慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉患者鼻黏膜组织中YKL-40及TLR4的表达变化及意义

王爱平，孙海波

（1辽宁中医药大学，辽宁大连116600；2辽宁中医药大学附属医院）

慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉患者鼻黏膜组织中YKL-40及TLR4的表达变化及意义

王爱平1，2，孙海波1，2

（1辽宁中医药大学，辽宁大连116600；2辽宁中医药大学附属医院）

目的 观察几丁质酶3样蛋白1（YKL-40）及Toll样受体4（TLR4）在慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉患者窦口鼻道复合体黏膜组织中的表达变化，并探讨其临床意义。方法 留取46例慢性鼻-鼻窦炎伴息肉患者（伴息肉组）和41例不伴息肉患者（不伴息肉组）的窦口鼻道复合体黏膜标本，30例鼻中隔偏曲患者（对照组）的正常鼻黏膜组织标本。采用实时荧光定量PCR法检测鼻黏膜组织中YKL-40、TLR4、核因子κB（NF-κB）、白细胞介素1β（IL-1β）、环氧化酶2（COX-2）mRNA表达，Pearson相关分析变量间的关系。结果 伴息肉组鼻黏膜组织中YKL-40、TLR4、NF-κB、IL-1β、COX-2 mRNA相对表达量均高于不伴息肉组、对照组（P均＜0.05）；Pearson相关分析显示，伴息肉组鼻黏膜组织中YKL-40 mRNA相对表达量与TLR4 mRNA、NF-κB mRNA相对表达量呈正相关（r分别为0.416、0.364，P均＜0.05）。结论 慢性鼻-鼻窦炎伴鼻息肉患者鼻黏膜组织中YKL-40、TLR4、NF-κB呈高表达，YKL-40、TLR4可能协同作用参与激活NF-κB信号通路促进病情进展。

慢性鼻-鼻窦炎；鼻息肉；几丁质酶3样蛋白1；Toll样受体4；核因子κB信号通路

慢性鼻-鼻窦炎发病机制复杂，病程迁延反复［1］，包括伴鼻息肉和不伴鼻息肉两种亚型［2］。然而，这两种亚型的发生机制、治疗手段及预后等均存在差异［3］。研究表明，几丁质酶3样蛋白1（YKL-40）与炎性疾病的发生关系密切［3，4］。Toll样受体4（TLR4）作为Ⅰ型跨膜糖蛋白受体，可与配体结合诱导核因子κB（NF-κB）信号通路异常活化而增强炎症反应［5］。本研究对YKL-40及TLR4在慢性鼻-鼻窦炎患者黏膜组织中表达变化进行分析，探讨其在伴鼻息肉患者发病中的意义。

1　资料与方法

1.1临床资料 选取2013年2月～2015年3月在辽宁中医药大学附属医院行手术治疗的慢性鼻-鼻窦炎患者87例，均符合慢性鼻-鼻窦炎诊疗指南［2］，其中男54例、女33例，年龄（45.7±9.2）岁，伴息肉46例（伴息肉组）、不伴息肉41例（不伴息肉组），病程3～14年。排除术前1个月接受糖皮质激素类药物、抗菌药物治疗。术中均留取窦口鼻道复合体黏膜标本。同期，选取单纯外伤性鼻中隔偏曲患者30例作为对照组，男21例、女9例，年龄（44.2±8.7）岁，病程2～12 d，均留取正常鼻黏膜组织。三组均排除肿瘤、免疫功能异常、支气管疾病、肺囊性纤维化以及高血压、冠心病、糖尿病、高脂血症等慢性疾病。三组性别、年龄等比较差异无统计学意义。本研究经医院伦理委员会批准，患者均知情同意。

1.2鼻黏膜组织中YKL-40、TLR4、NF-κB、白细胞介素1β（IL-1β）、环氧化酶2（COX-2）mRNA表达检测 采用实时荧光定量PCR法。三组留取的标本经生理盐水冲洗，洗净血液及黏液，保存于-70℃冰箱中备检。组织经研磨后，用细胞裂解液裂解，利用TRIzol总RNA提取试剂盒（购自美国Invitrogen公司）提取总RNA。用逆转录试剂盒（大连宝生物公司）将总RNA逆转录为第一模板链cDNA，以cDNA为模板用PCR试剂盒（大连宝生物公司）进行检测。引物序列由生工生物工程（上海）股份有限公司设计合成，YKL-40引物序列上游：5′-TGAGGCATCGCAATGTAAG-3′，下游：5′-AAGGGGAAGTAGGATAGGGG-3′；TLR4引物序列上游：5′-TGTCCTCCCACTCCAGGTAAGT-3′，下游：5′-GATTGCTCAGACCTGGCAGTT-3′；NF-κB引物序列上游：5′-TCCAGAAGTATTTCAACCACAG-3′，下游：5′-GCCTTCACATACATAACGGA-3′；IL-1β引物序列上游：5′-ACCTGCTGGTGTGTGACGTT-3′，下游：5′-TCGTTGCTTGGTTCTCCTTG-3′；COX-2引物序列上游：5′-TGCTGTACAAGCAGTGGCAA-3′，下游：5′-GCAGC-CATTTCCTTCTCTCC-3′；GAPDH引物序列上游：5′-CCACCCATGGCAAATTCCATGGCA-3′，下游：5′-TCTAGACGGCAGGTCAGGTCCACC-3′。PCR反应条件：94℃60 s，92℃30 s，56℃30 s，74℃30 s，38个循环。每个标品均设3个平行反应复孔。利用2-ΔΔCt公式计算目的基因相对表达量。

1.3统计学方法 采用SPSS21.0统计软件。计量资料用±s表示，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用LSD-t检验；Pearson相关分析变量间关系。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1三组鼻黏膜组织YKL-40、TLR4、NF-κB、IL-6、TNF-α mRNA表达比较 见表1。

表1　三组鼻黏膜组织中YKL-40、TLR4、NF-κB、IL-1β、COX-2 mRNA相对表达量比较（±s）

表1　三组鼻黏膜组织中YKL-40、TLR4、NF-κB、IL-1β、COX-2 mRNA相对表达量比较（±s）

注：与对照组比较，*P＜0.05；与不伴息肉组比较，＃P＜0.05。

组别nYKL-40 mRNATLR4 mRNANF-κB mRNAIL-1βmRNACOX-2 mRNA伴息肉组460.89±0.16*＃0.90±0.17*＃0.84±0.13*＃1.47±0.21*＃1.73±0.15*＃不伴息肉组410.75±0.12*0.65±0.14*0.68±0.11*1.24±0.18*1.38±0.19*对照组300.51±0.110.49±0.120.37±0.161.05±0.131.08±0.11

2.2伴息肉组鼻黏膜组织中YKL-40、TLR4、NF-κB的关系 Pearson相关分析结果显示，伴息肉组鼻黏膜组织YKL-40 mRNA相对表达量与TLR4、NF-κB mRNA相对表达量呈正相关（r分别为0.416、0.364，P均＜0.05）。

3　讨论

YKL-40是新近发现的炎性标志物，可由多种细胞分泌，在调控先天免疫系统激活中发挥重要作用［6］。有研究［5］指出，YKL-40在慢性鼻-鼻窦炎患者血浆中表达升高，且与鼻-鼻窦炎患者亚型有关。本研究结果显示，慢性鼻-鼻窦炎伴息肉组和不伴息肉组患者鼻黏膜组织YKL-40 mRNA相对表达量均高于对照组，且伴息肉组高于不伴息肉组（P均＜0.05），说明YKL-40基因在慢性鼻-鼻窦炎患者黏膜组织中呈高表达，且在伴息肉患者黏膜组织中表达更为显著，提示YKL-40可能在慢性鼻-鼻窦炎伴息肉发病中发挥重要作用。研究证实，Th2介导的体液免疫在鼻-鼻窦炎伴息肉发病中占优势，而不伴息肉者则以Th1为主，YKL-40可能参与了Th2介导的炎性反应及组织重构［7，8］。本研究证实，YKL-40在黏膜组织中表达异常可能是导致慢性鼻-鼻窦炎表型不同的原因。

研究表明，TLR4可诱导NF-κB通路激活，促使下游IL-1β和COX-2等炎性因子表达而增强炎症反应［9，10］。本研究结果显示，在慢性鼻-鼻窦炎患者鼻黏膜组织中TLR4、NF-κB、IL-1β和COX-2表达升高，且伴息肉患者更显著，提示TLR4可能通过激活NF-κB信号通路而使下游IL-1β和COX-2炎性因子表达升高，从而促进慢性鼻-鼻窦炎发生，尤其是在伴息肉患者中作用更为显著。Pearson相关分析显示，慢性鼻-鼻窦炎伴息肉组患者黏膜组织中YKL-40 mRNA表达量与TLR4 mRNA和NF-κB mRNA表达量均呈正相关，进一步说明YKL-40和TLR4可能共同作用于NF-κB信号通路而参与慢性鼻-鼻窦炎伴息肉的发生。

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10.3969／j.issn.1002-266X.2016.21.036

R765.4

B

1002-266X（2016）21-0088-02

孙海波（E-mail：402767260＠qq.com）

（2015-12-07）