板蓝根制剂制备过程中成分变化及其药效相关性研究

曹　奎（广西玉林北流市城南街道社区卫生服务中心北流537400）

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板蓝根制剂制备过程中成分变化及其药效相关性研究

曹奎（广西玉林北流市城南街道社区卫生服务中心北流537400）

目的：探讨研究板蓝根制剂制备过程中成分变化及其药效相关性。方法：对板蓝根制剂的制备过程进行模拟，测定制备过程中各阶段的成分质量、中间体溶液抗氧化活性分析成分质量分数-药效活性数据的相关性。结果：在板蓝根制剂制备过程中，药物制剂的化学成分质量分数与抗氧化活性呈降低趋势，尤其是在热处理环节的损失较大，相关性分析显示鸟苷、腺苷及靛玉红这三者的质量分数与羟基自由基清除率呈正相关。结论：在板蓝根制剂制备过程中，操作水平显著影响其指标组分质量分数和药效，尤其是浓缩干燥环节的影响最大，鸟苷、腺苷及靛玉红是使药物发挥抗氧化活性的重要成分。

板蓝根 板蓝根制剂 制备过程 成分变化 药效 相关性

板蓝根制剂的制备过程包括提取、浓缩、醇沉、干燥及制粒等多个环节，每个环节的操作都可能会影响最终药效的发挥。为了研究板蓝根制剂制备过程中成分变化及其药效相关性，笔者对板蓝根制剂的制备过程进行了模拟，并进行了实验测定。

1　仪器与材料

本次实验采用了安捷伦科技有限公司生产的Agilent 1260型高效液相色谱仪、德国赛多利斯集团生产的电子分析天平、江苏康健医疗用品有限公司生产的XH-B型漩涡混合器、鄄城华鲁电热仪器有限公司生产的电热套、上海爱朗仪器有限公司生产的QSB-2000油浴锅、昆山市超声仪器有限公司生产的KQ5200型超声波清洗器、郑州长城科工贸有限公司生产的SHB-III循环水式多用真空泵。对照品采用了鸟苷、尿苷、腺苷、告依春及靛玉红各20mg，质量分数均≥98％；以及糊精、过氧化氢、水杨酸、七水合硫酸亚铁、色谱乙腈、双蒸馏水等。其他试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1成分质量分数测定

2.1.1样品的制备：称取板蓝根25g，加入250mL水煎煮回流提取两次，第一次2h、第二次1h，将两次滤液合并，然后将所得提取液减压浓缩至一定体积，加入乙醇直至含醇量60％，静置一段时间后取上清液，将乙醇回收并浓缩至25mL，取10mL浓缩液继续浓缩至恒定质量，得到干膏样品，以20mL甲醇进行溶解，再取10mL浓缩至流浸膏状态，加入糊精制成颗粒，得到提取液、浓缩液、干膏及颗粒4项样品。各个环节所取的溶液均以微孔滤膜滤过，从而得到样品溶液。

2.1.2对照品样品的制备：称取11.7mg尿苷、9.7mg鸟苷、13.5mg腺苷、12.0mg告依春、12.4mg靛玉红，置于100mL瓶中，以双蒸水超声溶解核苷类成分，以甲醇溶解告依春和靛玉红，定容摇匀，配制成0.117mg/mL尿苷、0.097mg/mL鸟苷、0.135mg/mL腺苷、0.120mg/mL告依春、0.124mg/mL靛玉红，于4℃下保存备用。2.1.3色谱条件：色谱柱为Gemini C18110A柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相为乙腈-水，体积流量为1mL/min，柱温为30℃，检测波长为245nm，进样量为20μL。

2.1.4线性关系考察：取适量对照品样品置于10mL瓶中进行溶解稀释，取其中1mL以微孔滤膜滤过，按照色谱条件分别进样，记录质量浓度（X）、峰面积积分值（Y），分析后得到各成分的回归方程、相关系数及线性范围，结果示尿苷在2.34～29.25μg/mL、鸟苷在1.91～24.25μg/mL、腺苷在2.7～33.75μg/mL、告依春在2.4～30.0μg/mL、靛玉红在12.4～37.2μg/mL，线性关系良好。

2.1.5精密度试验：精密吸取对照品样品20μL，按照色谱条件重复进样6次，结果示尿苷的峰面积RSD为1.56％、鸟苷为2.47％、腺苷为2.67％、告依春为1.24％、靛玉红为2.63％，均＜3％，证明精密度良好。

2.1.6稳定性试验：精密吸取对照品样品20μL，按照色谱条件进样，每隔4h测定一次，共监测24h，结果示尿苷的峰面积RSD为1.30％、鸟苷为1.67％、腺苷为2.86％、告依春为0.44％、靛玉红为1.80％，均＜3％，证明稳定性良好。

2.1.7重复性试验：精密吸取板蓝根6份，制备样品，按照色谱条件分别进样，结果示尿苷的质量分数RSD为2.80％、鸟苷为0.80％、腺苷为2.63％、告依春为0.26％、靛玉红为2.57％，均＜3％，证明重复性良好。

2.1.8回收率试验：取已测定的板蓝根样品9份，分别根据成分质量分数的100％加入适量对照品，按照色谱条件分别进样，结果示尿苷的回收率为98.94％、鸟苷为98.07％、腺苷为97.95％、告依春为98.25％、靛玉红为92.42％，尿苷的RSD为1.12％、鸟苷为2.29％、腺苷为2.54％、告依春为1.55％、靛玉红为2.68％，证明回收率良好。

2.1.9各成分的质量分数测定：取各样品20μL，注入高效液相色谱仪，在色谱条件下测定各成分的质量分数，结果示各成分的分离度良好。在制备过程中，各成分呈下降趋势，每一环节的操作都可能会影响到指标成分质量分数。其中尿苷的损失率为39.5％、鸟苷为57.8％、腺苷为47.7％、告依春为67.3％、靛玉红为56.3％。浓缩环节损失最大，其次为干燥、制粒及醇沉。

2.2羟基自由基清除率测定：在96孔板中加入50μL 2.5mmol/L七水合硫酸亚铁和50μL 2.5mmol/L水杨酸、50μL不同制备阶段的提取液、5％过氧化氢，在37℃的水浴锅中加热0.5h，于536nm波长下测定吸光度（A0）；再以双蒸水代替样品，同样测定吸光度（A1）。同时加入七水合硫酸亚铁、水杨酸及不同制备阶段的提取液各50μL，加入50μL蒸馏水，测定吸光度（A2）。结果示在不同制备阶段的羟基自由基清除率呈下降趋势，在浓缩、醇沉及干燥环节抗氧化活性显著下降，羟基自由基清除率下降分别为31.47％、7.61％、2.79％。

2.3成分质量分数-药效活性数据的相关性：利用偏最小二乘法相关性分析谱效关系方程为：Y=-2.09407X1+2.11084X2+ 0.0853001X3-2.58097X4+3.52879X5，其中X代表特征峰峰面积，Y代表羟基自由基清除率，X1代表尿苷、X2代表鸟苷、X3代表腺苷、X4代表告伊春、X5代表靛玉红。可见鸟苷、腺苷及靛玉红这三者的质量分数与羟基自由基清除率呈正相关。

3　讨论

板蓝根是菘蓝的干燥根，它是一种中药材，具有清热解毒、凉血利咽、解热镇痛、活血化瘀之效。近年来，药理学研究表明，板蓝根的抗炎及免疫调节机制主要与其中的生物碱成分和核苷类成分有关，这些物质主要发挥着消炎抑菌、调节免疫、抗肿瘤以及干扰病毒核酸合成的作用，具有很强的药理活性。由于这些成分在板蓝根中占有较高比例，可以作为衡量药物质量的指标性成分[1]。

根据本文结果显示：在板蓝根制剂制备过程中，药物制剂的化学成分质量分数与抗氧化活性呈降低趋势，尤其是在热处理环节的损失较大，相关性分析显示鸟苷、腺苷及靛玉红这三者的质量分数与羟基自由基清除率呈正相关。可以得出结论：在板蓝根制剂制备过程中，操作水平显著影响着其指标组分质量分数和药效，尤其是浓缩干燥环节的影响最大，鸟苷、腺苷及靛玉红是使药物发挥抗氧化活性的重要成分。

[1]林丽君，聂黎行，戴忠，等.板蓝根的研究概况[J].中国药业，2015，21∶1-4.

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1672-8351（2016）11-0119-02