体腔积液薄层液基细胞涂片免疫组化染色方法研究

王小梅

体腔积液薄层液基细胞涂片免疫组化染色方法研究

王小梅

目的 对体腔积液薄层液基细胞涂片免疫组化染色最佳方式进行研究分析。方法 收集有组织学对照的恶性胸水68例，每例选12张石蜡切片，作为A组，将每例胸水用薄层液基细胞术制片36张，随机平均分成B、C、D三组，比较并进行统计学分析。结果 A组的诊断准确率是100%，B组准确率是99.4%，C组准确率是92%，D组准确率是90%，其中A组与B组相比，差异无统计学意义（P＞0.05），B组与C、D两组比较，差异均有统计学意义（P均＜0.05）。结论 免疫组化双重染色诊断率优于单纯免疫组化染色及免疫组化，在数量有限的TCT涂片中能够发挥比较好的效果，为临床诊断提供参考依据。

肺癌；体腔积液；薄层液基细胞学检查；抗原修复；退色；免疫组化

薄层液基细胞技术（Thin-layer cytology test，TCT）在上世纪90年代开始流行，最初是在妇科宫颈细胞学检查中使用，效果突出［1］。后来该技术被应用于其他非妇科细胞学检查中［2-4］，相比传统的脱落细胞学涂片，优点在于背景清晰、显微镜观察效果好、血液成分少、薄层，但是在癌性体腔积液TCT检查中的立体感没有传统涂片好。使用苏木精-伊红（Hematoxylin-eosin，HE）染色癌细胞与间皮细胞难度较大，对癌细胞分类困难。IHC染色需要先使用HE染色，否则TCT涂片的癌细胞和疑似癌细胞不清楚，不同褪色方式会出现不同结果［5-8］。胸水TCT涂片IHC染色诊断难度大，需要详细的进行分类，此次对双重免疫组化染色的效果进行了研究分析，获得了比较好的效果，现进行以下报道。

1　材料与方法

1.1材料

根据2009年3月～2012年3月我院的68例肺癌伴胸水转移送检病例进行研究分析，患者年龄45～70岁，有64例CT表明肺内占位病变。有9例患者锁骨上窝淋巴结肿大。经HE染色和IHC染色确诊，13例鳞状细胞癌，40例腺癌，6例腺鳞癌，9例神经内分泌癌；此次研究使用的TCT制片设备是康柏液基细胞制片机及配套耗材，由湖南长沙康柏恩医疗科技公司提供，所选试剂均购于福州迈新公司。

1.2方法

收集有组织学对照的恶性胸水68例，每例选12张石蜡切片，作为A组，将每例胸水用薄层液基细胞术制片36张，随机平均分成B、C、D三组；B组经苏木精-伊红（HE）染色及柠檬酸或EDTA修复退色，做免疫组化双重染色，C组经HE染色，用盐酸方法退色，做免疫组化染色，D组不经HE染色，直接做免疫组化。将结果与A组组织病理诊断比较并进行统计学分析。

1.3统计学方法

采用SPSS 13.0统计学软件分析数据，计数资料比较采用χ2检验或Fisher确切概率法。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

A组的诊断准确率是100%，B组准确率是99.4%，C组准确率是92%，D组准确率是90%，其中A组与B组相比，差异无统计学意义（P＞0.05），B组与C、D两组比较，差异均有统计学意义（P均＜0.05）。详见表1。

表1　检出结果对比

3　讨论

临床中，TCT检查在肿瘤疾病的诊断、鉴别以及肿瘤分类中能够发挥较好的效果。临床上肺癌伴胸水转移患者手术机会比较少，多数以化疗和放疗为主，对于这部分患者，首先要明确患者是否有胸水转移，以便对肿瘤进行分类。临床一般以活检组织病理诊断检查，但活检的影响因素众多，所以难度很大，所以临床多以胸水检查来替代其诊断和分类。不管是采取TCT检查涂片方式，还是传统涂片检查方式，通过HE染色诊断后，还需要使用免疫组化染色，才可以更好的分析间皮细胞，对肿瘤类型以及来源进行分析。TCT涂片中的细胞体态多样化，各种细胞形态可以表达CR以及MC，除此之外还能够对角蛋白CK等抗原成分进行表达。但同一张TCT涂片上使用一种抗原，如CK，无法对间皮细胞和癌细胞进行区分。

根据研究来看，HE染色，柠檬酸以及EDTA修复褪色做双重免疫组的染色方式比较优秀，准确率比较高，使用盐酸褪色常规免疫组化染色紧随其后，没有使用HE染色的准确率最低。对其原因进行分析，笔者认为，前面的两种方式都有HE染色步骤，使用显微镜来筛选合格的TCT涂片，B组的抗原热修复不会对抗原成分产生损坏，同时也不会阻碍抗原抗体的结合；C组使用了盐酸和草酸进行褪色，导致了抗原成分被破坏，所以准确率有所下降［6］，容易出现假阴情况；D组没有使用HE染色，显微镜下无法筛选，所以合格涂片率低，诊断准确率也低。

此次研究中，A组的诊断准确率是100%，B组准确率是99.4%，C组准确率是92%，D组准确率是90%，其中A组与B组相比，差异无统计学意义（P＞0.05），B组与C、D两组比较，差异均有统计学意义（P均＜0.05）。说明使用免疫组化双重染色的方式准确率最高，应用于体腔积液TCT诊断具有比较好的效果，在数量有限的TCT涂片中能够发挥比较好的效果。所以临床中我们推介在进行体腔积液检查时，选择这种检验方式。

［1］马博文，杨凡.液基薄层细胞制片技术在非妇科标本中的应用［J］.诊断病理学杂志，2010，17（1）：63-66.

［2］戴芳，杨举伦，王丽，等.淋巴组织细针吸取细胞HE染片褪色后作免疫组化的体会［J］.西南国防医药，2010，20（2）：178-180.

［3］王兴波，任仕俊，陈怀敏，等.抗原热修复退色法在HE切片改做免疫组化染色中的探索［J］.临床与实验病理学杂志，2012，28（10）：1176-1177.

［4］朱淑玲，杨清绪.原位杂交与免疫组织化学双标记技术的应用价值［J］.中国基层医药，2010，17（11）：1447-1448.

［5］覃小梅，刘勇，陆颖.外周血异型淋巴细胞检测的临床意义［J］.检验医学与临床，2011，8（15）：1882-1883.

［6］周晓倩.液基细胞薄层涂片技术的临床应用价值［J］.中国当代医药，2012，19（3）：99-100.

［7］李小华，张云霄，冬国友，等.全自动制片染色系统制作优质液基细胞片方法的探讨［J］.山西医药杂志，2013，42（24）：1433-1434.

［8］欧陵斌，杨晓斌，柏彬，等.4种液基细胞制片的比较［J］.临床与实验病理学杂志，2013，29（4）：457-459.

Analysis of the Thin Layer Liquid Based Cytology Smear Method of the Body Cavity Effusion

WANG Xiaomei Department of Pathology，Fourth Hospital of Daqing City，Daqing Heilongjiang 163712，China

Objective To study the best method for the immunohistochemistry staining of thin layer liquid based cytology.Methods To collect histological control of malignant pleural effusion in 68 cases，12 cases of each piece of paraffin as group A，each thoracic water with ThinPrep cell production in 36，which were randomly divided into B，C，D groups，compare and analyze the data.Results The diagnostic accuracy rate of group A was 100%，the accuracy rate of group B was 99.4%，the accuracy rate of group C was 92%，the accuracy rate of group D was 90%，compared with group B，the difference between group A was not statistically significant（P＞ 0.05），Group B and between the C，D groups，there were statistically significant differences（P＜ 0.05）.Conclusion The diagnostic rate of double staining of immunohistochemistry is better than that of simple immunohistochemical staining and immunohistochemistry，which can exert a good effect in the limited amount of TCT smear，which can provide reference for clinical diagnosis.

Lung cancer，Cavity effusion，Thin-layer cytology test，Antigen repairing，Fade，Immunohistochemistry

R730.4

A

1674-9316（2016）20-0179-03

10.3969/j.issn.1674-9316.2016.20.114

大庆市第四医院病理科，黑龙江 大庆 163712