瘤果黑种草子对小鼠急性酒精性肝损伤的影响*

于世博， 孔祥耀， 陈明翠， 任文凯， 袁桃花， 吴 宁

(1.贵州医科大学， 贵州 贵阳 550004； 2.贵州医科大学 基础医学院 生物化学与分子生物学教研室， 贵州 贵阳 550004)



瘤果黑种草子对小鼠急性酒精性肝损伤的影响*

于世博1， 孔祥耀1， 陈明翠1， 任文凯1， 袁桃花1， 吴 宁2*

(1.贵州医科大学， 贵州 贵阳 550004； 2.贵州医科大学 基础医学院 生物化学与分子生物学教研室， 贵州 贵阳 550004)

目的： 探讨瘤果黑种草子对小鼠急性酒精性肝损伤的影响。方法：50只昆明小鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组及瘤果黑种草子高、低剂量组，除正常对照组外，其余各组给予56度白酒(10 mL/kg)灌胃建立急性酒精性肝损伤模型，正常对照组给予等量生理盐水；灌胃同时，阳性对照组灌胃葵花护肝宁，瘤果黑种草子高、低剂量组分别灌胃黑种草子水提液6 g/kg或2 g/kg进行灌胃，连续10 d，灌胃期间观察小鼠的体重、精神、活动及毛色等情况；最后一次灌胃后10 h时取血检测小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)的水平，同时称取小鼠体质量和肝脏质量，计算肝指数，观察小鼠肝组织外观及肝组织病理学改变。结果：与正常对照组比较，模型组小鼠体重减轻，嗜睡，毛发光泽度下降；瘤果黑种草子组小鼠情况明显改善，小鼠毛发光滑整齐，体质量增长恢复正常，高剂量组最为明显；小鼠体质量和肝指数比较，模型组低于正常对照组，瘤果黑种草子组高于模型组 (P<0.05)；血清ALT及AST活性比较，模型组高于正常对照组，瘤果黑种草子组低于模型组 (P<0.05)；模型组小鼠肝组织外观呈黄褐色、正常对照组呈红褐色，瘤果黑种草子组介于两组之间，高剂量组更接近正常对照组；HE染色结果显示，模型组小鼠肝细胞明显气球样变性、坏死，并伴有少量炎症细胞浸润；与模型组比较，高剂量瘤果黑种草子组小鼠肝细胞的病理学改变减轻。结论：高剂量瘤果黑种草子水提液对小鼠急性酒精性肝损伤有保护作用。

肝疾病，酒精性； 小鼠； 肝； 肝功能试验； 瘤果黑种草子； 维吾尔族药物

维药瘤果黑种草子是我国新疆维吾尔族的传统常用药材，具有抗肿瘤、镇痛、抗炎、抗氧化、抗血小板聚集及抗菌等功效[1-4]。目前，国内外对维药瘤果黑种草子的研究较少，多集中于其抗肿瘤及抗氧化作用，但对民间流传的良好保肝效果却鲜有报道。本研究通过建立急性酒精性肝损伤小鼠模型，观察瘤果黑种草子对小鼠急性酒精性肝损伤的影响，为瘤果黑种草子的临床应用提供一定的实验与理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物、仪器、药品与试剂

昆明小鼠，雌雄各半，清洁级，体质量为19～24 g。由贵州医科大学动物管理中心提供，合格证号SCXK(黔)2012-001 。仪器主要有7150型全自动生化分析仪(日本日立)、RM2015型石蜡切片机(德国莱卡)、BX51T-PHD-J11型显微镜(日本奥林巴斯)、多功能真彩色细胞图象分析管理系统(美国Media Cybernetics公司)， 瘤果黑种草子购于新疆维吾尔民族医院。红星牌56度白酒(北京红星二锅头股份有限公司)、血清ALT、AST检测试剂盒(南京建成生物工程研究所)、葵花护肝片(北京葵花药业)。

1.2 方法

1.2.1 小鼠肝损伤模型及分组 50只昆明小鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组及瘤果黑种草子高、低剂量组。除正常对照组外，其余各组小鼠每日下午给予56度白酒(10 mL/kg)灌胃，建立急性酒精性肝损伤模型，正常对照组小鼠给予等量生理盐水，阳性对照组给予葵花护肝宁，瘤果黑种草子组分别给予黑种草子水提液6 g/kg或2 g/kg进行灌胃，连续10 d。

1.2.2 检测指标 实验期间观察各组小鼠活动状态、毛色、体质量、饮食等一般状态；末次给予白酒灌胃后禁食不禁水10 h，取血清测定谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性；迅速取出肝脏称重，计算肝指数(肝指数=肝重/体质量)；取肝右叶用10%甲醛固定，石蜡包埋切片HE染色，观察其病理变化。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 一般情况

正常对照组比较，模型组小鼠体质量减轻，嗜睡，毛发光泽度下降，并伴有反应迟钝，活动及进食减少，腹部肿胀等症状；与模型组比较，瘤果黑种草子组小鼠情况均有明显改善，毛发光滑整齐，体质量增长恢复正常，其中高剂量组最为明显。

2.2 小鼠体质量、肝指数和血清ALT及AST活性

小鼠体质量和肝指数比较，模型组低于正常对照组，瘤果黑种草子组高于模型组，差异有统计学意义(P<0.05)；血清ALT及AST活性比较，模型组高于正常对照组，瘤果黑种草子组低于模型组，差异有统计学意义(P<0.05)；见表1。

Tab.1 Body mass and liver index of mice in each group

与正常对照组比较，(1)P<0.01,(2)P<0.05 ；与模型组比较，(3)P<0.05,(4)P<0.01

2.3 小鼠肝组织外观及HE染色

正常对照组小鼠肝组织外观呈红褐色且具有明显光泽，触之感觉柔软且富有弹性；模型组小鼠肝组织外观呈黄褐色，少数呈深红色及灰白色，触之感觉质地较硬且缺少弹性；瘤果黑种草子组肝脏外观介于模型组与正常对照组之间，其中高剂量组更接近于正常对照组。HE染色后，镜下可见正常对照组肝细胞完整，肝小叶结构清晰，多数为单核，少见双核及多核；模型组小鼠肝细胞肿胀，并伴有气球样变，肝小叶结构不清晰，肝细胞排列混乱，部分肝细胞伴有少量炎症细胞浸润；阳性对照组及瘤果黑种草子组仅部分细胞可见气球样变性及少量点状坏死，其中瘤果黑种草子高剂量组改善最为明显。见图1。

注：A为正常对照组，B为模型组， C、D分别为瘤果黑种草子高剂量及低剂量组，E为阳性对照组

3 讨论

肝脏是酒精在体内代谢的重要脏器，过量的饮酒会造成肝脏组织不同程度的损伤。酒精性肝损伤为继病毒性肝炎后的一种多发的肝损伤疾病[5]。天然保肝类药物的研发已成为业界的研究热点之一。近年来，一些民族中草药从多角度、多靶点治疗酒精性肝损伤的效果已逐渐得到认可[6-10]。瘤果黑种草子作为我国新疆维吾尔族常用的药材，具有抗氧化，抗炎等多种功效，当地居民常用来帮助消化、固齿、抗肿瘤及提高机体免疫力[11-12]。本研究模拟人类急性酒精中毒肝脏损伤过程，采用连续高剂量饮酒方法给小鼠每天灌胃高度白酒，随着酒精灌胃时间的延长，发现模型组小鼠皮毛光泽度变差，体质量下降，明显低于对照组，表明过量饮酒导致的小鼠食欲和吸收功能降低，易造成小鼠营养不良。

ALT和AST时肝损伤疾病的敏感指标，主要存在于细胞浆内，AST还存在于线粒体中，当肝细胞严重受损时，因肝细胞通透性增加，胞浆内的ALT及线粒体内的AST则释放入血，导致血液中的ALT及AST的表达水平大幅升高[6]。因此，血清ALT及AST的含量可作为衡量酒精性肝损伤的重要指标。本研究发现，与模型组比较，瘤果黑种草子组小鼠一般情况均有明显改善，毛发光滑整齐，体质量恢复正常，其中高剂量组最为明显。除此之外，本实验还通过检验小鼠血清ALT及AST的含量变化及观察小鼠肝组织外观和病理切片来进一步验证瘤果黑种草子对急性酒精性肝损伤小鼠的影响。结果显示，模型组小鼠血清ALT和AST水平明显升高，肝脏出现明显的小叶组织破坏及肝细胞的气球样变，说明小鼠急性酒精性肝脏损伤模型建立成功。而与模型组相比，瘤果黑种草子均能提高小鼠肝脏重量及肝脏指数，并减缓ALT及AST升高的趋势，以瘤果黑种草子高剂量组结果最为明显，而低剂量组次之；进一步观察小鼠肝脏组织病理学切片，发现高剂量瘤果黑种草子能够明显减轻急性酒精性肝损伤小鼠肝小叶结构的破坏及肝细胞的气球样变，肿胀及坏死。随着瘤果黑种草子剂量的减少，其治疗作用也逐步减弱。

综上所述，瘤果黑种草子能延缓小鼠急性酒精性肝损伤，但因本研究瘤果黑种草子不同剂量对各效应指标的影响尚未呈现一致性的剂量效应关系，有关瘤果黑种草子对小鼠急性酒精性肝损伤干预的最佳有效剂量和确切作用机制还有待进一步研究。

[1] 章丹丹，凌 霜，张洪平，等.黑种草子不同分组抑制亚硝酸盐积累，血小板聚集和血管收缩的体外实验研究[J].中成药, 2013(7)：1375-1380.

[2] 耿东升，赵丽萍，史荣梅，等.维药瘤果黑种草子总皂苷镇咳祛痰及抗炎作用研究[J].新疆医科大学学报, 2013(7)：908-911.

[3] 章丹丹，聂绪强，潘会君，等.黑种草子总皂苷对炎症介质及 ERK/M APK信号转导通路的影响[J].中国中药杂志, 2010(19)：2594-2597.

[4] 张瑞，庄宇娇，邢军.新疆特色药食两用植物黑种草籽活性分粗提物抗氧化作用研究[J].食品工业, 2011(3)：14-16．

[5] 庄辉.酒精性肝病的流行病学[J].中华肝脏病杂志, 2003(11)：698.

[6] 段雪琳,韦燕飞,廖丹,等.白花丹水煎液对四氯化碳诱导肝纤维化大鼠的干预作用[J].世界华人消化杂志, 2015(07) ：1543-1547.

[7] 刘珺,徐选福,郭传勇,等.贝母辛抗大鼠肝纤维化的作用研究[J].中草药， 2013(11)：1179-1181.

[8] 曹芹芳,虞涤霞,王密,等.肝泰胶囊对大鼠乙醇性肝纤维化的治疗作用[J].华中科技大学学报:医学版, 2013(1)：108-110

[9] 柯勇，孙学蓉，任雪梅，等.硫普罗宁与复方丹参注射液联合治疗酒精性肝病[J]. 贵阳医学院学报, 2009(4) : 821-823.

[10]李素婷,陈龙,王冉,等.山楂叶总黄酮对鼠急性酒精性肝损伤保护作用的实验研究[J].时珍国医国药, 2012(11)：2903-2904.

[11]信学雷,薛慧清,阿吉艾克拜尔·艾萨,等.黑种草属植物研究进展[J].时珍国医国药, 2008(6)：1514-1517.

[12]信学雷,汪汉卿,阿吉艾克拜尔·艾萨.维药瘤果黑种草籽化学成分研究[J].天然产物研究与开发, 2012(07)：1443-1445.

(2016-07-17收稿，2016-10-20修回)

中文编辑： 吴昌学； 英文编辑： 刘 华

The Influence of Nigellae Semen to Acute Alcoholic Liver Damage Mice

YU Shibo1, KONG Xiangyao1, CHEN Mingcui1, REN Wenkai1， YUAN Taohua1, WU Ning2

(1.GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China; 2.DepartmentofBiochemistryandmolecularbiology,GuizhouMedicalUniversity,Guiyang550004,Guizhou,China)

Objective: To explore the effects of seeds of Uygur medicine Nigella glandulifera freyn on acute alcoholic liver damage of mice. Methods: 50 mice were randomly divided into control group, model group, the positive control group, high dose of Nigella water extract group(6 g/kg), and low dose of Nigella semen water extract group(2 g/kg). The normal group received saline of equal volume while the other groups were orally administered daily 56 degree liquor of 10 mL/kg to establish a model of acute alcoholic liver injury. When intragastric administration was going on, the positive control group received gavage of sunflower Huganning, while Nigella glandulifera freyn group were given intragastric administration of Nigella seeds water extract 6 g/kg(high dose) or 2 g/kg(low dose) for 10 d. The body weight, spirit, activity and hair color of mice were observed during the period of gavage. 10 h after the last intragastric administration, serum of mice was collected to detect serum glutamic pyruvic transaminase (ALT), aspartate aminotransferase (AST) levels. At the same time, the mice body weight and liver weight were measured to calculate liver index and the liver tissue appearance and the pathological changes of liver tissue were observed. Results: Compared with the normal control group, model group mice showed weight loss, sleepiness, hair gloss drop. The situation of mice in Nigella glandulifera freyn group were significantly improved. Their mouse hair was smooth, body weight increased and returned to normal with high dosage groups being better. The body weight and liver index of mice in model group were lower than their counterparts of normal control group while the body weight and liver index in Nigella glandulifera freyn group were higher than their counterparts of model group (P<0.05). The serum ALT and AST activity in model group were lower than their counterparts of normal control group while the serum ALT and AST activity in Nigella glandulifera freyn group were higher than their counterparts in model group (P<0.05). The liver tissue appearance of model group was brown while normal control group reddish brown. The appearance of Nigella glandulifera freyn group was between model group and normal control group, with the high dose group closer to the normal control group. He staining results showed that mice hepatic cells of model group showed significant ballooning degeneration and necrosis, accompanied by a small amount of inflammatory cell infiltration. Compared with model group, the pathological changes of mice liver cell of high dose of Nigella glandulifera freyn was alleviated. Conclusion: High dose of Nigella glandulifera freyn water extract has a protective effect on acute liver injury in mice.

liver diseases,alcoholic; mice; liver; liver function tests; nigellae semen; Uygur medicine

�� E-mail:1638210715@qq.com

时间：2016-11-15 网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/52.1164.R.20161115.1757.024.html

R29； R285.5

A

1000-2707(2016)11-1288-04

10.19367/j.cnki.1000-2707.2016.11.011