经乌司他丁预处理的预存式自体血回输对围术期细胞免疫功能的影响

张明勋

经乌司他丁预处理的预存式自体血回输对围术期细胞免疫功能的影响

张明勋

目的 观察经乌司他丁预处理的预存式自体血回输对结直肠癌患者T细胞和NK细胞的影响。方法 选择直肠癌、结肠癌ASAⅠ～Ⅱ级患者45例，随机分为预存式自体输血组（P组）、乌司他丁组（UC组）和联合治疗组（UN组），每组各15例。P组：患者于手术前3d采血400ml，在手术中出血时或在手术后回输。UN组：患者于术前7d时开始输注20万U乌司他丁1次/d，共4d，同时术前第3天采取静脉自体血400ml。UC组：患者乌司他丁的用药方式同联合治疗组，但于术前配悬浮红细胞2U（400ml），手术中止血完毕后或手术后输入；用流式细胞仪测定T 淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、NK细胞胞（CD56+）的数量，并计算CD4+/ CD+8比值。结果 麻醉前P组患者CD3+、CD4+、NK细胞数量及CD4+/CD8+的比值均低于UC组和UN组，而CD8+则高于UT组和UN组；术后1d UN组和UC仍高于P组，其中UN组低于UC组；术后3d各组数值开始恢复，UN组的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+的比值以及NK细胞的数量与术前比较差异无统计学意义（P＞0.05），而其他两组则仍低于术前水平；术后5d三组患者的各项指标均恢复至术前水平，与术前比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 经乌司他丁预处理的预存式自体输血可通过改善肿瘤患者术前的细胞免疫抑制，改善术后患者的细胞免疫功能，促进患者早日康复。

乌司他丁 预存式自体血 结直肠癌 细胞免疫

结直肠癌是世界范围内发病率较高的恶性肿瘤，在我国发病率呈逐年上升的趋势且逐渐年轻化。肿瘤患者免疫功能低下，其中机体的细胞免疫系统中免疫细胞的数量和质量出现不同程度的降低，手术患者经手术后细胞免疫更加抑制，导致术后肿瘤细胞的扩散［1］，所以在围术期对肿瘤患者免疫功能的影响对患者的康复和预后具有至关重要的作用。本实验旨在探讨经乌司他丁预处理的预存式自体血回输对结直肠癌患者T细胞和NK细胞的影响。

1　临床资料

1.1一般资料 本实验经医院伦理委员会批准后实行，患者在术前均签署知情同意书。选择直肠癌、结肠癌ASAⅠ～Ⅱ级患者45 例，其中男27例，女18例；年龄49～65岁，体质量46～85kg。将患者随机分为三组：预存式自体输血组（P组）、乌司他丁组（UC组）和联合治疗组（UN组）。预存式自体血组：患者于手术前3d采血400ml，采集后血袋标记清楚放于血库专用冰箱内保存，在手术中出血时或者在手术后回输。联合治疗组：患者于术前7d时开始将20万U乌司他丁溶于生理盐水内静脉注射1次/d，共4d，同时术前第3天采取静脉自体血400ml。乌司他丁组：患者乌司他丁的用药方式同联合治疗组，但于术前配悬浮红细胞2U（400ml），手术中止血完毕后或手术后输入。三组患者一般资料及手术情况比较差异均无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2入选标准及排除标准 （1）入选标准：三组患者Hb＞120g/L，HCT＞0.35，PLT＞100×10-9/L，心、肺、肝、肾功能正常，凝血酶原时间正常、无内分泌及免疫性疾病，无放疗、化疗和激素治疗史。（2）排除标准：手术时间＞4h的患者。患者失血量＞600ml。术中患者血压超过基础值的40%且应用血管活性药物后持续时间＞10min。

2　结果

三组患者围手术期T细胞亚群和NK细胞数量变化比较 见表1。

表1　三组患者围手术期T细胞亚群和NK细胞数量变化比较（±s）

表1　三组患者围手术期T细胞亚群和NK细胞数量变化比较（±s）

注：与麻醉前比较，*P＜0.05；与P组比较，#P＜0.05；与UT组比较，▲P＜0.05

组别n麻醉前术后1d术后3d术后5d CD3+P组1560.13±7.6347.24±9.56*52.31±7.26*59.10±6.43 UC组1571.41±3.25#54.21±9.37*#62.15±9.42*#72.86±5.35# UN组1572.26±4.83#60.17±11.25*#▲71.26±8.56*#▲72.39±7.73# CD4+P组1533.15±1.4118.96±3.31*23.89±5.64*33.82±3.27 UC组1537.82±2.15#21.19±4.37*#25.02±4.92*36.17±3.18# UN组1538.06±1.23#27.82±7.64*#▲36.14±6.33#▲39.45±2.19# CD8+P组1523.29±3.2924.32±2.9124.02±3.4621.21±2.31 UC组1520.31±2.58#20.52±3.07#21.17±1.05#21.19±0.69# UN组15 18.82±2.16#▲18.13±2.42#▲17.86±3.66#▲16.17±1.36#▲CD4+/CD8+P组151.39±0.170.82±0.13*0.93±0.15*1.36±0.31 UC组151.70±0.13#0.94±0.21*1.12±0.37*1.72±0.41# UN组151.73±0.09#1.31±0.27*#▲1.79±0.15#▲1.84±0.15# NKP组1530.81±4.2722.36±3.19*26.04±2.53*36.52±3.12 UC组1536.12±3.86#24.15±3.01*#25.83±3.62*32.27±2.51 UN组1537.42±2.69#29.47±2.18*#36.46±3.2937.19±4.10

3　讨论

乌司他丁是从男性尿液中分离纯化出来的一种胰蛋白酶抑制剂，研究表明其除具有抑制氧自由基的产生，稳定溶酶体酶和细胞膜，减少炎症介质的释放［2-3］，还具有一定的免疫调节作用［4］。而预存式自体血中免疫细胞的数量和质量均优于术前水平，可以改善患者的围术期细胞免疫功能［5］。在机体的免疫系统中，辅助性T细胞（Th）和抑制性T细胞（Ts）两亚群间细胞的平衡在抗肿瘤中起到重要的作用，其中CD4+在效应细胞抗肿瘤过程中起到促进作用，CD8+则起到抑制作用。CD4+/CD8+的比值是对Th/Ts二者之间平衡的重要反应，可以较好的反应肿瘤患者免疫抑制的程度。

在本实验中乌司他丁组和联合治疗组术前患者CD3+、CD4+、NK细胞数量及CD4+/CD8+的比值均高于预存式自体血组，而CD8+的值则低于预存式自体血组，这可能与患者在术前应用乌司他丁有关，肿瘤细胞可以通过诱发更多的抑制细胞和因子对CD4+产生抑制，加上CD8+产生的抑制因子使得机体的免疫功能进一步受损，而乌司他丁可以改善CD4+的功能和数量，对围手术期的红细胞免疫功能有保护作用。各组患者CD3+、CD4+、NK细胞数量及CD4+/CD8+的比值在术后第1天呈现不同程度的降低，但是联合治疗组的下降幅度明显低于其他两组，同时机体免疫系统的恢复速度明显优于其他两组，联合治疗组于术后3d恢复至术前水平，而其他两组的免疫指标于术后5d时才恢复至术前水平，这可能是因为乌司他丁能促进红细胞血红素氧合酶1的表达及增强其活性，改善血清中的免疫粘附调节因子的紊乱状态，使得患者术前采集的自体血更有利于减轻肿瘤细胞对免疫系统的抑制，促进患者早日康复。

［1］Leaver HA,craigsR,YapPL,et al.Lymphocyte responses following open andminimally invasive thoracic surgery.Eur J clin Invest,2000, 30(3):230-238.

［2］Cao YZ,Tu YY,Chen X,et al.Protective effect of Ulinastatin against murine models of sepsis:inhibition of TNF-alpha and IL-6 and augmentation of IL-10 and IL-13.Exp Toxicol Pathol,2012, 64(6):543-547.

［3］Lee SH, Kim HJ, Han HJ, et al. Urinary trypsin inhibitor attenuates lipopolysaccharide-induced neutrophil activation. Korean J Anesthesiol, 2012,63(6):540-546.

［4］李鹤飞,李永辉,王海波,等.乌司他丁对围手术期食管癌患者细胞免疫功能的影响.军医进修学院学报,2012,33(9):941-943.

［5］屈常伟.骆喜宝.刘志贵,等.预存式自体输血对结直肠癌患者围术期细胞免疫功能的影响.实用医学杂志,2013,29(18):2986-2988.

Objective To observe the UTI pretreated stored autologous blood transfusion in patients with colorectal cancer effects on T cells and NK cells. Methods Colorectal cancer，colon cancer ASAⅠ～Ⅱ grade 45 cases of patients were randomly divided into pre-existing autologous transfusion group（P group），ulinastatin group（UC group）and combination therapy group（UN）group 15 example. Stored autologous blood groups：patients with 400ml of blood for three days before the surgery，when your hands are bleeding or transfusion after surgery. Combination therapy group：patients at the time of preoperative 7d starting daily 200，000 U Ulinastatin co-4d，and the third day to take intravenous preoperative autologous blood 400ml. UTI Group：Patients UTI medication the same way as the combined treatment group，but in the preoperative erythrocyte suspension with 2U（400 ml），after the completion of surgery to stop bleeding after surgery or input；T lymphocytes was measured by flow cytometry. cell subsets CD3+，4+，8+，NK cells cells（CD56+）by the number of CD CD，and calculate the CD4+/ CD8+ratio. Results CD3+，CD4+，NK cells and the ratio of the number of patients in group P before anesthesia CD4+/CD8+were lower than the UC group and UN groups，and CD8+were higher than UC group and UN group；postoperative 1d UN group and UC was still higher than P group，which UN group than UC group；3d after each set of values began to recover，CD3+UN group，the difference was not statistically significant（P＞0.05 before CD4+，the ratio of CD4+/ CD8+and the number of NK cells and surgery），while the other two were still lower than the preoperative level；indicatorswere

to preoperative levels 5d after three groups of patients，compared with the preoperative difference was not statistically significant（P＞0.05）. Conclusions UTI pretreated stored autologous blood transfusions by improving cellular immunity in cancer patients before surgery inhibiting cell patients improve immune function，and promote early recovery of patients.

Ulinastatin Stored autologous blood Colorectal cancer Cellular immunity.

274000 山东省菏泽市立医院输血科

1.3麻醉方法 麻醉诱导：静脉给予咪唑安定0.15mg/ kg、舒芬太尼1μg/kg，2min后行依托咪酯麻醉诱导。患者意识消失后静脉推注罗库溴铵0.6mg/kg。待肌松充分后行气管内插管，插管成功后予以机械通气，通气参数为Vt 8～10ml/kg，RR 12～18次/min，调整参数并维持Pet CO235～45mmHg，持续输注瑞芬太尼0.25μg/（kg·min），顺阿曲库铵0.2mg/（kg·h）。术中调节依托咪酯的剂量，血压高于基础值20%给予乌拉地尔，低于基础值20%则给予多巴胺；心率＞100次/min给予艾司洛尔，＜55次/min给予阿托品。术中维持循环稳定，手术结束后清理呼吸道分泌物，待患者呼吸、意识、咳嗽、吞咽反射恢复后拔除气管导管；患者意识清楚后送回病房。

1.4观察指标 两组病例均在麻醉诱导前、输血前、手术后第1天、手术后第5天分别抽取静脉血2ml，肝素抗凝，将100μl抗凝全血加入单抗20μl试管中，室温反应25min加入溶血剂2ml，室温放置10min，2000r/min离心，5min后弃上清液，加入PBS 2ml 2 000r/min离心，5min后弃上清液洗涤2次，加1% 多聚甲荃500μl 固定，置4℃保存上机检测，以流式细胞仪（美国FACScan 型）测定T淋巴细胞亚群CD3+、CD4+、CD8+、NK细胞胞（CD56+）的数量，计算CD4+/ CD8+比值。

1.5统计学方法 采用SPSS 17.0统计软件。计量数据以（±s）表示，组间比较采用t检验，组间采用方差分析。P＜0.05为差异有统计学意义。