PTENmRNA和hTERTmRNA与子宫内膜样腺癌生物学行为关系的探讨

张桂香，齐洁敏，王 闯，赵学东，庄新荣

（1.承德医学院附属医院，河北 承德 067000

2.承德医学院病理教研室，河北 承德 067000）

PTENmRNA和hTERTmRNA与子宫内膜样腺癌生物学行为关系的探讨

张桂香1，齐洁敏2，王 闯2，赵学东1，庄新荣1

（1.承德医学院附属医院，河北 承德 067000

2.承德医学院病理教研室，河北 承德 067000）

目的：探讨PTENmRNA、hTERTmRNA在子宫内膜样腺癌中的表达及其与生物学行为的关系。方法：采用原位杂交法检测50例子宫内膜样腺癌组织和50例正常子宫内膜组织PTENmRNA、hTERTmRNA的表达情况，分析二者与子宫内膜样腺癌生物学行为的关系。结果：PTENmRNA、hTERT-mRNA在子宫内膜样腺癌组织中的阳性表达率分别为30.0％和78.0％。PTENmRNA、hTERTmRNA表达与子宫内膜样癌的分化程度、FIGO分期、淋巴结转移及浸润深度均有关，差异具有统计学意义（P＜0.05)。结论：PTENmRNA和hTERTmRNA与子宫内膜样腺癌的发生、发展密切相关，联合检测PTENmRNA和hTERTmRNA可作为评估子宫内膜样腺癌恶性程度和预后预测的指标。

子宫内膜样腺癌； PTENmRNA； hTERTmRNA； 原位杂交

本研究采用原位杂交技术检测了子宫内膜样腺癌组织PTENmRNA与hTERTmRNA的表达情况，并进行分析。

1 资料与方法

1.1 临床资料：选择2011年6月至2013年6月间经病理证实为子宫内膜样腺癌而入住承德医学院附属医院接受手术治疗的患者50例为研究对象，年龄39～69岁，平均年龄（51.6±2.8）岁，子宫内膜癌手术－病理分期（按2009年FIGO标准）。取同时间段因子宫肌瘤行子宫切除术的正常子宫内膜50例做对照，平均年龄（52.3±2.9）岁，二者年龄差别无统计学意义（t＝1.058，P＞0.05）。所有研究对象在术前均未接受放化疗。

1.2 主要试剂：PTEN和hTERT原位杂交试剂盒均购于武汉博士德生物工程有限公司。AMRESCO生产的DEPC。DAB显色剂购自福建迈新生物技术有限公司。由河北省承德医学院病理教研室提供PBS、苏木素、伊红、中性树脂胶等。

1.3 原位杂交法（ISH）：①切片5μm厚，烤片60℃1h；石蜡切片常规脱蜡进水；②30％过氧化氢处理10min以灭活内源性酶；③滴3％柠檬酸新鲜稀释的胃蛋白酶，37℃消化15min，暴露mRNA核酸片段；④用1％多聚甲醛后固定；⑤预杂交：滴加30l预杂交液，放入恒温箱38℃，时间为3h；⑥杂交：滴加40l杂交液，恒温箱37℃杂交过夜；⑦杂交后洗涤：2×SSC洗涤5min×2次，0.5×SSC洗涤15min，0.2×SSC洗涤15min。37℃水温；⑧滴加封闭液：37℃孵育30min；⑨滴加生物素化鼠抗地高辛，37℃，时间为 1h；滴加 SABC，37℃，时间为24min；滴加生物素化过氧化物酶，37℃，时间为20min；⑩DAB显色，苏木素复染，水洗，酒精逐级脱水，二甲苯透明，中性树脂胶封片，镜下观察。

表1 PTENmRNA、hTERTmRNA在子宫内膜样腺癌组织和正常子宫内膜组织中的表达情况

1.4 结果判定：取实验中滴加不含探针的杂交液者为阴性对照，以阳性切片做阳性对照。PTENmRNA阳性表达和hTERTmRNA阳性表达均主要定位于细胞浆，呈综黄色颗粒状。阳性表达等级采用阳性细胞数评分和染色强度评分综合确定。其中染色强度评分：无杂交信号，颜色与背景一致者为0分，浅黄色的弱阳性信号为1分，清晰可辨的棕黄色阳性信号为2分，颜色较深的棕黄色记为3分；阳性细胞数评分：随机选5个视野（×400倍），计数细胞中染色阳性细胞数并计分，阳性细胞数＜10％为0分，≥10％而＜25％为1分，≥25％而＜50％为2分，≥50％为3分。将二种评分之和作为等级判定结果：之和0分记为（－），1～2分记为（＋），3～4分记为（＋＋），5～6分记为（＋＋＋）。

1.5 统计分析：采用SPSS13.0统计软件进行分析，计数资料描述采用例数和率，组间比较采用χ2检验。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 PTENmRNA和hTERTmRNA的表达情况：子宫内膜腺癌组织PTENmRNA、hTERTmRNA的阳性率分别为30.0％和78.0％，与正常子宫内膜组织比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.2 PTENmRNA和hTERTmRNA表达与子宫内膜样腺癌生物学行为的关系：子宫内膜样腺癌组织PTEN-mRNA和hTERTmRNA的表达与年龄无关，差异无统计学意义（P＞0.05），与子宫内膜腺癌的分化程度、FIGO分期、淋巴结转移、浸润深度有关，差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 PTENmRNA、hTERTmRNA阳性表达与子宫内膜样腺癌生物学行为的关系

3 讨 论

（PTEN）具有双特异磷酸酶活性的抑癌基因，PTEN基因突变使其蛋白质表达缺失，丧失抑制细胞增殖功能，促进细胞恶性转化。Lacey等研究证实小鼠的PTEN基因失活会导致子宫内膜增生，并且发展成为子宫内膜癌[1]。目前有研究发现PTEN蛋白在多种恶性肿瘤中如Ⅰ型子宫内膜癌[2]、恶性胶质瘤、喉癌、肝癌等恶性肿瘤中表达缺失。PTENmRNA是否与相应的蛋白变化一致，本研究应用原位杂交方法检测了子宫内膜样腺癌组织和正常子宫内膜组织中PTEN-mRNA的表达，结果显示PTENmRNA阳性表达主要位于细胞浆中，且较正常子宫内膜组织中表达降低，差异具有统计学意义（P＜0.05），与PTEN蛋白在子宫内膜样腺癌的表达缺失现象一致。而且本实验结果显示PTENmRNA与子宫内膜样腺癌的分化程度、FIGO分期、浸润深度、淋巴结转移呈负相关，提示PTENmRNA低表达或缺失促进了子宫内膜样腺癌的发生、发展。

端粒酶是一种逆转录酶，以自身RNA为模板合成端粒，以维持端粒长度，稳定细胞染色体形态，从而逃避了因端粒缩短引起的细胞凋亡，使细胞保持分裂增殖，获得永生化的能力，导致肿瘤的发生。hTERT是端粒酶活性的限速因子，它可以激活并上调端粒酶的活性。目前有研究发现，hTERT蛋白在胃癌[3]、肝癌、肺癌、肠癌等恶性肿瘤细胞中都有高表达。hTERTm-RNA是否与相应的蛋白一样在恶性肿瘤组织中明显升高，本研究采用原位杂交方法检测hTERTmRNA在子宫内膜样腺癌中的表达，多为中、强阳性表达，并且表达率高达78.0％，且与分化程度、FIGO分期、浸润深度、淋巴结转移呈正相关，与hTERT蛋白在I型子宫内膜癌中的高表达呈现高度一致性[5]。从而说明hTERTmRNA与子宫内膜腺癌的发生、发展有密切的关系。

总之，本研究发现PTENmRNA在子宫内膜样腺癌组织中的阳性表达率低于正常子宫内膜组织，而hTERTmRNA在子宫内膜样腺癌组织中表达升高。而且两者均与子宫内膜样腺癌的分化程度、FIGO分期、浸润深度、淋巴结转移有关，由此表明PTENmRNA、hTERTmRNA在子宫内膜腺癌的发生、发展中起重要作用，可作为子宫内膜样腺癌诊断及评估预后的生物学标记物。

[1]lacey JV Jr，Mutter GL，Ronnett BM，et al.Pten expression in endometriosis biopsies as a marker of progression to endometriosis carcinoma[J].Cancer Res，2008，68（14)：6014～6020.

[2]张桂香，李春辉，齐洁敏，等.PTEN、P53及hTERN在Ⅰ型子宫内膜癌中的表达[J].河北医学，2013，19（12)：1787～1790.

[3]齐洁敏，高玉峰，任立群.老年人胃癌中PTEN和hTERT表达及两者相关性[J].中国老年学杂志，2008，28（1)：79～80.

Investigating the Relationship of PTENmRNA and hTERTmRNA to the Biological Behavior in Endometrioid Adenocarcinoma

ZHANG Guixiang，et al

（The Affiliated Hospital of Chengde Medical College，Hebei Chengde067000，China)

Objective：To investigate the expression of PTENmRNA and hTERTmRNA in endometrioid adenocarcinoma，and evaluate the relationship of their expression to the biological behavior of endometrioid adenocarcinoma.Methods：The expression of PTENmRNA and hTERTmRNA of the 50 patients with endometrioid adenocarcinoma and 50 patients with normal endometrium were observed by in situ hybridization，then evaluated their influence to the biological behavior of endometrioid adenocarcinoma.Results：The positive expression of PTENmRNA and hTERTmRNA were 30.0％and 78.0％respectively.The expression of PTENmRNA and hTERTmRNA were correlated with tumor differentiation，FIGO staging，lymphnode metastasis and muscular infiltration of endometrioid adenocarcinoma（P＜0.05).Conclusion：The expression of PTENmRNA and hTERTmRNA are related to the formation and development of endometrioid adenocarcinoma.Combined detection of PTENmRNA and hTERTmRNA expression can be used as an index to evaluate the malignant degree and prognosis of endometrioid adenocarcinoma.

Endometrioid adenocarcinoma； PTENmRNA； hTERTmRNA； In situ hybridization

1006－6233（2016)10－1604－04

A【doi】10.3969/j.issn.1006－6233.2016.10.009