3种猪伪狂犬病gB抗体ELISA检测试剂盒的比较

蔡振鸿 赵 冉 杨 涛*

（1.厦门市思明区市政管理中心厦门361005；2.厦门市动物疫病预防控制中心厦门361009）

3种猪伪狂犬病gB抗体ELISA检测试剂盒的比较

蔡振鸿1赵 冉2杨 涛2*

（1.厦门市思明区市政管理中心厦门361005；2.厦门市动物疫病预防控制中心厦门361009）

采用3种猪伪狂犬病gB抗体ELISA检测试剂盒检测121份血清样品，对检测结果进行Kappa一致性检验。结果显示：3种gB抗体检测试剂盒都具有很好的重复性，两两之间检测结果的符合率达80%以上，Kappa值＞0.6，表明3种检测试剂盒具有较好的重复性和一致性。

猪伪狂犬gB抗体ELISA试剂盒Kappa检验

猪伪狂犬病（pseudorabies，PR）是由伪狂犬病病毒（pseudorabies virus，PRV）引起的多种家畜和野生动物感染的一种急性传染病。在临床实践中，猪伪狂犬病gB抗体ELISA检测试剂盒常被用于检测PRV抗体水平。目前市场上有不同厂家生产的PRV gB抗体检测试剂盒，本研究选取3种进口PRV gB抗体检测试剂盒，对相同的猪血清样品分别进行检测，比较结果的一致性。

1 材料与方法

1.1 猪伪狂犬病gB抗体检测试剂盒来源北京爱德士元亨生物科技有限公司（IDEXX），产品批号为

LL492；北京天之泰生物科技有限公司（BIOCHEK），产品批号为FS6233；法国ID.vet（ID Screen），产品批号为781。

1.2 被检测血清来自某规模猪场的121份血清，均常规免疫伪狂犬病疫苗。

1.3 检测方法试验方法及结果判定按照试剂盒说明书进行，其中：血清样品均按照1∶200稀释。IDEXX与ID.vet试剂盒采用短期孵育模式。BIOCHEK通过S/P值判定，S/P≥0.500为阳性，S/P＜0.499为阴性；IDEXX与ID.vet通过S/N值判定，IDEXX S/N≤0.600为阳性，0.6＜S/N≤0.70为可疑，S/N＞0.70为阴性，ID.vet S/N≤0.40为阳性，0.4＜S/ N≤0.50为可疑，S/N＞0.50为阴性。

S/P=（样品OD值-阴性对照OD值）/（阳性对照OD值-阴性对照OD值）；

S/N=样品OD值/阴性对照OD值。

1.4 统计方法应用spss22.0统计学软件对结果进行统计分析。统计S/N值或S/P值的最大值、最小值、平均值、标准差和阳性率。

1.4.1 重复性比较随机抽取12份血清样品重复检测3次，比较3次检测结果，了解各试剂盒的重复性。

1.4.2 一致性比较计算符合率。符合率指2种试剂盒判定结果相同样本数除以检测总数。对一致性进行Kappa检验。因BIOCHEK试剂盒只有阴性、阳性两个判定结果，为方便进行统计，结合生产实际，将其他试剂盒可疑结果判定为阴性进行统计。Kappa统计量一致性强度参考判断指标[1]，将Kappa

值大小分为6个区段，分别代表一致性的强弱程度。Kappa值＜0，极差；0.00～0.20，微弱；0.21～0.40，弱；0.41～0.60，中度；0.61～0.80，高度；0.81～1.00，极强。

2 结果与分析

2.13 种试剂盒的重复性具体检测结果见表1。由表1可知，12份样品重复3次检测的S/N（S/P）值中，INDEXX试剂盒最大变异系数为15.80%，ID.vet试剂盒最大变异系数为10.27%，BIOCHEK试剂盒最大变异系数为8.39%。

2.2 检测结果121份猪血清样品用3种试剂盒检测的结果见表2。

表1 3种试剂盒重复性比较

表2 IDEXX、ID.vet与BIOCHEK检测结果

2.3 一致性比较IDEXX与ID.vet检测结果符合率为86.8%（见表3），其Kappa值为0.717，一致性强度为高度。IDEXX与BIOCHEK检测结果符合率为81.8%（见表4），其Kappa值为0.632，一致性强度为高度。ID.vet与BIOCHEK检测结果符合率为81.8%（见表5），其Kappa值为0.626，一致性强度为高度。

表3 IDEXX与IDVET检测结果一致性分析

表4 IDEXX与BIOCHEK检测结果一致性分析

表5 ID.vet与BIOCHEK检测结果一致性分析

3 讨论

1）因为血清样品均来自同一规模猪场，疫苗免疫比较到位，在预试验中检测到血清抗体滴度很高，样品阳性率可达96%以上，在这种情况下比较3种试剂盒一致性会非常高。通过倍比稀释后，发现血清样品在1∶200稀释后检测的S/P值或S/N值多数在临界值附近范围，这更有利于考察3种试剂盒检测结果的一致性，因此，本次试验血清样品均采用1∶200稀释。

2）重复性试验中，3种试剂盒重复3次检测的S/N（S/P）值变异系数大多数位于10%以内，表现出很好的重复性，且本次检测结果是采用1∶200稀释

后的血清，可以得出在实际检测中，3种试剂盒均具有较好的重复性。

3）Kappa值主要体现两种不同试剂或方法检测结果的一致性，但不能判定哪个试剂盒或方法较好。Kappa值越大，两者一致性越高，则表明结果可靠性越高[2]，可作为检测试剂或方法对于检测结果可靠程度的参考[3]。检测一致性结果表明，3种试剂盒检测结果两两比对均表现为高度一致性，提示3种试剂盒在检测猪伪狂犬病gB抗体结果的可靠性程度方面基本相当，均可应用于临床检测。

[1]厦世邦,吴金华.Kappa一致性检验在检验医学研究中的应用[J].中华检验医学杂志,2006,29(1)：83-84.

[2]Landis J R,Koch G G.The measurement of observer agreement for Gategorical data[J].Biometrics,1977,33：159-174.

[3]刘华,詹松鹤,何长生,等.应用Kappa检验比较猪蓝耳病ELISA抗体检测试剂盒[J].中国动物检疫,2014,31(11)：95-105.

Application of Kappa test for evaluation of PRV gB antibody ELISA kits

Cai Zhenhong1Zhao Ran2Yang Tao2*
(1.Xiamen Siming District Public Facilities Management Center,Xiamen 361005; 2.Xiamen Center for Animal Disease Control and Prevention,Xiamen 361009)

To compare the consistency between the results of three different PRV gB antibody ELISA Kits by Kappa test,121 swine serum samples were tested by the PRV gB antibody ELISA kits produced by three different firms.The results showed that the three kits had good repeatability respectively,the consistency rate was more than 80%and the Kappa value was more than 0.6．These three kits are highly agreeed.

Pseudorabies gB antibody ELISA kit Kappa test

A

1003-4331（2016）06-0003-03

厦门市科技计划项目（3502Z20154095）资助。作者简介：蔡振鸿(1981-)，男，硕士。

*通信作者：杨涛(1971-)，女，硕士，副研究员。