急性脑梗死患者血清miR-181c水平与认知功能受损的关系

张仕娟，刘月华，李乃坤，陈传磊，孙锡波，李炳选

(1潍坊医学院附属益都中心医院，山东青州262500；2青州市人民医院)



急性脑梗死患者血清miR-181c水平与认知功能受损的关系

张仕娟1，刘月华2，李乃坤1，陈传磊1，孙锡波1，李炳选1

(1潍坊医学院附属益都中心医院，山东青州262500；2青州市人民医院)

目的 分析与急性脑梗死患者血清微小RNA-181c(miR-181c)水平与认知功能受损的关系。方法 收集158例急性脑梗死患者，其中梗死后存在认知功能受损67例(受损组)，认知功能正常91例(正常组)。采用实时荧光定量PCR技术检测血清miR-181c，用多元线性回归分析法分析认知功能受损发生的影响因素，以受试者工作特征曲线(ROC曲线)评估血清miR-181c预测认知功能受损的价值。结果 受损组及正常组血清miR-181c相对表达量为1.57±0.19、1.32±0.15，两组比较P<0.05。多元线性回归分析显示，血清miR-181c、年龄、HbA1c、血Hcy、相关脑功能区梗死是急性脑梗死患者发生认知功能受损的独立影响因素(P均<0.05)。ROC曲线分析显示，当血清miR-181c截断值为1.33时，其预测急性脑梗死患者发生认知功能受损的曲线下面积为0.813(95%CI：0.746～0.880)，灵敏度为91.0%，特异度为58.2%。结论 急性脑梗死后认知功能受损患者血清miR-181c水平升高，血清miR-181c水平升高是急性脑梗死后认知功能受损的独立危险因素和预测指标。

急性脑梗死；微小RNA-181c；认知功能受损

急性脑梗死作为脑卒中的主要类型，具有发病率高、致残率高、致死率高等特点，且呈现发病年龄年轻化趋势[1]。认知功能受损是急性脑梗死后患者常见并发症，发病率高，不利于患者康复，且对患者生存质量造成严重影响[2]。微小RNA(miRNA)作为广泛存在于生物体内的高度保守的短小RNA，在调控细胞增殖、分化、凋亡及免疫、炎症反应等多种生物学功能中发挥重要作用[3～5]。miR-181c是miRNA的重要类型，其过表达可导致线粒体复合物Ⅳ重构及功能紊乱[6]，增加活性氧的产生。文献[7]报道，缺氧预处理可通过下调miR-181c表达而减少大鼠脑缺血损伤[7]。本研究对急性脑梗死患者血清miR-181c水平进行检测，并探讨其与急性脑梗死后认知功能障碍发生的关系。

1 资料与方法

1.1 临床资料 纳入标准：①符合第四届全国脑血管病学术会议修订的《各类脑血管疾病诊断要点》中急性脑梗死诊断标准[8]；②首次发病，发病时间<7 d；③年龄36～78岁。排除标准：①合并精神异常及昏迷者，脑梗死前已合并认知功能受损者；②合并有感染、恶性肿瘤、代谢性疾病、神经系统退行性病变者；③言语交流障碍及视听功能障碍者；④入院第14天汉密尔顿抑郁量表(HAMD)评分>6分者。选取2014年3月～2015年4月益都中心医院收治的符合标准的急性脑梗死患者158例，男83例、女75例，年龄(58.3±8.5)岁。发病后第28天利用中文版蒙特利尔认知评估量表(MoCA)[9]评估患者认知功能，其中MoCA评分≥26分91例(正常组)，<26分67例(受损组)。

1.2 血清miR-181c检测方法 采用实时荧光定量PCR技术。所有患者于入院后次日抽取空腹静脉血6 mL，室温条件下，30 min内用离心机取3 500 r/min离心10 min，留取血清，保存于-30 ℃冰箱以备检。取血清，加入细胞裂解液进行裂解后，用TRIzol总RNA提取试剂盒提取总RNA，利用紫外分光光度计检测总RNA纯度，取A260/A280≥1.80样品作为合格样品。用逆转录试剂盒将总RNA逆转录为模板单链cDNA，以cDNA为模板用PCR试剂盒进行PCR。引物序列：miR-181c上游引物为5′-AACAUUCAACCUGUCGGUGAGU-3′，下游引物为5′-UCACCGACAGGUUGAAUGUUUU-3′；U6上游引物为5′-TCAGTTTGCTGTTCTGGGTG-3′，下游引物为5′-CGGTTGGCTGGAAAGGAG-3′。PCR反应条件：92 ℃ 1 min，92 ℃ 30 s，56 ℃ 30 s，74 ℃ 30 s，连续进行40次循环。每个样品均设置3个反应复孔，用2-ΔΔCt法计算血清miR-181c相对表达量。

2 结果

2.1 两组血清miR-181c相对表达量比较 受损组及正常组血清miR-181c相对表达量为1.57±0.19、1.32±0.15，两组比较P<0.05。

2.2 急性脑梗死患者发生认知功能受损的影响因素 结果显示血清miR-181c、年龄、HbA1c、Hcy、相关脑功能区梗死是急性脑梗死患者MoCA评分的独立影响因素(P均<0.05)。详见表1。

表1 急性脑梗死患者发生认知功能受损的相关影响因素

2.3 血清miR-181c预测急性脑梗死患者发生认知功能受损的价值 ROC曲线分析显示，当血清miR-181c截断值为1.33时，其预测急性脑梗死患者发生认知功能受损的曲线下面积为0.813(95%CI：0.746～0.880)，其灵敏度为91.0%，特异度为58.2%。

3 讨论

急性脑梗死占全部脑卒中的70%～85%，是由于脑部供血血管狭窄甚至闭塞引起脑供血不足所致。患者在解除血管梗阻恢复血供后，有45%～76%的患者会出现不同程度认知功能受损[10]，然而目前脑梗死后发生认知功能受损的相关机制尚未完全清楚。

研究表明[11]，miRNA与神经系统发育及功能密切相关。亦有研究指出[12]，急性脑梗死患者血清miRNA表达谱发生改变。常虹等[13]认为，急性脑梗死患者血清miR-151a-3p水平显著升高，且与炎症反应相关，有可能成为急性脑梗死诊断的潜在生物学标志物。Zhou等[14]研究指出，急性脑梗死患者血清miR-21和miR-24有望成为早期诊断急性脑梗死的潜在指标。研究[15]发现，miR-181c是在细胞核内完成编码，在细胞质中进行组装，最后移至线粒体并结合至mt-cox1 mRNA的3′非编码片段上，对线粒体功能进行调控。miR-181c表达失调可抑制mt-cox1蛋白表达而使mt-cox2和mt-cox3蛋白表达上调，从而导致线粒体复合物Ⅳ重构及线粒体功能紊乱。亦有研究[16]指出，miR-181c是心肺复苏后大鼠皮质区凋亡相关miRNA，可出现表达上调。研究[17]表明，急性脑梗死所致神经元凋亡与线粒体功能紊乱密切相关。而miR-181c参与并影响线粒体基因组蛋白编码，过表达可影响线粒体功能，降低其表达可减少神经元损伤[18]。胡潇方等[7]指出，缺氧预处理可降低卒中大鼠脑组织内miR-181c表达，而提高mt-cox1蛋白表达。

本研究显示，认知功能受损的患者血清miR-181c相对表达量均高于认知功能正常患者。说明血清miR-181c水平可能与急性脑梗死所致神经元损伤严重程度有关，从而影响患者认知功能。本研究还显示，血清miR-181c是急性脑梗死患者发生认知功能异常的独立影响因素，说明除了目前已知的年龄、HbA1c和相关脑功能区梗死这些指标外，血清miR-181c水平亦可影响患者MoCA评分。其原因可能是miR-181c与缺血区神经元凋亡有关，miR-181c水平升高则预示神经元损伤严重。本研究还发现，急性脑梗死患者血清miR-181c在预测发生认知功能受损时，曲线下面积为0.813(95%CI：0.746～0.880)，当血清中miR-181c相对表达量为1.33时，灵敏度为91.0%，特异度为58.2%。说明血清miR-181c对急性脑梗死患者发生认知功能受损具有一定的预测价值，是潜在的预测急性脑梗死患者发生认知功能受损的生物学指标。

综上所述，急性脑梗死患者血清miR-181c水平升高，且与脑梗死后认知功能受损有关；血清miR-181c水平升高是急性脑梗死后认知功能受损的独立因素和预测指标，有望成为早期识别和预测急性脑梗死后认知功能受损的指标。

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山东省潍坊市科技局科研课题自助项目(2015WS109)。

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.38.033

R743.33

B

1002-266X(2016)38-0090-03

2016-05-12)