猪圆环病毒和链球菌混合感染的诊断

马莉莉,王宇婷,倪宏波

(黑龙江八一农垦大学动物科技学院,黑龙江 大庆 163319)

猪圆环病毒和链球菌混合感染的诊断

马莉莉,王宇婷,倪宏波⋆

(黑龙江八一农垦大学动物科技学院,黑龙江 大庆 163319)

2016年7月,黑龙江省大庆市某猪场爆发猪病,临床主要表现体温升高、食欲废绝等症状。无菌提取病猪肺脏DNA、RNA,经分离纯化后PCR进行检测,同时进行细菌鉴定、生化试验等。PCR扩增结果诊断为猪圆环病毒和链球菌的混合感染。药敏试验结果表明该分离菌对强力霉素、头孢咪唑、氟哌酸高度敏感,并给猪场提出了有效的防治措施,为猪场对该类疾病的防控提供了参考。

猪圆环病毒;链球菌;混合感染;药敏试验

猪圆环病毒病(Porcine circovirus disease)是由猪圆环病毒引起的猪一种新的传染病,其临床诊断表现多种多样,会造成免疫系统的降低,主要特征为体质下降、贫血、腹泻及内脏器官等广泛病理变化,特别是肾脏、脾脏及全身淋巴结高度肿大、出血和坏死等［1]。目前认为猪圆环病毒对免疫系统的破坏是引起猪病的重要原因。猪链球菌病(Streptococcus suis)是由链球菌属中致病性链球菌所致的一种传染病,一年四季均可发生,多发于3～12周龄的猪,尤其是断奶仔猪易感染此病,链球菌一般会在很多诱因条件下才会发生作用,如若管理环境较差也会引起此病。主要表现为心内膜炎、关节炎、脑膜炎等,可呈地方性暴发,死亡率很高,给养猪业造成巨大的经济损失［2]。因此猪场要加强管理,减少应激因素,增强猪的免疫力,避免多种疾病的混合感染等。

1 发病情况

黑龙江省大庆市某猪场有300头猪,2016年7月该猪场部分猪突然体温升高至42℃,流行病学调查得知该猪场发病率25%,死亡率5%,发病的猪表现食欲废绝,呼吸困难,体温升高,皮肤苍白,消瘦,共济失调;病猪也可能出现咳嗽、喉头出血、肺脏病变严重、胃黏膜出血严重、胃黏膜出血严重、肾脏有出血点、脾脏边缘有突起等临床症状。

2 剖检变化

病死猪耳根部、背部和股内侧皮肤有红色点状和片状红斑,背部皮肤潮红,部分猪腹下、臀部皮肤出现不规则隆起丘疹,呈现出紫色状。切开两上前肢,取出颌下淋巴结,淋巴结呈化脓性病变;打开胸腔,见心包积液;肺表面肿胀坏死;打开腹腔,脾脏边缘有突起;出现胸膜炎、腹膜炎,心包膜内有大量炎性渗出物、有积液;肺呈弥散性、间质性肺炎变化、肿大等(如图1和2)。通过流行病学调查、临床症状和病理剖检变化初步怀疑为猪圆环病毒和链球菌混合感染,但还需进一步通过实验室方法来确诊。

图1 肺脏表面淤血并且肿胀Fig.1 Lung congestion and swelling o f the surface

图2 肝脏肿大有出血点Fig.2 The liver is swollen have haemorrhage

3 实验室诊断

3.1 细菌学检测无菌采取病死猪的肝脏、肺脏接种于血琼脂培养基中,37℃培养24 h,观察到长出光滑圆润细小菌落,菌落周围形成β溶血环;对其进行革兰氏染色镜检,可见呈圆形或卵圆形呈链状或成双排列的球菌,革兰氏染色为阳性(如图3)。

3.2 生化鉴定细菌纯培养后,分别接种于葡萄糖、蔗糖、乳糖、明胶、甘露醇等系列生化培养基,37℃培养24 h后观察其生化反应特性(见表1)。生化鉴定结果符合猪链球菌的特性即分解葡萄糖产酸,表明该分离菌株为链球菌。

图3 圆形链状排列球菌(10×10)Fig.3 Circular catenation aureus(10×10)

表1 生化试验结果Table1 The results of biochemical experiment

3.3 药敏试验在血平板上培养纯化的单菌落,贴药敏片于培养基进行37℃培养,通过测定抑菌环的直径来鉴别耐药性。结果表明,该分离菌对青霉素、链霉素、卡那霉素等产生较强的耐药性;对强力霉素、头孢咪唑、氟哌酸高度敏感;对环丙沙星、恩诺沙星等中敏(见表2)。

3.4 PCR PCR检测按照TIANamp Virus DNA/RNA Kit病毒基因组DNA/RNA提取试剂盒提取病毒的DNA和RNA,用多杀性巴氏杆菌、链球菌、蓝耳病毒、圆环病毒、猪瘟病毒等特异性引物进行PCR反应扩增。引物参照GenBank发表的基因序列设计并合成(见表3)。结果显示,第4泳道在700 bp左右有一条带,与链球菌片段相符;第5泳道在500 bp有一条带,与圆环病毒片段相符。综合该病例的发病情况、临床症状、剖检变化以及相应实验室诊断可以确诊该病例为猪圆环病毒和链球菌混合感染。

图4 PCR产物琼脂糖凝胶电泳结果Fig.4 PCR products agarose gel electrophoresis results

表3 引物列表Table3 Primer sequences

4 讨论

大庆市某猪场送检的病猪通过实验室诊断确诊为猪圆环病毒病毒和链球菌的混合感染。虽然该猪场接种了相关疫苗,但抗体水平不足以抵抗病毒的侵袭,造成疫病流行,所以应制订合理的免疫程序,合理地投喂抗生素,避免继发感染［3]。①近年来随着集约化、规模化养猪业的发展,猪场的疾病情况更加复杂。猪圆环病毒与猪链球菌混合感染表现为发病快、病程短、死亡率高等特点,一旦发病,将给养猪场造成很大经济损失,因此猪场必须建立健全卫生防疫制度,严格控制,监督执行［4]。②严格消毒、搞好环境卫生、疫苗接种等综合防治措施,避免病原的侵入。猪场全面消毒环境净化,猪场环境要经常消毒,疫情严重威胁时,在多数猪场尚无多点生产体系情况下,保育舍和育肥舍要做到单元式全进全出生产管理［5],即每个猪舍的用具、人员等要独立,用具不可共用。用链球菌和胸膜肺炎多价苗预防1次后,间隔半月再补防1次［6]。③制订合理的免疫保健程序,对发病猪应该及时进行隔离治疗,防止传染给其他猪［7]。同样猪场已经暴发了的疾病也要从根本下手,改善环境,做好猪场的消毒工作,保证消毒效果及防止猪场病原微生物产生耐药性［8]。

［1]王永辉.规模化猪场管理中存在的问题及建议［J].今日畜牧兽医,2011,(4):11-12.

［2]乔瑾,赵保生.规模化猪场生物安全控制技术研究［J].畜牧兽医杂志,2011,(4):30-35.

［3]王丽峰,党占国,当前猪病的流行特点、发病原因及防控对策［J].畜牧与饲料科学,2011,32(8):118-119.

［4]张家峥,程根生,刘小燕.集约化猪场发生猪链球菌病的调查与防治［J].中国预防兽医学报,2001,23(4): 306-308.

［5]权根花,徐惠.猪链球菌病的研究进展［J].现代畜牧兽医,2007(3):50-53.

［6]康丽娟,张凤玲,于德和,等.猪圆环病毒病Ⅱ型的诊断与防制［J].现代畜牧兽医,2005(10):27-28.

［7]卢惠明.猪瘟与猪链球菌病混合感染的诊治报告［J].福建畜牧兽医,2005(6):35-36.

［8]陆艳,马利青,王戈平,等.猪瘟继发猪链球菌病的诊断与防治［J].中国兽医杂志,2007(5):56.

Diagnosis of the combined infection with Circovirus and Streptococcus of swine

Ma Li li,Wang Yuting,Ni Hongbo*
(College of animal science and technology,Heilong jiang Bayi Agricultural University,Heilong jiang Daqing 163319)

On July 2016,an outbreak of swine in Daqing City,Heilongjiang Province,the main clinical symptom such as body temperature,appetite waste off.Extract DNA and RNA from sterile pigs lung isolated after purification,and identification of bacteria,biochemical tests.PCR amplification results diagnosed as mixed infection of porcine circovirus and streptococci.Susceptibility test results show that the isolated bacteria to doxycycline,cephalosporin imidazole,norfloxacin highly sensitive,to farm proposes effective preventive measures for the prevention and control of swine diseases provides a reference.

Circovirus;Streptococcus;Combined infection;Drug sensitive test

S858.28

B

1672-9692(2016)10-0037-04

2016-08-20

马莉莉(1992-),女,黑龙江人,在读硕士,研究方向为分子细菌学和免疫学。

倪宏波(1972-),男,黑龙江人,教授,博士生导师,主要从事分子细菌学和免疫学研究。