中西药复方制剂对CO2气腹下肿瘤细胞生长转移的影响

徐志诚 孙 岩 孙世波

（佳木斯市中心医院普外科，黑龙江 佳木斯 154002）

中西药复方制剂对CO2气腹下肿瘤细胞生长转移的影响

徐志诚 孙 岩 孙世波

（佳木斯市中心医院普外科，黑龙江 佳木斯 154002）

目的 通过体外和体内试验分析中西药复方制剂对CO2气腹下肿瘤细胞生长与转移的影响。方法 将中西药复方制剂按比例分为大、中、小剂量组，对照组为同浓度的西药（5-FU）组。结果 西药组的OD值小于西药组，抗肿瘤作用大于西药组。气腹+中西药组瘤的瘤重小于气腹+生理盐水组（P<0.05），气腹组+西药抑瘤率（45.2%）低于气腹+中西药组（73.3%）（P<0.05）；各组小鼠种植瘤结节中VEGF表达差异均有统计学意义（P<0.05）。结论 腹腔内应用中西药复方制剂对于S-180细胞气腹动物模型的瘤重、穿刺孔种植结节有抑制作用，其机制可能与下调的VEGF的表达有关。

中西药复方制剂；CO2气腹；肿瘤；生长；转移

随着腹腔镜技术的发展，腹腔镜手术对于肿瘤细胞的扩散、转移是否造成影响，是目前人们关注的焦点。中西药复方制剂是由苦参、黄芪、5-FU按一定的正交比例配合而成，苦参、黄芪具有抗肿瘤作用，疗效较为确切，5-FU是传统的抗肿瘤药物[1]。本文旨通过体外实验观察中西药复方制剂的抗肿瘤作用，现具体报道如下。

1　材料与方法

1.1材料：选择清洁级昆明雄性小鼠50只，平均体质量约23.5 g，该小鼠由哈尔滨医科大学第二临床医学院实验动物中心提供。瘤株小鼠肉瘤S-180细胞。5-FU（天津金耀氨基酸有限公司，批号：0902061）、复方苦参注射液（山东振东制药有限公司，批号：20090422）、黄芪注射液（正大青春宝药业有限公司，批号：0903103）。血管内皮生长因子（VEGF）一抗（北京中山生物技术有限公司）。

1.2方法：中西药制剂分组及MTT测定：将中西药复方制剂（5-FU、苦参、黄芪）按正交比例分为大（40 mg/kg、100 mg/kg、1.6 mL/kg）、中（20 mg/kg、50 mg/kg、0.8 mL/kg）、小（10 mg/kg、25 mg/kg、0.4 mL/kg）剂量组。同时对照组为西药（5-FU）组，浓度同上分为大、中、小剂量组。调整S-180肉瘤细胞数约2×104/mL均匀种于96孔板上，在5% CO2，37 ℃水浴箱中培养，依次加入中西药大、中、小剂量组和西药制剂组，培养7 d。在酶标仪490 nm波长测得其吸光度（OD）值。

表1　中西药和西药各剂量组与非药物组OD值对比

表3　各组转移结节中VEGF表达检测结果

动物肿瘤模型建立及分组：无菌抽取0.2 mL（1×108/mL）的细胞悬液，在50只小鼠的腹腔进行注射，进行模拟肿瘤在腹腔内的发生破损外漏。当接种完毕后，采用随机数字法随机分成5组，即具体为单纯种植组、气腹组、气腹+生理盐水组、气腹+西药（5-FU）组和气腹+中西药组，并均进行程重。

动物气腹模型建立：接种24 h后，建立气腹模型。单纯种植组除外，其他组采用乙醚吸入麻醉，仰卧位固定在操作台上，用5号头皮针在左下腹位置进行穿刺，将头皮针导管与自制气腹进行连接，出现膨腹时，压力恒定为（3.0±0.5）mm Hg，维持30 min。之后气腹组拔除头皮针，其余3组采用头皮针向腹腔内注入生理盐水0.2 mL，后拔除。

动物瘤重和抑瘤率的检测：11 d后勒颈法处死，在放净腹水前、后进行小鼠称重，计算其差值即为瘤重。抑瘤率=[（对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重）/对照组平均瘤重]×100%。

动物穿刺孔结节的检测：开腹后，观察壁层腹膜头皮针穿刺点的穿刺孔种植瘤结节直径，按平均值记录。分离切取种植瘤结节组织，行HE染色。

免疫组化VEGF表达：组织用PBS脱水，制成石蜡进行切片，进行HE染色和免疫组化（SP法）染色。棕黄色颗粒沉着者表明VEGF为阳性。结果：（-）为无阳性细胞；（+）为阳性细胞比例≤10%；（++）为10%<阳性细胞比例≤50%；（+++）为50%<阳性细胞比例≤75%；（++++）为阳性细胞比例>75%；最后分别按（-）、（+）、（++）、（+++）、（++++）的顺序评定为0、l、2、3、4共5个分值。

1.3统计学分析：采用SPSS17.0进行分析，计量资料以均值±标准差表示，组间采用t检验，以P<0.05为差异显著。

2　结 果

2.1中西药、西药各剂量组MTT测定结果：对照组为非药物组，西药组的OD值小于西药组，抗肿瘤作用大于西药组，见表1。

2.2各组小鼠生存情况：气腹操时，2只死亡，气腹组1只，气腹+生理盐水组1只；实验过程中，死亡4只：其中气腹+中西药组1只、气腹+生理盐水组1只，气腹+西药组2只。

2.3各组瘤重、肿瘤结节与抑瘤率比较：气腹+中西药组穿刺孔肿瘤重与穿刺孔结节直径结节最小；气腹+中西药组瘤的瘤重明显小于气腹+生理盐水组（P<0.05），气腹组+西药抑瘤率（45.2%）低于气腹+中西药组（73.3%）（P<0.05），见表2。

表2　比较各组小鼠瘤重与穿刺孔结节直径

2.4各组小鼠VEGF表达检测结果：肿瘤结节组织内胞质及胞膜可见VEGF的高表达，见表3。

3　讨 论

本实验中西药复方制剂是苦参、黄芪和5-FU按一定的正交比例配制而成[2]。旨在通过体外试验观察中西药复方制剂的抗肿瘤作用，体内试验进一步观察在CO2气腹的环境下此药物对肿瘤细胞种植转移的影响。本实验研究结果显示：体外实验复方制剂可以有效的抑制肿瘤细胞生长，且随着药物浓度的增大抑制作用随之增强。体内试验中，不同处理的各组小鼠在瘤重、种植瘤结节直径、肿瘤细胞VEGF等方面比较差异显著。

VEGF作为一种与血管生成及功能密切相关的细胞因子，在生理或病理条件下发挥特别重要的作用[3]。由于VEGF因子对于恶性肿瘤的生长、浸润和转移具有一定的促进作用。本研究结果显示：气腹+生理盐水组中VEGF表达较高，而中西药复方制剂的VEGF表达明显降低。

总之，在体外实验中中西药复方制剂组的抗肿瘤作用优于单纯西药（5-FU）组，应用中西药复方制剂可减少肿瘤戳口转移与腹腔内种植的概率。

[1]张海洋,于军,李旭.参芪合剂对荷瘤小鼠体内抗肿瘤作用的实验研究[J].长春中医药大学学报,2012,28(6):962-963.

[2]万凌峰,薛博瑜,柳璋璞,等.黄芪、苦参、知母配伍方体外抗肿瘤细胞作用研究[J].长春中医药大学学报,2014,30(3):400-402.

[3]商嵩山,张剑权.VEGF-C、VEGFR-3在肿瘤淋巴管生成中作用的研究进展[J].现代肿瘤医学,2011,19(1):185-188.

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1671-8194（2016）31-0033-02