知母须根化学成分预实验

肖曦晨，贾鹏晖，黄 琪，许凤清，吴德玲

(安徽中医药大学药学院，安徽 合肥 230012)



知母须根化学成分预实验

肖曦晨，贾鹏晖，黄 琪，许凤清，吴德玲

(安徽中医药大学药学院，安徽 合肥 230012)

为初步探索知母须根中的化学成分，采用试管反应法、纸反应法以及薄层色谱试验等方法对知母须根水提取部位、乙醇提取部位以及石油醚提取部位中的化学成分进行初步探究。结果表明知母须根中可能含有氨基酸、多肽、蛋白质、糖类、苷类、皂苷、黄酮类、酚类及鞣质、甾体、三萜类等化学成分。为后续提取、分离和分析实验提供理论依据，同时也为深入探究知母须根生物活性及其综合开发利用奠定基础。

知母须根；化学成分；预实验

知母为百合科植物知母(AnemarrhenaasphodeloidesBge.)的干燥根茎，具有清热泻火，滋阴润燥等功效[1]。现代研究结果表明知母具有抗老年痴呆，降血糖等药理作用[2-3]。在产地调研过程中发现，知母须根特别发达，占根茎总量的20%～30%左右，而在产地加工过程中，须根则作为非药用部位去除。大量的须根被丢弃，造成巨大的资源浪费，同时带来严重的环境污染。目前，人们对知母须根关注度不高，其化学成分研究也鲜见报道。本研究以亳州产知母的须根为研究对象，采用系统预实验法对其须根中含有的主要化学成分展开较为全方位的检测，确定其化合物种类，为知母须根的后期深入研究及其综合开发利用提供有益参考。

1 实 验

1.1 材料与试剂

1.1.1 材料

知母须根从安徽亳州十九里镇采收，由安徽中医药大学刘守金老师鉴定为百合科植物知母(AnemarrhenaasphodeloidesBge.)的须根。

1.1.2 试剂

石油醚(60～90 ℃)、95%乙醇、蒸馏水、氢氧化钠、盐酸、硫酸、氯仿均为分析纯。茚三酮试剂、10% α-萘酚乙醇液、斐林试剂、盐酸羟胺甲醇液、双缩脲试剂、三氯化铁试剂、氯化钠明胶试剂、三氯化铝试剂、碘化铋钾试剂、硅钨酸试剂、碘化汞钾试剂、盐酸-镁粉试剂、醋酸镁试剂等试剂均自配。

1.2 供试品溶液的制备

1.2.1 石油醚提取液制备

称取知母须根3 g，用打粉机粉碎后，缓慢加入石油醚(60～90 ℃)100 mL，密塞，室温下静置3 h，滤过，所得滤液即为石油醚提取液，用作油脂、挥发油和甾体及三萜类成分的检查。

1.2.2 乙醇提取液制备

称取知母须根6 g，用打粉机粉碎后，缓慢加入乙醇200 mL，水浴加热回流1 h，过滤，得滤液。将滤液分为两部分，其中一份作为乙醇提取液，供做甲项试验。另一部分减压浓缩至无醇味，缓慢加入5% 盐酸溶液30 mL，充分搅拌，过滤，得滤液，供做乙项试验。盐酸溶液不溶的组分缓慢加入乙酸乙酯30 mL使溶解，并使用5% 氢氧化钠溶液30 mL充分振摇洗涤2次，碱水层溶液弃至废液缸，乙酸乙酯层用蒸馏水洗涤至水洗液呈中性，弃去水洗液，减压浓缩样品得残渣，残渣再加乙醇15 mL使溶解，供做丙项试验。

1.2.3 水提取液制备

称取知母须根6 g，用打粉机粉碎后，缓慢加入蒸馏水200 mL，室温下冷浸过夜，过滤取20 mL滤液，用作蛋白质、多肽和氨基酸的检查。未滤去的组分在50～60 ℃的温度下加热1 h，过滤，得滤液，用作苷类、糖类、有机酸、酚类等项目的检查。

1.3 实验方法

知母须根经三种提取液制备后采用纸反应法，试管反应法以及薄层色谱检识的方法进行化学成分预实验。根据各类化学成分的物理化学性质，选择其特殊的并且在实验室环境下易于观察的反应现象，例如颜色反应、沉淀反应等，检测供试品溶液当中可能含有的化合物种类。结果见表1～表3。

2 结果与讨论

采用前述方法对知母须根的三种提取液分别进行化学成分预实验，现将结果归纳如表1所示。

表1 知母须根石油醚提取液预试结果

注：“+”表示正反应，“-”表示负反应。

经检验，知母须根石油醚提取液中可能含有甾体、三萜类等成分。

其中在对甾体、三萜类成分进行检测时，有文献记载在进行此类化学成分预实验时可用醋酐-浓硫酸(Liebermann-Burchard)反应法，既将供试品溶于醋酐中，加入浓硫酸-醋酐(1：20)数滴，静置数分钟，三萜皂苷最后呈红或紫色，甾体皂苷最终呈蓝紫色。然而在实际的实验操作过程中，我们发现此种颜色反应现象在实验室中难以观察到，遂采取了实验室中最为常见的薄层色谱检识方法，通过不同展开剂体系下各展开比例对照，最终确立了展开剂为氯仿-丙酮(6：1)。一方面，薄层检识实验结果易于观察，另一方面，也避免使用了醋酐这种管制试剂。

表2 知母须根乙醇提取液成分预试结果

注：“+”表示正反应，“-”表示负反应。

经检验，知母须根乙醇提取液中可能含有黄酮类、酚类及鞣质、甾体、三萜类和香豆素及其苷类等成分。

通过对醇提液预实验结果与其他两种提取液预实验结果进行对比，乙醇提取液中化合物种类相对较多，相同类型化合物相对含量较大，从而揭示乙醇对知母须根的提取效果最佳，并且乙醇相对环保，价格便宜，综合诸多因素的考量，我们在后续实验当中确定用乙醇来对知母须根药材进行提取。

表3 知母须根水提取液成分预试结果

注：“+”表示正反应，“-”表示负反应。

经检验，知母须根水提取液中可能含有氨基酸、多肽、蛋白质、糖类、苷类、皂苷及有机酸等成分。

通过文献检索，我们可以知道知母当中的主要化学成分为皂苷类成分，所以在知母须根的化学成分预实验中，我们把对皂苷类成分的检测作为首要。其中水提液中对皂苷类成分的检测方法区别于前两种提取液，主要是因为皂苷作为极性较大的化合物在水提液中的含量要远远高于前两种提取液，利用其与水混合振摇时可生成持久性的似肥皂泡沫状物的特性，从而达到对皂苷类成分的检测。这种方法简便可行且实验现象易于观察，同时避免了含水的供试品进行薄层色谱检识时的扩散效应。

3 结 论

通过以上的化学成分预实验，揭示知母须根中可能含有黄酮类、苷类、皂苷、氨基酸、多肽、蛋白质、糖类、酚类及鞣质、甾体、三萜类等化学成分。

现代天然药化研究表明，知母主根中含有大量的三萜类及黄酮类化学成分，这些化学成分大多具有较好的生物活性[4-6]。本实验研究表明知母须根中含有三萜类、黄酮类成分，这些成分与知母主根中类似，实验结果可为知母须根中活性成分的提取、分离、纯化提供实验依据。同时，本实验可为知母须根这一知母产地加工过程中的废弃物的综合开发利用提供理论支撑。

[1] 国家药典委员会.中国药典(一部)[S].北京:中国医药科技出版社,2015:212.

[2] Hu H,Zhang R,Zhang Y, et al. Role of CREB in the regulatory action of sarsasapogenin on muscarinic Ml receptor density during cell aging[J].FEBS Lett.,2010,584(8):1549-1554.

[3] 芮雯,吴妍,吉星,等.知母降糖有效部位的提取工艺优选及成分分析[J].中国实验方剂学杂志,2013,19(22):4-8.

[4] 张玉晶,宋少江,马志强,等中药知母中的一个新皂苷[J].沈阳药科大学学报,2008,25(4):279-281.

[5] 边际,徐绥绪,黄松,等.知母化学成分的研究[J].沈阳药科大学学报,1996,13(1):34-40.

[6] 刘卓,隋海娟,闫恩志,等.知母皂苷对脂多糖引起巨噬细胞分泌TNF-α和NO的影响及机制[J].中药药理与临床,2013,29(1):65-67.

Preliminary Test for Chemical Components of FibrousofAnemarrhenaasphodeloides

XIAOXi-chen,JIAPeng-hui，HUANGQi,XUFeng-qing,WUDe-ling

(College of Pharmacy, Anhui University of Chinese Medicine, Anhui Hefei 230012, China)

To identify the chemical components of the fibrous ofAnemarrhenaasphodeloides,the mixture was extracted from the fibrous ofAnemarrhenaasphodeloideswith water,95% ethanol and petroleum ether were studied with test tube method,test paper method and TLC method. The results indicated that the fibrous ofAnemarrhenaasphodeloidesmight contain amino acid, polypeptide, protein, saccharides, glycosides, saponins, flavonoids, phenols, tannins, sterides, triterpenes, and so on.It not only provided a theoretical basis for subsequent extraction, separation and analysis experiments,but also laid the foundation for further study of biological activity and application of the fibrous ofAnemarrhenaasphodeloides.

the fibrous ofAnemarrhenaasphodeloides; chemical components; preliminary test

中医药行业科研专项项目(201507002-18)；安徽中医药大学校级科研基金面上项目(2016zr012)。

肖曦晨(1991-)，男，硕士研究生，研究方向：中药活性成分研究。

吴德玲(1973-)，男，教授，硕士研究生导师，研究方向：中药活性成分研究、中药质量评价研究和中药新药的研究与开发。

R284.1

A

1001-9677(2016)022-0042-03