幽门螺杆菌感染与胃癌发生及预后的相关性研究*

帕提玛·阿布力米提, 节阳华, 谢新梅, 张洪亮

新疆医科大学附属中医院 肿瘤二科 (乌鲁木齐 830000)



·论 著·

幽门螺杆菌感染与胃癌发生及预后的相关性研究*

帕提玛·阿布力米提, 节阳华, 谢新梅, 张洪亮△

新疆医科大学附属中医院 肿瘤二科 (乌鲁木齐 830000)

目的 探讨幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)感染与胃癌发生及预后的关系。方法 选取胃癌组织标本78例及其癌旁组织标本26例，采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测胃癌组织和癌旁组织中Hp相对感染量，分析Hp相对感染量与胃癌患者临床病理特征及预后的相关性。结果 胃癌组织Hp相对感染量明显高于癌旁组织，且同一患者胃癌组织中Hp相对感染量亦高于其癌旁组织，差异有统计学意义(P<0.01)。胃癌组织中Hp相对感染量与患者临床分期、浸润深度及有无淋巴结转移密切相关，差异有统计学意义(P<0.01)，而与性别、年龄、组织学分型及有无远处转移无关，差异无统计学意义(P>0.05)。生存分析结果显示，患者生存率与胃癌组织中Hp相对感染量呈负相关，且差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Hp感染可能参与胃癌的发生、发展及转移，可作为临床上评估胃癌进展和预后的潜在指标。

幽门螺杆菌; 胃癌; 临床病理特征; 预后

1 资料与方法

1.1 临床资料

选取2008年11月至2010年11月新疆医科大学附属中医医院病理科存档的胃癌组织标本78例，均经石蜡包埋、10%甲醛固定，且术前未行任何放化疗，其中男54例，女24例；年龄26～78岁，中位年龄61.5岁；根据美国癌症联合委员会(AJCC)TNM分期标准[5]：Ⅰ～Ⅱ期36例，Ⅲ～Ⅳ期42例。同时选取上述标本的癌旁组织26例，癌旁组织为切缘距癌灶边缘>5 cm的非癌组织。每例标本均由2位以上病理学专家诊断确诊，且病理资料完整。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂和仪器 石蜡组织DNA提取试剂盒、实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)试剂盒及实时荧光定量PCR仪均由德国凯杰公司提供。

1.2.2 实时荧光定量PCR 首先进行DNA提取，将石蜡组织切片，置入2 mL灭菌EP管后提取胃癌及癌旁组织标本DNA，采用分光光度法测定DNA纯度及质量浓度，稀释后进行分装，并置于-20 ℃冰箱保存。

HPYR1引物序列：

5′-AAT-TGGACAGCACCTTCTGG-3′

5′-GAGCCCTCAAAGAACTGCAC-3′；

内参基因GAPDH引物序列：

(2)当遇到钻杆被卡住时，使用液压绞车起拔钻杆会有断绳的危险，由于钢丝绳是一个弹性体，一旦出现断绳，会对旁边的操作者带来极大的危险。使用钢球夹紧液压起拔器时，钢球只是钻进钻杆，起拔力由液压油缸提供，不存在危及操作者的危险。

5′-GCTGGTG-CTCCAGGGGTCTTACT-3′

5′-TCAAC-GACCACTTTGTCAAGCTCA-3′

PCR产物大小分别为176 bp和121 bp，均由上海英骏生物技术有限公司合成。反应体系：12.5 μL PCR预混液，7.5 μL去核糖核酸酶水(RNase-free water)，3.0 μL模板DNA(浓度≤10 μmol/L)，各1.0 μL的10 μmol引物，共25 μL。反应条件：95 ℃预变性5 min、变性10 s，60 ℃退化延伸30 s，共40个循环。空白组Hp相对感染量设为1，Hp阴性与阳性分别定为<1和>1，实验重复3次，取平均值。Hp相对感染量=2-△△Ct，△Ct=Ct目的-Ct内参，△△Ct=△Ct目的-△Ct空白。

1.2.3 随访 以电话方式对患者进行随访，若未取得联系，可直接面访或发邮件咨询，随访截止至2015年11月。

1.3 观察指标

比较胃癌组织与癌旁组织Hp相对感染量，分析Hp相对感染量与胃癌患者临床病理特征及预后的相关性。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 Hp相对感染量比较

胃癌组织Hp相对感染量为(8.69±6.48)，癌旁组织为(4.31±2.47)，二者比较差异有统计学意义(P<0.01)；与癌旁组织相对应的26例胃癌组织Hp相对感染量为(12.27±5.26)，明显高于癌旁组织的Hp相对感染量，差异有统计学意义(P<0.01)。

2.2 Hp相对感染量与患者临床病理特征的关系

胃癌组织中Hp相对感染量与患者临床分期、浸润深度及有无淋巴结转移密切相关，差异有统计学意义(P<0.01)，而与性别、年龄、组织学分型及有无远处转移无关，差异无统计学意义(P>0.05)(表1)。

表1 Hp相对感染量与患者临床病理特征的关系±s)

2.3 Hp相对感染量与患者预后的关系

根据Hp相对感染量，将78例胃癌患者分为A组(Hp<1)19例、B组(1

图1 不同Hp相对感染量患者生存曲线比较

3 讨论

胃癌是消化系统最常见的恶性肿瘤，多由饮食不节、Hp感染、胃黏膜上皮异常增生等因素引起。据统计，我国每年有470万人因胃癌而死亡，约占全部恶性肿瘤死亡的59.2%[4]。Hp作为微需氧菌，定植于胃黏膜表面和黏膜层之间，通过分泌尿素酶而使胃黏膜屏障受损。其空泡毒素基因亦可使离子通透性发生变化，从而导致细胞空泡变性，损伤胃黏膜，引发糜烂或溃疡。60%的Hp通过产生细胞毒素相关基因A(Cag A)而发挥细胞毒效应，介导免疫和炎症反应[6]。Jiménez-Soto等[7]研究发现，慢性Hp感染与胃癌发生密切相关，其中以Cag A+Hp感染最为常见。作为胃癌发生的启动因子之一，Hp持续感染可能通过诱发慢性胃炎而损伤胃黏膜细胞DNA，为癌症发生提供先决条件，与Asaka等[8]对肠型胃癌与Hp感染关系的推断相似，即慢性Hp感染-慢性浅表性胃炎(CSG)-慢性萎缩性胃炎(CAG)-肠上皮化生-异型增生-胃癌。本研究结果显示，胃癌组织与癌旁组织Hp相对感染量比较，差异有统计学意义，且同一患者胃癌组织中Hp相对感染量明显高于其癌旁组织，表明Hp可能在胃癌的发生与发展中发挥一定作用。

近年来研究[9]发现，Hp感染与胃癌浸润及转移密切有关。Qiu等[10]通过探讨Hp感染与胃癌患者临床病理特征及预后的关系，发现Hp感染与淋巴结转移密切相关，其中Hp阴性者多见于N2和N3分期，阳性者多见于N0和N1分期。Meimarakis等[11]认为，胃癌患者中Hp阴性者多见于T3分期，阳性者多见于T1和T2分期，提示Hp可诱导胃癌发生和转移。吴军等[12]通过探讨胃癌组织Hp感染与低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的相关性，结果发现Hp感染与胃癌组织有无淋巴结转移及浸润深度有关。本研究结果显示，胃癌组织中Hp相对感染量与患者临床分期、浸润深度及有无淋巴结转移密切相关，进一步证实Hp参与胃癌的发生、发展及转移。

目前，关于Hp感染与胃癌患者预后的关系尚存在一定争议。与Hp阴性者相比，Hp阳性的胃癌患者预后更好[13]。Wang等[14]一项Meta分析表明，Hp感染在胃癌预后中起保护作用。Choi等[15]通过探讨晚期或转移胃癌患者Hp感染与化疗疗效的关系，发现与Hp阴性者相比，Hp阳性者对化疗更加敏感，且预后较好。Kim等[16]通过严格限定Hp感染状态来评估Hp阴性胃癌患者的预后，发现Hp感染状态并非是胃癌患者生存的预后因素。本研究结果显示，胃癌组织中Hp相对感染量与患者生存率呈明显负相关，说明Hp感染量越多，患者预后越差。导致上述结果差异的原因可能与患者年龄、术前是否行Hp根治、临床分期及治疗疗效有关。

综上所述，Hp感染可能参与胃癌的发生、发展及转移，临床上可作为评估胃癌进展和预后的潜在指标。

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The Correlation of Helicobacter Pylori Infection with the Occurrence and Prognosis of Gastric Cancer

Patima·Abulimiti, Jie Yanghua, Xie Xinmei, Zhang Hongliang△.

Second Department of Oncology, The Affiliated Hospital of Traditional Chinese Medicine of Xinjiang Medical University, Urumchi 830000, China

Objective To explore the correlation of helicobacter pylori (Hp) infection with the occurrence and prognosis of gastric cancer. Methods 78 specimens of gastric cancer tissues and 26 specimens of paracarcinoma tissues were selected and the real-time quantitative polymerase chain reaction (RT-PCR) was adopted to detect the Hp relative infection rate of those issue specimens. Then the analyses were made to explore the correlation of the Hp relative infection rate with the clinicopathologic features and prognosis of gastric cancer respectively. Results The Hp relative infection rate in gastric cancer tissues was significantly higher than that in paracarcinoma tissues, and it was also higher than that in paracarcinoma tissues in each individual patient (P<0.01). Meanwhile, the Hp relative infection rate in gastric cancer was significantly correlated with clinical staging, invasive depth and lymphatic metastasis respectively (P<0.01), but it was not significantly correlated with gender, age, histological classification, and distant metastasis respectively (P>0.05). The survival analysis results revealed that the survival rate of patients was negatively correlated with the Hp relative infection rate with statistical significance (P<0.05). Conclusion The Hp infection is probably involved in the occurrence, development and metastasis of gastric cancer, and it can be applied clinically as the potential indexes for assessing the progression and prognosis of gastric cancer.

Helicobacter pylori; Gastric cancer; Clinicopathological feature; Prognosis

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1705.R.20161027.1701.042.html

10.3969/j.issn.1674-2257.2016.05.006

中国高校医学期刊临床专项资金(No:11525798)

R735.2

A

△通信作者：张洪亮，E-mail: zhanghongliang@csco.cn