花椒水煮液对炎症痛大鼠模型疼痛的影响

2016-12-23刘宏超

中国老年学杂志 2016年23期

关键词：热板压板生理盐水

刘宏超

(山西师范大学，山西临汾 041004)

花椒水煮液对炎症痛大鼠模型疼痛的影响

刘宏超

(山西师范大学，山西临汾 041004)

目的探讨不同浓度的花椒对炎症大鼠的镇痛作用。方法制备炎症大鼠模型，对炎症大鼠分别采用不同浓度花椒水煮液，灌胃5 ml，利用热板和压板测痛仪,采用行为学测痛的方法分别测试5、10、15、20、30、45和60 min大鼠后爪的缩爪反应潜伏期(HWL)作为痛觉调节标志，并与生理盐水进行比较。结果灌胃花椒水煮液后的大鼠HWL明显延长，痛阈值明显增加。其中灌注5 mg/ml花椒水煮液的炎症大鼠左右两爪的热刺激HWL均显著增大(P<0.001)，大鼠左爪的机械刺激HWL显著增加(P<0.001)，而大鼠右爪的机械刺激HWL明显增加(P<0.01)；10 mg/ml花椒水煮液炎症大鼠左爪的热刺激和机械刺激HWL均显著增大(P<0.001)，而大鼠右爪的热刺激和机械刺激HWL均明显增大(P<0.01)；20 mg/ml花椒水煮液炎症大鼠左右两爪的热刺激HWL均明显增大(P<0.01)，而大鼠左右两爪的机械刺激HWL均显著增加(P<0.001)；40 mg/ml花椒水煮液炎症大鼠左右两爪的热刺激和机械刺激HWL均显著增大(P<0.001)。花椒水煮液对炎症大鼠镇痛作用具有剂量依赖性，且在15 min时效果最为明显。结论花椒水煮液明显延长炎症大鼠的HWL，具有镇痛作用。

花椒水煮液；灌胃；炎症；镇痛

花椒又名秦椒或山椒等〔1〕，为芸香科、花椒属落叶灌木或小乔木，花椒不仅是很好的调味品，更是常用的中药材。花椒性温，味辛，有温中散寒、健胃除湿、解毒理气功效，其提取物有麻醉、抗菌、抗肿瘤、行气镇痛等多种药理作用〔2，3〕。目前国内外多是研究花椒的挥发油的镇痛作用，而花椒水煮液对鹿角菜胶处理的炎症大鼠镇痛作用的研究少见报道。本实验旨在探索花椒水煮液对炎症大鼠镇痛的作用。

1 材料与方法

1.1 实验材料 9只成年雄性大鼠，体重180～200 g, 由吉林大学白求恩医学院动物中心提供，整个实验期间均在饲养室分笼饲养，正常光照光暗周期各12 h，自由进食和饮水。饲养温度约(16～24)℃，相对湿度40%～50%，观察大鼠的状态，筛选出精神状态健康的大鼠。试剂药品有花椒(四川成都)、鹿角菜、生理盐水等。实验仪器有热板测痛仪(YLS-6B)，电子压痛仪(LYS-3E)，均由济南益延科技发展有限公司生产。0.1、5 ml注射器，智能电子天平，大小烧杯，手套，计时秒表等。

1.2 模型建立依据孙衍刚等〔4〕方法，训练时间1 w，选择达到实验要求的健康大鼠进行实验。为了减少实验误差，动物所处的受试环境，训练环境，技术操作要点应保持一致。

1.3 花椒水煮液的制备取花椒50 g与375 ml水混合加热水煮30 min后，过滤，封口包装待用。花椒干燥2.5 h，称量，计算出此次花椒水煮液的浓度。稀释制备出符合实验用的浓度，4℃冷藏备用。

1.4 受试物浓度的确定先取出9只大鼠，按估算量灌胃有明显反应，减半再测，以此反复测出最小浓度和最大浓度的测试量。

1.5 致炎剂的制备用精密仪器称取鹿角菜200 mg,加入生理盐水至10 ml。鹿角菜胶单独使用即可诱导局部组织炎症〔5〕，炎症过程在第一次注射后1 h内开始，动物后爪明显红肿等症状，这些症状一般能持续至第一次注射后12 h以上，24 h后基本复原。每次实验都需重新制备，测试前1 h，应向每一只大鼠的爪掌内皮下注射2%的致炎剂0.1 ml，使大鼠致炎。

1.6 痛阈测定和行为学观察向大鼠胃内灌注不同浓度花椒水煮液前，先测试大鼠的缩爪反应潜伏期(HWL)作为基础值，即空白对照。灌注花椒水煮液后各时间点的HWL以相对于基础值的变化百分比记录。为了避免对组织的损伤，应设定测试时间不超过15 s。在灌注花椒水煮液后特定的时间点(5、10、15、20、30、45和60 min)测量大鼠的HWL。①热板痛觉测试：将大鼠的待测后爪紧贴于预热温度维持在52℃的热板测痛仪上，待大鼠后爪感觉到疼痛，主动回缩离开热板时停止计时。记录数据，作为痛觉调节的标志。重复测定时应稍稍移动测定点，防止组织损伤。②压板痛觉测试：使用压力测痛仪对大鼠进行压力测试，使小楔形有机玻璃压在鼠爪的跗趾关节处，施加压力，待大鼠感觉到疼痛时，即后爪主动往回收缩，记录该压力值，作为痛觉调节的标志。

1.7 统计学方法采用SPSS17.0统计软件进行t、F检验。

2 结果

灌注5 mg/ml花椒水煮液炎症大鼠与生理盐水相比，左右两爪热刺激HWL均显著增大(P<0.001)，左爪机械刺激HWL显著增加(P<0.001)，而对右爪机械刺激HWL明显增加(P<0.01)；灌注10 mg/ml花椒水煮液炎症大鼠与生理盐水相比，大鼠左爪热刺激和机械刺激HWL均显著增加(P<0.001)，而右爪热刺激和机械刺激HWL均明显增大(P<0.01)；灌注20 mg/ml花椒水煮液炎症大鼠与生理盐水相比，大鼠左右爪热刺激HWL均明显增大(P<0.01)，而左右爪机械刺激HWL均显著增加(P<0.001)；灌注40 mg/ml花椒水煮液炎症大鼠与生理盐水相比，大鼠左右爪热刺激和机械刺激HWL均显著增大(P<0.001)。花椒水煮液对炎症大鼠镇痛作用具有剂量依赖性，且15 min时效果最明显，见表1。

组别部位HWL(s)灌胃5min10min15min20min30min45min60minF值P值5mg/ml热板测试花椒水煮液组左侧1.45±0.0415.11±4.4937.00±3.0641.10±3.7335.44±5.5819.58±5.8015.02±4.217.49±4.353)22.5966110.000469右侧2.96±0.077.77±2.3618.41±2.7822.21±2.8919.24±2.3911.26±2.567.01±2.28-1.80±2.463)34.6370550.000741生理盐水组左侧1.32±0.10-1.62±5.622.81±6.02-7.86±4.71-0.61±10.283.37±7.16-0.84±6.872.60±4.33右侧2.76±0.08-1.88±1.680.14±2.291.54±2.62-1.64±3.611.72±2.333.61±2.411.57±2.55压板测试花椒水煮液组左侧100.35±31.6612.71±2.3918.42±2.2420.17±2.5918.70±1.8313.11±2.607.16±1.182.01±0.852)39.0470170.000062右侧138.75±1.604.80±1.756.23±2.775.27±1.724.24±2.001.52±2.131.48±1.52-0.50±1.701)11.3366900.005601生理盐水组左侧87.76±27.830.06±4.92-1.63±3.39-2.98±4.13-4.17±3.130.71±7.855.29±5.434.46±4.80右侧133.56±1.33-2.84±2.441.21±1.33-1.35±2.07-2.91±1.700.82±2.062.59±1.68-0.05±2.2710mg/ml热板测试花椒水煮液组左侧1.41±0.0929.89±8.2462.21±8.7666.04±9.6152.57±9.0638.93±8.4521.20±4.289.89±3.023)22.9863690.000437右侧2.96±0.0410.53±2.1426.34±4.2236.62±4.7822.44±4.9712.92±1.749.08±1.663.25±0.842)11.1679490.005867生理盐水组左侧1.32±0.10-1.62±5.622.81±6.02-7.86±4.71-0.61±10.283.37±7.16-0.84±6.872.60±4.33右侧2.76±0.08-1.88±1.680.14±2.291.54±2.62-1.64±3.611.72±2.333.61±2.411.57±2.55压板测试花椒水煮液组左侧100.16±31.5318.11±4.1327.57±2.4730.03±2.9928.23±3.6022.43±2.9114.37±2.484.38±1.693)25.5986720.000280右侧14.2.36±1.104.19±1.608.78±2.0911.09±1.317.40±1.435.04±0.852.27±0.53-0.58±0.602)11.8647340.004853生理盐水组左侧87.76±27.830.06±4.92-1.63±3.39-2.98±4.13-4.17±3.130.71±7.855.29±5.434.46±4.80右侧133.56±1.33-2.84±2.441.21±1.33-1.35±2.07-2.91±1.700.82±2.062.59±1.68-0.05±2.2720mg/ml热板测试花椒水煮液组右侧1.20±0.0646.93±6.1672.46±14.6174.29±5.7451.61±9.9428.77±8.8020.65±12.6711.78±9.012)21.0924400.001618左侧2.89±0.0529.72±4.3930.05±5.8938.64±3.5332.64±6.238.68±3.494.73±4.255.04±2.392)13.3773210.003281生理盐水组左侧1.32±0.10-1.62±5.622.81±6.02-7.86±4.71-0.61±10.283.37±7.16-0.84±6.872.60±4.33右侧2.76±0.08-1.88±1.680.14±2.291.54±2.62-1.64±3.611.72±2.333.61±2.411.57±2.55压板测试花椒水煮液组左侧91.28±28.9830.48±3.7244.74±3.8950.56±2.4936.70±3.0929.81±4.6418.47±2.1011.49±2.813)25.2227770.000298右侧138.41±2.329.27±1.4712.95±2.9419.91±2.2013.78±2.7412.63±3.827.83±1.903.00±1.643)19.7071030.000807生理盐水组左侧87.76±27.830.06±4.92-1.63±3.39-2.98±4.13-4.17±3.130.71±7.855.29±5.434.46±4.80右侧133.56±1.33-2.84±2.441.21±1.33-1.35±2.07-2.91±1.700.82±2.062.59±1.68-0.05±2.2740mg/ml热板测试花椒水煮液组左侧1.32±0.0753.64±7.3984.28±16.6582.69±13.1565.42±8.0345.02±5.7927.70±6.2920.85±7.593)26.4068270.000245右侧2.87±0.0537.75±5.6554.33±6.0761.14±5.6550.59±5.8224.04±7.7017.42±5.9714.27±5.563)19.9099180.000776生理盐水组左侧1.32±0.10-1.62±5.622.81±6.02-7.86±4.71-0.61±10.283.37±7.16-0.84±6.872.60±4.33右侧2.76±0.08-1.88±1.680.14±2.291.54±2.62-1.64±3.611.72±2.333.61±2.411.57±2.55压板测试花椒水煮液组左侧91.91±28.9139.43±5.6048.67±7.2654.15±6.5346.85±7.4737.26±7.0816.05±6.7812.87±5.213)32.1326370.000104右侧138.92±1.8023.83±3.2227.54±3.3731.36±4.1226.45±4.4420.64±2.767.64±3.451.03±2.753)24.6622640.000327生理盐水组左侧87.76±27.830.06±4.92-1.63±3.39-2.98±4.13-4.17±3.130.71±7.855.29±5.434.46±4.80右侧133.56±1.33-2.84±2.441.21±1.33-1.35±2.07-2.91±1.700.82±2.062.59±1.68-0.05±2.27

与生理盐水相比:1)P<0.05，2)P<0.01，3)P<0.001

3 讨论

炎症所致的疼痛是一种复杂的生理活动，慢性痛是临床上最常见的症状之一，是一种信号，可促使生物体采取应激行为〔6〕。而某些长期的剧烈疼痛，对机体已成为一种难以忍受的折磨。传统镇痛药虽然镇痛效果显著，但严重的毒副作用和成瘾性限制了其使用〔7〕。梁辉等〔8〕研究表明，花椒的化学成分很复杂，主要包括挥发油、生物碱、酰胺、黄酮、烃类和脂肪酸类等，药理作用的研究主要集中在挥发油、生物碱等物质上〔9〕。花椒的镇痛作用与生物碱有关〔10〕，汪倪萍等〔11〕发现生物碱能明显抑制鹿角菜胶所致的足肿胀，减少炎症渗出物中的前列腺素E(PGE)含量〔12〕。赵秀玲〔13〕研究发现花椒中所含的茵芋碱是镇痛的有效成分。花椒水提液能对抗角叉莱胶引起的大鼠足趾肿胀〔14〕。临床上有学者用花椒挥发油等代替丁香油对龋齿进行消炎止痛〔15〕。综上，花椒水煮液生物碱等成分确实对炎症大鼠有镇痛作用，但其他成分是否参与镇痛作用有待研究。

1 臧林泉，胡枫，韦敏，等. 花椒挥发油抗肿瘤药理作用研究〔J〕. 蛇志，2006；18(3)：183-6.

2 欧阳杰湖，潘善庆，陈子渊. 刺壳花椒提取物消炎镇痛作用的实验研究〔J〕. 中医药导报，2009；14(12)：71-3.

3 石雪萍，张卫明，张鸣镝，等.花椒总生物碱镇痛、抗炎、止痒作用研究〔J〕.中国野生植物资源，2011；30(1)：46.

4 孙衍刚，于龙川. 甘丙肽参与痛觉调制的研究进展〔J〕. 中国疼痛医学杂志，2005；10(4)：228-30.

5 耿成燕，宫德正，姜丽平，等. 橄榄叶提取物对大鼠急性炎症和痛觉过敏的研究〔J〕. 天然产物研究与开发，2011；23(5)：931-4.

6 史妙，王宁，王锦琰，等.疼痛的心理学相关研究进展〔J〕.中华护理杂志，2009；44(6)：574-6.

7 袁娟丽.花椒挥发油的抗炎、镇痛作用〔J〕.中药材，2010；33(5)：794-7.

8 梁辉，赵镭，杨静，等.花椒化学成分及药理作用的研究进展〔J〕.华西药学杂志，2014；29(1)：91-4.

9 孙小文，段志兴.花椒属药用植物研究〔J〕.进展药学学报，1996；31(3)：231-40.

10 祝丹，郑桐，陈玉，等. 野花椒化学成分研究〔J〕. 华中师范大学学报，2009；43(3)：424-7.

11 汪倪萍，魏伟.中药活性成分的抗炎免疫和镇痛作用〔J〕.中国药理学通报，2003；19(4)：366-9.

12 宋友之，黄亚男，霍海如.中药及天然药物在肿瘤镇痛中的研究进展〔J〕.中国中医基础医学杂志，2014；20(10)：1451-3.