地黄饮子对急性脑缺血大鼠的学习记忆能力的影响*

刘帮慧

(荆州市中心医院, 湖北 荆州 434022)



地黄饮子对急性脑缺血大鼠的学习记忆能力的影响*

刘帮慧

(荆州市中心医院, 湖北 荆州 434022)

目的： 探讨地黄饮子对急性脑缺血大鼠的学习记忆能力影响。方法：选取Wistar大鼠72只随机均分为实验1组、实验2组、模型组和正常对照组，前3组大鼠复制急性脑缺血模型，正常对照组大鼠手术但不给予脑缺血；实验1组造模后每日灌服地黄饮子汤36 g/kg，实验2组造模后每日灌服尼莫地平12.5 mg/kg，模型组和正常对照组造模后1次/d盐水灌胃，各组大鼠连续灌胃3周；所有大鼠进行Morris水迷宫定位航行实验记录逃避潜伏期测试学习能力，跳台实验记录逃避潜伏期评价记忆能力，并用电镜图像分析系统计算4组大鼠脑梗死面积。结果：与正常对照组比较，模型组大鼠定位航行实验潜伏期明显延长，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，实验1组和实验2组大鼠的定位航行实验潜伏期明显缩短，差异有统计学意义(P<0.05)；与正常对照组比较，模型组大鼠跳台实验潜伏期明显延长，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，实验1组和实验2组大鼠的跳台实验潜伏期明显缩短，差异有统计学意义(P<0.05)；实验1组脑梗死面积明显小于模型组和实验2组，差异有统计学意义(P<0.05)。结论：地黄饮子可以提高脑缺血再灌注大鼠的学习能力和记忆能力，减少缺血对脑组织神经元的损伤。

脑缺血再灌注； 大鼠； 学习记忆能力

缺血性脑血管病是当今危害人类健康的最常见的疾病，占我国全部脑卒中患者的75%，目前已经成为我国心脑血管疾病的第一大死亡原因[1-2]。急性脑缺血使大脑神经受损，神经功能缺失，神经生长因子受抑制，严重者可导致残疾和死亡[3-4]。地黄饮子具有驱毒化瘀、滋肾阴、补肾阳的功效，有促进脑神经功能恢复的功效,对治疗缺血性脑血管病、血管性痴呆、脑萎缩、阿尔茨海默病等有一定疗效[5]。本文通过建立脑缺血大鼠模型，研究地黄饮子对大鼠学习记忆能力及脑梗死面积的影响，为地黄饮子治疗缺血性脑血管病的临床研究提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 动物分组

健康清洁级Wistar大鼠72只，雌雄不限，体重250～280 g，由中国医科大学动物部提供，动物合格证号为SCXK-LN2014-0009。72只大鼠随机分为实验1组、实验2组、正常组和模型组，各18只。前3组大鼠复制急性脑缺血模型，正常对照组大鼠手术但不给予脑缺血。实验1组大鼠造模后每日灌服地黄饮子汤36 g/kg，实验2组在造模后每日灌服尼莫地平12.5 mg/kg，模型组在造模后、正常对照组大鼠在手术后给予盐水灌胃1 次/d，各组大鼠均每天灌胃1次，连续3周。

1.2 急性脑缺血大鼠模型

用10%水合氯醛麻醉大鼠，固定后颈部正中切开，分离出双侧颈总动脉并用动脉夹钳夹30 min，用温盐水纱布保护切口创面，松开动脉夹30 min后，再次用动脉夹钳夹30 min，复制大鼠急性脑缺血模型。

1.3 药物与仪器

按照《黄帝素问宣明论方》配制地黄饮子：熟地黄12 g，巴戟天15 g,白茯苓12 g,山茱萸15 g,石斛15 g,菖蒲12 g,炮附子15 g,麦门冬15 g,肉苁蓉15 g,五味子10 g,官桂10 g,远志10 g；用12倍量和10倍量水煎煮2次，每次1 h，将两次药液混合，用旋转仪蒸发浓缩，干燥密封备用。尼莫地平(天津中央药业公司生产，批号20130067,20 mg/片),注射用水溶解。中国医科大学实验动物中心提供Morris水迷宫实验记录仪、YLS-3T跳台试录仪和OLYMPUS光学显微镜。

1.4 检测大鼠学习、记忆能力

各组大鼠治疗或(和)喂养3周后，进行定位航行实验和跳台实验。定位航行实验训练场地为圆形水池，分为4个象限，平台置于第Ⅲ象限水面下，实验时水温保持在24 ℃；在实验前1天将大鼠放入水池中适应环境2 min；第2天开始实验，将每只大鼠分别从Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ象限面向水池壁放入水池，水池上端的摄影机记录大鼠的游泳轨迹及站上平台的时间(逃避潜伏期)，撤去平台，再重复上述实验1次。同时记录大鼠寻找平台错误次数连续训练4 d。4 d后进行跳台实验，实验前1天将大鼠放在平台上适应环境5 min后通电，观察大鼠双足同时跳上绝缘台，每只大鼠训练3 min；第2天开始测试每只大鼠在3 min内跳上绝缘台的次数，并算出跳台时间(潜伏期)，连续训练4 d。

1.5 测量大鼠脑梗死面积

定位航行实验和跳台实验后，腹腔麻醉断头取脑，盐水冲洗大脑并吸干，将大脑冠状切片，加入1% 2.3.5-三苯基四氮唑的磷酸缓冲液中，避光30 min，间隔6 min转动1次，把脑片放在电镜图像分析系统中，计算脑梗死面积，脑梗死=(白色的梗死面积/片子的总面积)×100%。

1.6 统计学分析

2 结果

2.1 定位航行实验

与正常对照组比较，模型组大鼠的定位航行实验潜伏期明显延长，差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较，实验1组和实验2组大鼠的定位航行实验潜伏期明显缩短，差异有统计学意义(P<0.05)，提示地黄饮子汤和尼莫地平可改善脑缺血大鼠学习能力。见表1。

2.2 跳台实验

跳台实验结果显示：与对照组比较，模型组大鼠跳台实验潜伏期明显延长，差异有统计学意义(P<0.05)；与模型组比较，实验1组和实验2组大鼠的跳台实验潜伏期明显缩短，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

Tab.1 The escape latency in positioning navigation experiment in each group

(1)与模型组比较，P<0.05；(2)与正常对照组比较，P<0.05

Tab.2 The step-down test latency in each group

2.3 脑梗死面积

实验1组和实验2组脑梗死面积明显小于模型组，差异有统计学意(P<0.05)。实验1组脑梗死面积明显小于实验2组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表3。

表3 各组大鼠脑梗死面积

Tab.3 Cerebral infarction area of rats in each group

(1)与模型组比较，P<0.05；(2)与实验2组比较，P<0.05

3 讨论

近年来，缺血性脑血管病占脑血管病总数的80%，其发病率极高。中医对缺血性脑血管病引起的中风理论新学说“毒损脑络”，认为毒邪损伤了脑络导致中风发作，络脉破损或拘挛瘀闭，由气血渗灌失常导致[6]。地黄饮子治疗缺血性脑血管病实验研究结果表明，地黄饮子可以明显提高学习能力和记忆能力，改善脑部的能量代谢，减少炎症损伤等作用[7-9]。

本研究使大鼠脑部发生急性缺血状态，通过分组治疗，测试4组大鼠定位航行实验和跳台实验的潜伏期时间，结果可见地黄饮子和尼莫地平的潜伏期均明显缩短；通过脑梗死面积的比较得出，地黄饮子的疗效明显优于尼莫地平。有研究发现，地黄饮子可以显著提高脑组织中抗氧能力，氧化应激的能力和学习功能，通过不同剂量的地黄饮子临床研究得出，高剂量的地黄饮子明显提高大鼠脑内抗氧化酶的活性，减少细胞凋亡和氧化损伤，延缓大脑老化，保护脑细胞的功能[10-11]，这与本实验研究结果一致。地黄饮子能降低脑细胞的过氧化反应，提高神经细胞的神经元超氧化物歧化酶SOD活性，提高机体清除过多的氧自由基能力，减少过氧化反应造成的损伤，维持细胞正常功能，因此地黄饮子治疗脑缺血损伤的主要保护机制是增加SOD活性，降低氧自由基含量，修复受损的脑细胞[12-13]。

综上所述，脑缺血再灌注大鼠经地黄饮子治疗后，可以提高学习能力和记忆能力，减少脑组织神经元受损，增加神经细胞的抗氧化能力，为临床上治疗缺血性脑血管病提供理论依据。

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(2016-08-11收稿，2016-11-04修回)

中文编辑： 文箐颍； 英文编辑： 刘 华

The Effect of Rehmannia Yinzi on Learning and Memory Ability of Acute Cerebral Ischemia Rats

LIU Banghui

(JingzhouCentralHospitalofHubeiProvince,Jingzhou434022,Hubei,China)

Objective: To explore the effect of Rehmannia YinZi on learning and memory ability of acute cerebral ischemia rats. Methods: 72 Wistar rats were randomly divided into experimental group 1, experimental group 2, model group and normal control group. The acute cerebral ischemia model was established in the first 3 groups of rats while the normal control group did not received cerebral ischemia surgery. Experiment 1group received daily intragastric administration of Dihuangyinzi Decoction (36 g/kg) after modeling, experimental group 2 received daily intragastric administration of nimodipine (12.5 mg/kg) after modeling, and model group and normal control group received 1/d saline after modeling. All rats were administered orally for 3 consecutive weeks. All rats were subjected to Morris water maze navigation experiment to for memory capacity evaluation. Electron microscope image analysis system was adopted to calculate cerebral infarction area for the 4 groups of rats. Results: Compared with normal control group, the experimental latency of model group was significantly prolonged, and the difference was statistically significant (P<0.05). Compared with model group, the experimental latency in experimental group 1 and experimental 2 were significantly shortened, the difference was statistically significant (P<0.05). Compared with normal control group, the step-down test latency of rats in model group was significantly increased, and the difference was statistically significant (P<0.05). Compared with model group, the step-down test latency of experimental group 1 and experimental group 2 rats were significantly shorter, and the difference was statistically significant (P<0.05); The cerebral infarction area in experimental group1 was significantly smaller than the that of model group and experimental group 2, and the difference was statistically significant (P<0.05). Conclusion: Rehmannia YinZi can improve learning and memory ability of cerebral ischemia reperfusion rats, and reduce the damage of brain neurons resulted from ischemia.

cerebral ischemia reperfusion; rats; learning and memory ability

时间：2016-11-15

http://www.cnki.net/kcms/detail/52.1164.R.20161115.1757.013.html

R286.1

A

1000-2707(2016)11-1297-04

10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.11.013