB test and tuberculosis antibody test on extrapulmonary tuberculosis[J].Practical Journal of Cardiac Cerebral Pneumal and Vascular Disease，2016，24(10)：78-80.

结核病是一种慢性传染病，可侵犯全身多个系统，临床表现复杂多变，缺乏特异性，且早期起病具有隐匿性，故早期诊断难度较大[1-2]。目前，临床诊断结核病主要依据X线及痰液标本细菌学检查结果，其中痰液标本细菌学检查是目前公认的结核病诊断金标准[3]。但痰液标本细菌学检查诊断结核病存在痰涂片抗酸染色阳性率较低的情况，需要多次反复送检，不利于结核病的早期诊断。肺外结核是指除肺结核以外的结核病，其起病隐匿且临床症状不典型，极易造成误诊。结核感染T细胞斑点(T-SPOT.TB)试验是以特异性抗原〔分泌性靶抗原(ESAT-6)，培养滤液蛋白10(CFP-10)〕为刺激源，采用酶联免疫斑点技术(ELISPOT)诊断结核病的新方法[4-5]。本研究旨在分析T-SPOT.TB试验与结核抗体试验对肺外结核的诊断价值，为肺外结核的早期诊断提供参考，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2014年4月—2016年3月包头市九原区医院收治的疑诊肺外结核患者173例，其中男90例，女83例；年龄20～65岁，平均年龄(37.2±5.6)岁。纳入标准：(1)一般人口学资料完整；(2)有明确痰液标本细菌学检查结果；(3)患者及其家属知情同意并签署知情同意书。排除有认知功能障碍及意识不清患者。经痰液标本细菌学检查，并依据中华医学会制定的《临床诊疗指南·结核病分册》[6]和中国防痨协会结核病临床专业委员会提出的结核病临床诊断标准及方法进行诊断[7]，最终确诊为肺外结核125例(盆腔结核2例，肠结核3例，支气管结核10例，结核性脑膜炎12例，淋巴结核17例，结核性胸膜炎81例)，非肺外结核48例〔非结核性疾病16例(主要为肺占位性病变和肺炎)，肺结核32例〕。

1.2 方法

1.2.1 T-SPOT.TB试验 主要试剂及仪器：T-SPOT.TB试剂盒由上海复星长征医学科学有限公司惠赠(Oxford Immunotec Ltd.公司生产)；1640培养液由美国GIBCOBRL公司生产；淋巴细胞分离液由上海恒信化学试剂有限公司提供；酶联免疫斑点分析仪由美国CTL公司中国销售部提供；Countstar自动细胞计数仪(Countess C10227)由艾力特国际贸易有限公司生产；8孔反应板条架、Ⅱ级生物安全柜、水平离心机等均由济南爱环医疗器械有限公司提供。

样本采集：采集患者外周静脉血5 ml，置于含有抗凝剂(肝素)的试管中，样本采集后保存时间不超过4 h，后按照试剂盒说明书分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell，PBMC)，采用Countstar自动细胞计数仪收集PBMC，配制每100 μl含有25万个细胞的标准溶液500 μl备用。

实验方法：(1)检验步骤：①微孔培养板取出够数的8孔反应板条恢复至室温待用；②取出结核特异性抗原早期ESAT-6(抗原A)和CFP-10(抗原B)待用，准备好试剂、器材并做好实验各项准备工作；③每个检测样本需微孔培养板4孔，排列方式为空白对照孔→测试孔A→测试孔B→阳性质控对照孔；④每个空白对照孔加入50 μl细胞培养液，每个测试孔A加入50 μl抗原A溶液，每个测试孔B加入50 μl抗原B溶液，每个阳性质控对照孔加入50 μl植物血凝素(PHA)，每个反应孔加入100 μl细胞终溶液(含25万个活细胞)，后置于37 ℃培养箱孵育18 h。(2)斑点计数：①从培养箱中取出培养板，去除细胞培养液，恢复至室温；②采用磷酸盐缓冲液(PBS)反复洗涤3～4次，采用PBS 200倍稀释浓缩标记抗体试剂；③每个反应孔加入500 μl标记抗体工作液，在4～6 ℃下孵育1 h，后弃标记抗体工作液，PBS反复洗涤2～3次，每个反应孔加入50 μl底物显色溶液后室温孵育7 min；④采用去离子水彻底洗涤培养板终止反应，吹风或室温干燥培养板，记录每个反应孔内深蓝色清晰斑点数目。(3)阳性判断标准：空白对照孔斑点数≤5个，测试孔A或测试孔B斑点数≥6个，也判断为阳性；空白对照孔斑点数≥6个，测试孔A或测试孔B斑点数≥2倍空白对照孔斑点数，判断为阳性。

1.2.2 结核抗体试验 采集患者外周静脉血5 ml置于含有抗凝剂(肝素)的试管中(若采血后即刻进行试验则无需抗凝)，常规分离后取血清进行检测。采用广州健仓生物科技有限公司生产的结核分枝杆菌抗体诊断试剂盒(胶体金法)，严格按照试剂盒说明书进行操作，具体如下：(1)检测前试剂及标本恢复至室温；(2)从原包装袋中取出试剂(1 h内使用)，用加样环的环形体蘸取标本(约1.0 μl)垂直加于试剂的加样孔，后于缓冲液孔垂直滴加3滴(约120 μl)缓冲液，开始计时；(3)等待紫红色条带出现，测试结果需在5～10 min内读取，10 min后读取无效。结果判断：出现两条紫红色条带，一条位于测试区，另一条位于质控区，判断为阳性；仅质控区出现一条紫红色条带，测试区内无紫红色条带，判断为阴性。

1.3 观察指标 (1)比较T-SPOT.TB试验与结核抗体试验的阳性检出率。(2)T-SPOT.TB试验与结核抗体试验的诊断价值：计算T-SPOT.TB试验、结核抗体试验诊断肺外结核的灵敏度、特异度和诊断符合率；灵敏度=真阳性/(真阳性+假阴性)×100%，特异度=真阴性/(真阴性+假阳性)×100%，诊断符合率=(真阳性+真阴性)/总例数。(3)比较T-SPOT.TB试验与结核抗体试验诊断肺外结核的特异度、灵敏度和诊断符合率。

2 结果

2.1 阳性检出率 采用T-SPOT.TB试验检出肺外结核128例，阳性检出率为73.99%；采用结核抗体试验检出肺外结核108例，阳性检出率为62.43%。T-SPOT.TB试验对肺外结核的阳性检出率高于结核抗体试验，差异有统计学意义(χ2=6.358，P<0.05)。

2.2 诊断价值 T-SPOT.TB试验诊断肺外结核的灵敏度为99.20%，特异度为91.67%，诊断符合率为97.11%；结核抗体试验诊断肺外结核的灵敏度为81.60%，特异度为87.50%，诊断符合率为83.24%，详见表1、2。T-SPOT.TB试验诊断肺外结核的灵敏度、特异度、诊断符合率高于结核抗体试验，差异有统计学意义(χ2值分别为4.631、3.946、65.430，P<0.05)。

表1 T-SPOT.TB试验对肺外结核的诊断价值

表2 结核抗体试验对肺外结核的诊断价值

3 讨论

肺外结核是由结核分枝杆菌感染引起的慢性传染病，严重威胁患者的生命健康，早期诊断是保证治疗成功的关键。目前，临床诊断结核病的方法主要包括痰液标本细菌学检查、结核病影像学诊断、结核病免疫学诊断、结核分子生物学诊断、结核病介入诊断及结核病病理学诊断等[8]，其中痰液标本细菌学检查为肺外结核的诊断金标准[9]，但该方法检出率较低，敏感性较差，且不易区分结核分枝杆菌为活菌还是死菌；另外，痰液标本细菌学检查受患者资料的全面性、检查医师的经验及体液样本采集情况(如采集样本时患者未处于排菌窗口期或采集样本部位较浅等)等影响较大，增加了临床诊断的难度。

T-SPOT.TB试验与结核抗体试验是近年新兴起的肺外结核诊断方法，已广泛应用于临床。本研究中疑诊肺外结核患者采用T-SPOT.TB试验检测肺外结核的阳性检出率为73.99%，高于结核抗体试验的62.43%，与崔鲂等[10]、钟一鸣等[11]、刘晓莺等[12]、王凤平等[13]研究结果一致。提示与结核抗体试验相比，T-SPOT.TB试验可提高肺外结核的检出率。孙雯雯等[14]研究显示，T-SPOT.TB试验对肺外结核的阳性检出率为89.74%，高于本研究的73.99%，分析原因可能是由于研究样本量和研究对象选择差异造成的。本研究中T-SPOT.TB试验诊断肺外结核的灵敏度、特异度、诊断符合率均高于结核抗体试验，与万荣等[15]、郑臻等[16]、FERGUSON等[17]、ESCALANTE等[18]研究结果一致。提示T-SPOT.TB试验诊断肺外结核的诊断准确率较高，误诊率和漏诊率较低。

综上所述，T-SPOT.TB试验诊断肺外结核的灵敏度、特异度和诊断符合率高于结核抗体试验，值得临床推广应用。但本研究未分析T-SPOT.TB试验对肺外结核的鉴别诊断价值，仍有待进一步研究；另外，采用T-SPOT.TB试验诊断肺外结核仍存在误诊、漏诊情况，临床需根据实际情况采用T-SPOT.TB试验和结核抗体试验进行联合诊断，当两种方式诊断结果不一致时，临床医师根据患者具体情况做出最后判断，以降低漏诊率、误诊率。

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(本文编辑：李洁晨)

Diagnostic Value of T-SPOT.TB Test and Tuberculosis Antibody Test on Extrapulmonary Tuberculosis

ZHANGQiao-feng.HospitalofJiuyuanDistrict，Baotou，Baotou014060，China

Objective To analyze the diagnostic value of T-SPOT.TB test and tuberculosis antibody test on extrapulmonary tuberculosis.Methods From April 2014 to March 2016，a total of 173 suspected extrapulmonary tuberculosis patients were selected in the Hospital of Jiuyuan District，Baotou，finally 125 cases diagnosed as extrapulmonary tuberculosis，48 cases were not extrapulmonary tuberculosis；all of them received T-SPOT.TB test and tuberculosis antibody test，positive detection rate and diagnostic value were compared between the two methods.Results We take the bacteriological examination results of sputum specimen as the gold standard for extrapulmonary tuberculosis，the positive detection rate of T-SPOT.TB test was 73.99%，that was statistically significantly higher than of tuberculosis antibody test of 62.43%(P<0.05).The sensitivity of T-SPOT.TB test in diagnosing extrapulmonary tuberculosis was 99.20%，the specificity was 91.67%，the diagnostic accordance rate was 97.11%；the sensitivity of tuberculosis antibody test in diagnosing extrapulmonary tuberculosis was 81.60%，the specificity was 87.50%，the diagnostic accordance rate was 83.24%；the sensitivity，specificity and diagnostic accordance rate of T-SPOT.TB test was statistically significantly higher than that of tuberculosis antibody test in diagnosing extrapulmonary tuberculosis，respectively(P<0.05).Conclusion The sensitivity，specificity and diagnostic accordance rate of T-SPOT.TB test are statistically significantly higher than those of tuberculosis antibody test in diagnosing extrapulmonary tuberculosis.

Tuberculosis；T cells spot test of tuberculosis infection；Tuberculosis antibody；Diagnosis

014060内蒙古自治区包头市九原区医院

R 52

B

10.3969/j.issn.1008-5971.2016.10.022

2016-05-06；

2016-09-29)