不同剂型新城疫-禽流感二联灭活疫苗免疫SPF鸡后抗体水平对比试验

江兴华

福州大北农生物技术有限公司福州350014

不同剂型新城疫-禽流感二联灭活疫苗免疫SPF鸡后抗体水平对比试验

江兴华

福州大北农生物技术有限公司福州350014

不同剂型的佐剂对疫苗的免疫效果有较大的影响，本试验旨在对比不同剂型佐剂的新城疫-禽流感（简称“新-流”）二联灭活疫苗的免疫效果，从而为生产上选择最佳剂型佐剂应用于新城疫-禽流流感二联灭活疫苗提供依据。分别将油包水型、水包油型、水包油包水型佐剂与新城疫及禽流感灭活抗原乳化成不同剂型的新城疫-禽流感（H9亚型，HP株）二联灭活疫苗，将这三种不同剂型的新城疫-禽流感（H9亚型，HP株）二联灭活疫苗分别免疫一组7日龄SPF鸡。每羽颈部皮下注射0.2 mL，同时设一组未免7日龄SPF鸡作为对照组，各免疫组与对照组SPF鸡于免疫组免后6、10、15、21、28、35 d进行采血，检测新城疫与禽流感抗体水平。结果表明：免疫油包水型疫苗组SPF鸡免疫后新城疫与禽流感抗体上升最快，在免后10、15、21、28、35 d的新城疫与禽流感抗体也最高，其次是免疫水包油包水型的，而免疫水包油型疫苗组的SPF鸡新城疫与禽流感抗体上升最慢，而且在免后10、15、21、28、35 d的新城疫与禽流感抗体也最低。此外，从各免疫组可以看出，在免后6 d时新城疫抗体已开始产生，在1log2以下，而禽流感抗体仍未产生。可见免疫新-流二联苗后，新城疫抗体比禽流感抗体更早产生，油包水型新-流二联苗的免后抗体高于水包油包水及水包油型，而且能持续刺激机体产生高水平抗体，更具优势。

不同剂型新城疫-禽流感二联灭活疫苗SPF鸡抗体水平对比

新城疫（Newcastle disease，ND）又称亚洲鸡瘟，是由副黏病毒科、腮腺炎病毒属的新城疫病毒（NDV）所引起的一种烈性和高度接触性传染病[1]，禽流感是由正粘病毒科、流感病毒属A型流感病毒引

起的一种传染性疾病综合征，感染禽类从亚临诊症状，轻度上呼吸道疾病、产蛋量降低，直至急性全身致死性疾病[2]，我国禽流感以H9亚型为主，虽然H9亚型禽流感属于低致病力禽流感（LPAI），其危害不如高致病性禽流感（HPAI）严重，但该亚型禽流感常常继发或并发感染新城疫、大肠杆菌病等而引起蛋鸡产蛋率下降及大批鸡只死亡，也给我国畜牧业发展造成了严重的经济损失[3]。鸡新城疫和禽流感是世界范围流行的禽类疫病，给禽业生产造成巨大的经济损失，免疫接种是控制鸡新城疫和禽流感的有效方法[4]。市场上预防鸡新城疫与禽流感两种疫病主要是免疫新城疫-禽流感二联灭活疫苗，新-流二联灭活疫苗可制备成不同剂型，如油包水型、水包油型、水包油包水型。目前使用的油乳剂灭活疫苗主要是油包水型油佐剂疫苗，免疫接种操作麻烦，吸收慢，免疫保护力产生较慢，因而有的免疫鸡群仍有发生非典型鸡新城疫的现象，为了提高对鸡新城疫的防疫水平，有必要应用工艺更先进的油佐剂疫苗[5]。本试验通过使用不同佐剂制备成不同剂型的新-流二联灭活疫苗，对比不同剂型的新-流二联灭活疫苗的免疫效果，以寻找最佳免疫效果的佐剂应用于制备新-流二联灭活疫苗，从而预防鸡新城疫与禽流感，减少养鸡业的损失。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 不同剂型佐剂由法国SEPPIC公司提供。

1.1.2 不同剂型新城疫-禽流感二联灭活疫苗由福州大北农生物技术有限公司使用法国SEPPIC公司提供不同剂型的佐剂乳化制成。

1.1.3 试验用鸡7日龄SPF鸡。SPF蛋由斯帕法斯家禽有限公司提供，本公司自行孵化。

1.2 试验方法

1.2.1 疫苗的制备A组疫苗：水包油剂型疫苗，使用已灭活的等量新城疫、禽流感抗原与法国SEPPIC公司提供的水包油佐剂按质量比85：15进行乳化。B组疫苗：水包油包水剂型疫苗，使用已灭活的等量新城疫、禽流感抗原与法国SEPPIC公司提供的水包油包水型佐剂按质量比1：1进行乳化。C组疫苗：油包水剂型疫苗，使用已灭活的等量新城疫、禽流感抗原与法国SEPPIC公司提供的油包水型佐剂按质量比30：70进行乳化。

1.2.2 试验分组SPF蛋进行孵化出壳，小鸡由本公司自行养至7日龄。选择健康有活力的60羽鸡，随机选20羽编为A组，免疫A组疫苗样品；随机选20羽编为B组，免疫B组疫苗样品；随机选20羽编为C组，为空白对照组。并在每羽鸡上打上翅标编号，试验鸡在免前与免后均在隔离器内喂养。

1.2.3 免疫方法将A、B、C组新-流二联灭活疫苗样品分别免疫7日龄SPF鸡，每羽颈部皮下注射0.2 mL，对照组均不免疫，作为空白对照。

1.2.4 采血、抗体检测各免疫组与对照组均于免疫组免后6、10、15、21、28、35 d进行采血，检测新城疫与禽流感抗体。

1.2.5 抗体检测方法抗体检测应用红细胞凝集抑制试验的方法，具体步骤：用PBS将待检血清作2倍系列稀释，加入含4HAU的血凝素抗原液，并设PBS和4HAU的血凝素抗原液对照，充分振摇后，置室温下至少20 min，或在2～8℃下40～60 min，再加入1%鸡红细胞悬液，置室温20～40 min或置2～8℃下40～60 min，当红细胞对照孔中的红细胞呈显著钮扣状时判定结果，以使红细胞凝集被完全抑制的血清最高稀释度作为判定终点。

2 结果

从新城疫与禽流感抗体检测结果（见表1，图1-图2）可以看出，对照组新城疫与禽流感抗体在各日龄均为阴性，免疫组新城疫抗体从免后6 d开始逐渐上升，油包水剂型组新城疫抗体上升得最快，且在免后不同日龄抗体值也最高，最高值可达到7log2以上，其次是水包油包水型，水包油剂型组抗体上升得最慢且最低；免疫组禽流感抗体从免后10 d开始逐渐上升，油包水剂型组禽流感抗体上升得最快，且在免后不同日龄抗体值也最高，最高值可达到6log2以上，其次是水包油包水型，水包油剂型组抗体上升得最慢且最低；各剂型组的新城疫抗体比禽流感抗体上升得更早，同日龄抗体值更高，新城疫抗体从免后6 d已经开始上升，而禽流感抗体在免后6 d仍为零，从免后6～10 d才开始上升。

表1 不同组新城疫与禽流感抗体水平检测结果

3 结论与讨论

1）佐剂是预先或与抗原同时注入体内，可增强机体对抗原的免疫应答反应或改变免疫应答类型的非特异性物质。佐剂可以改变抗原的物理性状，延缓抗原的降解和排除；刺激抗原递呈细胞，增强其对抗原的处理和递呈能力；刺激淋巴细胞的增殖分化和成熟；促进组织细胞或免疫细胞释放细胞因子[6]。可见选择合适佐剂对疫苗免疫效果十分重要，从本试验不同组免后抗体水平结果可以看出，不同佐剂对疫苗的免疫效果影响很大，免后不同时间抗体值差别很大，在实际疫苗生产中应根据具体的疫苗筛选最佳免疫效果的佐剂，免疫动物后才能获得最好的免疫保护力。

2）双相油乳剂灭活苗具有黏度低、在注射部位易分散、极易吸收、局部反应轻微、佐剂效应仍相当良好、刺激机体较早产生抗体、达峰值时间提前、较早产生保护力等优点[7]，双相油乳剂灭活疫苗即水包油包水型疫苗，本试验研究不同剂型的新城疫-禽流感二联灭活疫苗的免疫效果，与黄建文等[7]在禽流感双相油乳剂疫苗中的试验结果不一致。本试验结果表明：水包油与水包油包水型疫苗比油包水型疫苗产生抗体慢，免后同日龄抗体均低于油包水型疫苗，本试验结果与肖兴等试验结果不一致的原因还有待于进一步分析。从本试验结果看，油包水型新城疫-禽流感二联灭活疫苗免疫效果最好，虽然水包油型与水包油包水型疫苗黏度低，更易注射与吸收，但免疫抗体低，我们在选择新城疫-禽流感二联灭活疫苗佐剂时应综合考虑，免疫效果应优先考虑。

3）禽流感H9抗体以大于等于5log2为阳性作为标准，46 d的H9抗体检测结果平均阳性率只有58.4%，免疫抗体水平偏低，对低致病性禽流感流行的地区还会构成一定的威胁。所以，饲养场还必须加强隔离、防疫和消毒等综合防控措施，以确保鸡群的安全生产[8]。从本试验结果看，免疫油包水型新城疫-禽流感二联灭活疫苗，禽流感抗体在免后21 d就可达到5log2以上，28 d可达到6log2以上，而免疫水包油及水包油包水型疫苗，禽流感抗体需28 d才可达到5log2以上；免疫油包水型新城疫-禽流感二联灭活疫苗，新城疫抗体在免后15 d就可达到5log2以上，21 d可达到6log2以上，而免疫水包油及水包油包水型疫苗，新城疫抗体需免后21 d才可达到5log2以上。可见油包水型疫苗可更快产生抗体，可以更早产生免疫保护力，是新城疫-禽流感二联灭活疫苗的最佳佐剂[9-10]。

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[5]肖兴,周祝林,董伟.鸡新城疫双相油乳剂苗与油包水型油佐剂疫苗的免疫效果比较[J].湖南畜牧兽医,2004(2)：6-7,20.

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Comparision of antibody levels against different formulation of bivalent inactivated vaccines containing newcastle disease virus and avian influenza virus in SPF chickens

Jiang Xinghua
(Fuzhou Dabeinong Biotech Co.Ltd.,Fuzhou 350014)

7-day-old specific pathogen free(SPF)chickens were inoculated with three kinds of bivalent vaccines,which contained inactivated Newcastle disease virus(NDV)and avian influenza virus(AIV,H9 subtype,HP strain)emulsified with water/oil,oil/water and water/oil/water adjuvant,respectively.Every chicken in the experiment groups was subcutaneously inoculated with a dose of 0.2 mL,and additionally,chickens were mock inoculated as control group.In order to detect antibody titers of NDV and AIV,blood samples were collected from both experiment groups and control group on 6,10,15,21,28 and 35 day post-immunization(dpi).Results showed that antibodies against NDV and AIV were rising fastest and highest on 10,15,21,28 and 35 day dpi in water/oil type vaccine group,followed by water/oil/water type vaccine group,and oil/water type vaccine group with relatively slowest and lowest antibody titers.In addition,the antibodies against NDV initially emerged on 6 day dpi with a titer of sub-1log2,while antibodies against AIV were absent in the meantime.Overall,antibodies against NDV emerged earlier than those of AIV,and SPF chickens immunized with water/oil type vaccine obtained continuous stimulation and produced higher antibody titers than other two vaccines.

different formulation bivalent inactivated NDV and AIV vaccine specific pathogen free(SPF)chickens comparision of antibody levels

A

1003-4331（2016）06-0005-03