COX-2和VEGF与子宫腺肌病的相关性

王家美 肖淑兰



·论著·

COX-2和VEGF与子宫腺肌病的相关性

王家美 肖淑兰

目的 探讨环氧合酶-2(COX-2)和血管内皮生长因子(VEGF)在子宫腺肌病患者子宫内膜的表达及临床意义。方法 选取病理证实为子宫腺肌病标本44例(观察组)和非子宫腺肌病标本29例(对照组)，采用免疫组化法检测子宫腺肌病原位和异位子宫内膜COX-2和VEGF表达。结果 子宫肌腺病增殖期和分泌期原位和异位内膜COX-2蛋白表达阳性率分别为40.00%和57.89%、88.00%和94.74%，明显高于对照组(P<0.05)；异位内膜COX-2蛋白表达阳性率高于原位内膜(P<0.05)；子宫肌腺病增殖期和分泌期原位和异位内膜VEGF蛋白表达阳性率分别为44.00%和92.00%、73.68%和100.00%，均明显高于对照组内膜(P<0.05)；异位内膜VEGF蛋白表达阳性率高于原位(P<0.05)；COX-2和VEGF在异位内膜和原位内膜表达呈正相关(r2=0.700和0.350，P<0.05)。结论 子宫腺肌病异位内膜COX-2和VEGF高表达，且呈正相关性，可能与子宫腺肌病的发生、发展有关。

子宫腺肌病；环氧合酶-2；内皮生长因子；免疫组化

子宫腺肌症和子宫内膜异位症为临床上较为常见的妇科良性疾病，虽然属于良性疾病，但在病理特征上常具有局部浸润的特点。患者常表现为渐进性的痛经及不孕等，长期的子宫腺肌症的发生发展可导致两侧卵巢及输卵管的破坏和机化，导致卵巢功能的丧失，预后不佳[1]。对于子宫内膜异位症病因学的研究表明，子宫内膜腺体以及间质成分异位于子宫内膜以外的区域是导致疾病发生发展的主要因素，而细胞增生、局部炎症损伤以及新生血管的形成对于促进子宫内膜腺体的侵袭具有重要的调节意义[2,3]。血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)及环氧化酶2(Cyclooxygenase 2,COX-2)在调控新生血管的形成以及细胞增殖过程中具有重要意义[4,5]，本研究探讨COX-2和VEGF在子宫腺肌病患者子宫内膜的表达及临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2014年1月至2016年3月在我院行子宫切除术，且病历资料完整的患者73例，其中子宫腺肌病44例(观察组)，无症状子宫肌瘤29例(对照组)。所有患者诊断均经病理证实，术前3个月内未服用过任何激素类药物治疗。观察组：年龄35～46岁，平均年龄(41.8±1.9)岁；增殖期25例，分泌期19例；对照组：年龄37～48岁，平均年龄(43.3±2.5)岁；增殖期18例，分泌期11例。

1.2 方法 组织采用石蜡包埋，切片机切取组织，厚度5 mm，用多聚赖氨酸处理。在脱蜡之前，将切片置于60℃恒温箱中烘烤60 min。将切片用二甲苯浸泡10 min，更换二甲苯后再浸泡10 min。水化后进行抗原修复，3%H2O2一甲醇溶液处理切片15 min，加入一抗COX-2和VEGF鼠单抗(购自南京碧云天生物科技有限公司)100 μl，37℃，湿盒孵育1 h。加入增强剂50 μl，室温湿盒孵育20 min。加入HRP标记二抗(兔来源，购自南京凯基生物科技有限公司)50 μl，室温37℃，孵育30 min。每张片子加2滴新鲜配制的DAB溶液，显微镜下观察。

1.3 结果判断 以细胞浆内出现棕黄色颗粒视为阳性细胞，随机选取5个具有代表意义的高倍视野，每个视野计数100个细胞中的阳性细胞数，取平均数作为最终结果，阳性细胞数<5%为(-)，5%≤阳性细胞数<25%为(+)，25%≤阳性细胞数≤50%为(++)，阳性细胞数>50%为(+++)。

1.4 统计学分析 应用SPSS 19.0统计软件，计量资料以±s表示，采用t检验，计数资料比较采用χ2检验，相关性采用Spearman相关分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 COX-2蛋白表达情况 增殖期COX-2蛋白表达阳性率在观察组异位内膜为88.00%，在原位内膜为40.00%，均明显高于增殖期对照组内膜(χ2=28.592和6.522，P=0.000和0.011均<0.05)；增殖期观察组异位内膜COX-2蛋白表达阳性率高于原位内膜(χ2=12.500，P=0.000<0.05)。分泌期COX-2蛋白表达阳性率在观察组异位内膜为94.74%，在原位内膜为57.89%，均明显高于分泌期对照组内膜(χ2=22.006和6.914，P=0.000和0.009均<0.05)；分泌期观察组异位内膜COX-2蛋白表达阳性率高于原位内膜(χ2=7.134，P=0.008<0.05)。2组增值期和分泌期COX-2蛋白表达阳性率差异无统计学意义(P>0.05)，说明没有周期性变化。见表1。

表1 COX-2在增殖期和分泌期的表达 例

2.2 VEGF蛋白表达情况 增殖期VEGF蛋白表达阳性率在观察组异位内膜为92.00%，在原位内膜为44.00%，均明显高于增殖期对照组内膜(χ2=24.845和4.523，P=0.000和0.033均<0.05)；增殖期观察组异位内膜VEGF蛋白表达阳性率高于原位内膜(χ2=11.524，P=0.001<0.05)。分泌期VEGF蛋白表达阳性率在观察组异位内膜为100%，在原位内膜为73.68%，均明显高于分泌期对照组内膜(χ2=15.771和4.043，P=0.000和0.044均<0.05)；分泌期观察组异位内膜VEGF蛋白表达阳性率高于原位内膜(χ2=5.758，P=0.016<0.05)。各组增值期和分泌期VEGF蛋白表达阳性率差异无统计学意义(P>0.05)。见表2。

表2 VEGF在增殖期和分泌期的表达 例

2.3 COX-2和VEGF蛋白表达的相关性分析 经Spearman等级相关分析，COX-2和VEGF在异位内膜和原位内膜表达呈正相关(r2=0.700和0.350，P<0.05)。见表3、4。

表3 COX-2和VEGF在异位内膜表达的相关性 例

表4 COX-2和VEGF在原位内膜表达的相关性 例

3 讨论

子宫内膜异位症为临床上较为常见的良性侵袭性疾病，在妇产科临床工作中，子宫内膜异位症的诊治已由单纯的手术治疗向内分泌联合手术根治性治疗的阶段转化。GNRH类药物联合腹腔镜下内异症病灶剥除术虽然可以缓解75%左右的痛经症状，并使得术后成功妊娠的几率增加至45%[6,7]。但回顾性分析研究表明，子宫内膜异位症术后5年的复发率高达25%以上，且重症子宫内膜异位症患者的卵巢功能破坏和衰竭的发生率可达15%以上[8,9]，提示现阶段临床上对于疾病诊治的困境。同时对于异位症发展过程中相关生物学分子标志物的研究，将为疾病的内分泌治疗提供新的靶点。COX-2参与各种损伤性化学、物理和生物因子激活磷脂酶A2水解细胞膜磷脂，生成花生四烯酸，并参与到催化加氧生成前列腺素等病理过程，COX2对于增强子宫内膜腺体的侵袭能力并加剧局部炎症损伤，从而进一步促进内膜腺体以及间质成分对于卵巢皮质的侵袭[10,11]。相关研究也证实，通过特异性抑制COX-2可以有效抑制腹腔镜术后的卵巢内异症的复发率，并提高成功妊娠几率[12]；VEGF 是参与调控血管生成的最重要的血管生长因子，VEGF对于维持内异症患者新生组织的血管活性，从而保持卵巢异位症病灶的腺体活性和增殖能力具有重要意义[13]。本研究的创新性在于通过区分不同月经周期的内膜腺体中的COX以及VEGF的含量的变化，并进行蛋白水平的分析和二者相关性的分析，从而为揭示COX以及VEGF在子宫内膜异位症发生发展中的作用作出贡献。

本研究发现异位症患者子宫内膜分泌期以及增殖期中的COX含量明显高于正常对照人群，而异位症病灶组织中的COX蛋白表达水平可进一步上升，阳性表达率可达90%左右，提示COX与子宫内膜异位症的发生发展可能具有显著的关联。COX对于局部前列腺素合成的影响可以促进局部炎症因子如IL-6以及IL-8的生成，进而影响到局部子宫内膜腺体的对于输卵管或者卵巢间质的侵袭能力，促进间质浸润和卵巢皮质的破坏。Machado等[14,15]通过回顾性分析了93例重症子宫内膜异位症患者腹腔镜术后切除组织的免疫组化资料，发现在发生子宫直肠凹侵袭和子宫内膜腺体侵犯的患者中，COX的表达阳性率可达76%以上，且随着内异症患者临床分期的增加，COX的阳性率可进一步上升。子宫内膜异位症腺体等组织成分需要具有很强的血管生成能力从而维持局部异位内膜的血流供应，本研究中发现增殖期以及分泌期的VEGF蛋白表达阳性率在观察组异位内膜为95.00%左右，特别是在分泌期子宫内膜腺体中几乎全部表达，而异位内膜中的VEGF蛋白表达阳性率可进一步上升，明显高于原位内膜，统计学差异较为明显，提示VEGF同样是促进疾病发生发展的重要因素。VEGF阳性表达率的上升可以促进异位症腺体组织侵袭、发展,使病灶不断扩大,加速异位内膜的种植和对于卵巢功能的破坏。另外，对于COX以及VEGF关系的研究也发现，COX-2和VEGF在异位内膜和原位内膜表达呈正相关，提示COX-2和VEGF在促进腺体侵袭能力的改变以及维持新生血管的活性等方面可能具有一定的协同作用，但相关机制仍然需要进一步探讨。

综上所述，子宫腺肌病异位内膜COX-2和VEGF高表达，二者是增强内膜腺体的侵袭能力和诱导新生血管的主要调控因子, 在子宫腺肌病的发生 、 发展中可能存在重要的相关性，但具体机制仍然需要进一步增大样本量进行探讨。

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The correlation between COX-2 as well as VEGF and adenomyosis

WANGJiamei,XIAOShulan.DepartmentofObstetrics,TCMHospitalofShiyanCity,Hubei,Shiyan442000,China

Objective To investigate the expression and clinical significance of cyclooxygenase-2 (COX-2) and vascular endothelial growth factor (VEGF) in endometrium of patients with adenomyosis.Methods The 44 cases of adenomyosis specimens identified by pathological examination were served as observation group,and the other 29 cases of non-adenomyosis specimens were served as control group.The expression levels of of COX-2 and VEGF in situ and ectopic endometrium were detected by immunohistochemisty.Results The positive expression rates of COX-2 protein in situ and ectopic endometrium at proliferative phase and secretory phase in observation group were 40.00% and 57.89%,88.00% and 94.74%,respectively,which were significantly higher than those in control group (P<0.05). The positive expression rate of COX-2 protein in ectopic endometrium was significantly higher than that in situ endometrium (P<0.05). The positive expression rates of VEGF protein in situ and ectopic endometrium at proliferative phase and secretory phase in observation group were 44.00% and 92.00%,73.68% and 100.00%,respectively, which were significantly higher than those in control group (P<0.05). The positive expression rate of VEGF protein in ectopic endometrium was significantly higher than that in situ endometrium (P<0.05).The expressions of COX-2 and VEGF in ectopic endometrium were positicely correlated to those in situ endometrium (r=0.700 and 0.350,respectively,P<0.05).Conclusion The high-expressions of COX-2 and VEGF exist in ectopic endometrium of patients with adenomyosis,moreover, there is a positive correlation between them,which may be related with the pathogenesis and development of adenomyosis.

adenomyosis; cyclooxygenase-2; vascular endothelial growth factor; immunohistochemistry

10.3969/j.issn.1002-7386.2016.22.005

项目来源：湖北省自然科学基金资助项目(编号:2015FFB04210)

442000 湖北省十堰市中医医院产科

R 711.74

A

1002-7386(2016)22-3382-03

2016-05-02)