萨福克羊超排处理与胚胎移植技术应用研究

罗生金，张 磊，阿不都力·尼亚孜，李文彩，马春江

（新疆哈密地区畜牧工作站，哈密839000）

萨福克羊超排处理与胚胎移植技术应用研究

罗生金，张 磊，阿不都力·尼亚孜，李文彩，马春江

（新疆哈密地区畜牧工作站，哈密839000）

2015年11月至12月笔者在新疆哈密市牧祥合作社开展绵羊鲜胚移植，对合作社提供的87只供体羊采用自然观察法选取55只，通过PG注射同期发情处理，再采用FSH递减法超排技术。研究结果表明：55只供体羊共冲胚胎675枚，可用胚胎575枚。通过对比试验15月龄羊10只冲胚胎94枚，可用胚胎70枚；24月龄羊45只冲胚胎581枚，可用胚胎505枚，差异均极显著（P＜0.01）。按胎次分组经产羊44只冲胚胎578枚，可用胚胎495枚，11只初产羊冲胚胎97枚，可用胚胎80枚，两者差异极显著（P＜0.01）。受体羊采用两次注射PG法同期处理母羊450只，发情410只，发情率91%，移植392只，受体羊可利用率95.6%。将575枚可用胚胎移植给392只受体羊，移植受胎率达64.03%。但从处理的392只不同品种受体羊移植受孕率来看，多浪羊略低，但湖羊、小尾寒羊、湖哈杂交羊间受孕率差异均不显著（P＞0.05）。从胚胎类型上看，桑葚胚受孕64.9%，囊胚受孕55.0%，说明受体羊与供体羊子宫处于同一环境中收集6 d胚胎，移植桑葚胚受孕率较高。在胚胎移植质量上看，移植A级胚胎受胎率明显高于B、C级胚胎，且胚胎利用率差异显著（P＜0.05）。

萨福克羊；超数排卵；鲜胚移植；妊检

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供体羊预处理 选取新疆哈密市牧祥合作社种羊场提供的萨福克母羊87只做供体羊，体重70～75 kg，年龄15～24月龄，膘情中等以上。准备期每只羊日喂青干草1 kg，玉米青贮1.5 kg，混合精料0.5 kg，磷酸氢钙10 g，食盐9 g。按程序做好饲喂、饮水、运动、试情等工作。预处理期与超排处理前每只羊分别注射一次亚硒酸钠VE（3 mL）和VAD（5 mL）。种公羊为本场18～24月龄萨福克羊，遗传性能稳定，系谱清晰，体形外貌均达到了品种标准，体格结实，健康无病，雄性特征明显，精液品质良好，膘情8成以上。

1.1.2 受体羊预处理 受体羊为本场多浪羊、小尾寒羊、湖羊、湖哈杂交羊，无繁殖性疾病及传染病，经检测布病均为阴性。年龄1.5～4岁，均为经产母羊。母羊体格健壮，体重40 kg以上，膘情中等。处理前2个月做好疫病免疫与驱虫工作，然后佩戴耳标，分群饲养，确保受体羊整体质量。试情公羊为本场调教后的健康无病、性欲好的成年湖羊。

1.1.3 试验设备 专用胚胎移植手术架，内窥镜，B超仪，子宫钳，体视显微镜，水浴锅，恒温台，注射器（1mL、2.5mL、5 mL、20 mL、50 mL），冲卵管，三通管，检卵（胚）针，移植管，培养皿，曲别针，小弯缝合针，12号缝合线，剃毛刀，剪毛剪，电暖器，等等。

1.1.4 试验药品 冲卵液（PBS）由中国农科院研制生产，保存液（holdingsolution）新西兰生产；前列醇钠、FSH、LHRH-A3均为宁波三生激素制品厂生产；静松灵注射液，利多卡因注射液，黄体酮注射液，160万IU青霉素，100万IU链霉素，100mL替硝唑注射液。

1.2 方法

1.2.1 供体羊超排技术 2015年11月对供体羊采用自然观察法，用试情公羊试情一个情期，对于有自然发情的母羊再进行同期发情处理。首先对自然发情的55只供体羊全群注射PG1 mL/只，在24～72 h内每天试情2次，做好发情记录，按照发情先后顺序分组、编制程序，在母羊情期10～11 d采用FSH逐日递减法进行超排处理，见表1。

表1 超排处理程序

1.2.2 受体羊同期处理 对受体羊第1次注射PG时与供体羊同步，第2次注射PG时比供体羊提前12 h，便于鲜胚移植时调配受体羊。依据供体羊分组编号数量与顺序，按照1:8配备受体羊，第2次注射后24～72 h观察发情状况，并做好标记与记录备用。

1.2.3 供体羊胚胎获取 供体羊配种后第5～6.5天进行手术法冲卵。首先将供体羊采取前低后高半仰卧姿势保定在手术架上，术部剃毛—备皮—消毒，切开皮肤和皮下组织，钝性分离肌肉，最后打开腹膜，创口3～4 cm。盖上创巾，使切口暴露于创巾中部。术者将食指和中指由切口伸入腹腔，在与骨盆交界的前后位置触摸子宫角，找到后用二指夹持，牵出创口外。创口要用被生理盐水浸湿的纱布围住，循子宫角至该侧输卵管找到卵巢，观察黄体发育良好，选择在子宫角基部扎孔，将冲卵管插入，用注射器注入5～6 mL气体，使气囊适度充满气并固定，另一端接集卵器。在子宫角的尖端插入套管针，连接吸有50 mL、温度在37℃的冲胚液，缓缓注入，使冲胚液流向子宫角后回流到集卵器；另一侧子宫角以同样方法冲洗。用集卵器集卵，留少量冲胚液以便检胚。冲胚后为防止粘连，将子宫角用100 mL替硝唑冲洗后送入腹腔，并向腹腔注入37℃100 mL替硝唑注射液+160万IU青霉素+100 IU链霉素，按手术常规处理，闭合腹腔。

1.2.4 胚胎鉴定与保存 在羊场设立实验室，采用电暖气供热，温度保持在25℃，取3个培养皿放置于29℃恒温台上，加入适量保存液备用。将收集好的冲卵液移去上层液，取底部少量液体移至平皿内，静置后，在体视镜20～40倍下检查胚胎数量，观察胚胎质量。可用胚胎1级：发育正常，胚龄与发育期相吻合，卵裂球轮廓清楚，明暗度适中，细胞密度大，卵裂均匀，细胞变性率不超过10%；2级：胚龄与发育期基本吻合，轮廓清楚，明暗度适中或稍淡，细胞密度较小，细胞变性率10%～20%；3级：轮廓不清楚，色泽过暗或过淡，细胞细胞变性率30%～40%［2］。根据胚胎鉴定结果做好记录并保存胚胎。1级胚胎可单独移植，2级胚胎和3级胚胎搭配进行移植。

1.2.5 腹腔镜法胚胎移植 将受体羊保定在手术架上剃毛—备皮—消毒后，羊体置于70°～80°倾斜倒立保定，在据乳房前下方7～11cm、离腹中线5cm处各切开1.0～1.5cm的切口，一侧套管针刺入腹腔后，抽出针芯，将观察镜经管套送入腹腔，另一侧插入子宫钳，一只手固定观察镜，另一只手拿子宫钳翻动、拨开卵巢系膜，暴露卵巢，通过目镜观察黄体发育情况，按突出卵巢的直径和颜色分为优、中、差3个等级。优：0.6～0.8cm，颜色深红；中：0.5cm，颜色鲜红；差：0.3 cm，颜色粉红。将判定合格黄体一侧的子宫角前端用子宫钳引出腹腔切口外，用曲别针避开血管在子宫角前端扎孔，用装好胚胎的移植针，斜向子宫角方向扎入子宫腔内，注入胚胎，移植后将子宫角恢复原位，切口缝合1针，对于中级黄体注射黄体酮10～20mg，解除保定。

1.2.6 术后处理 供体羊术后肌注PG1 mL，为防止粘连对供体羊适当放牧，归牧后圈舍应保持干燥、清洁，加强护理，防止感染，按照肉羊营养标准调整日粮，1月后开始配种。

1.2.7 妊娠检查 在受体羊妊娠35日龄时，经B超检查妊娠251只，受胎率64.03%。

2 结果与分析

2.1 供体羊冲胚情况

本次处理供体羊55只，冲胚675枚，可用胚胎575枚。其中有1只供体羊冲出胚胎57枚，可用胚胎53枚，移植受体羊46只，受胎率71.7%（33/46）。初产羊：有1只出现先天性子宫畸形未冲出胚胎，1只羊黄体发育不好，有退化现象没有做冲胚胎。经产羊有1只卵巢有16个黄体仅冲出1枚胚胎，可能是在冲胚方面没有冲完全，亦或卵巢超排过大，排出的卵子未能进入输卵管伞而丢失，有待今后进一步研究。

在同样的饲养管理条件下，10只供体羊在15月龄回收胚胎平均9.40枚，可用胚胎平均7.00枚；45只24月龄供体回收胚胎平均12.91枚，可用胚胎平均11.22枚，两者差异均极显著（P＜0.01），见表2。11只初产供体回收胚胎平均8.82枚，可用胚胎平均7.27枚；44只经产供体回收胚胎平均13.13枚，可用胚胎平均11.25枚，两者差异均极显著（P＜0.01），见表3。统计数据表明：有过产羔史、年龄在2周岁以上、膘情中等以上、健康无病的羊做供体羊效果会更好。

表2 不同年龄供体羊胚胎数量比较

表3 不同胎次供体羊胚胎数量比较

2.2 不同受体羊同期发情效果与胚胎利用状况

对450只受体羊进行两次PG同期发情处理，发情410只，同期发情率达91%。将575枚可用胚胎移至392只受体羊，受体羊可利用率95.6%，移植成功率达64.03%。但从处理的392只不同品种受体羊移植情况看，多浪羊受胎率略低，但差异均不显著（P＞0.05），见表4。小尾寒羊、湖羊、杂交羊受胎率较高，主要原因在于移植时这些品种羊卵巢上有较多的黄体正在发育，为胚胎着床提供了良好环境。

表4 不同受体羊同期发情与移植情况

2.3 胚胎类型、胚胎质量对受胎率的影响

这次鲜胚移植，冲出可用胚胎575枚，共移植至392只受体羊，桑葚胚受孕率64.9%，囊胚受孕率55.0%，细胞体受孕率25.0%，表明受体羊与供体羊在同一环境下移植桑葚胚受孕率较高，此结果与柳占奇［3］报道一致。从胚胎移植质量上看，移植A级胚胎受胎率明显高于B、C级胚胎。详见表5、表6。

表5 胚胎类型对受胎率的影响

表6 移植胚胎数、胚胎质量对受胎率的影响

3 讨论

（1）本次胚胎移植对供体羊处理采用自然交配方式进行，采用上午发情，下午配种，下午发情第2天早晨配种，发情后第一次配种后肌注半支LHRH-A3，每只羊配种2～3次，由于种公羊充足，仅有1只初产羊未出现受精现象，可能是卵子未发育成熟等原因，有待于今后进一步验证。

（2）早期胚胎在一定时间内处于游离状态、无排异性等特性，是胚胎移植建立的生理基础，但胚胎移植受孕要求供体和受体在种属上、生理上、胚胎收集和移植部位上必须一致，才使胚胎移植成活成为可能［4］。本次移植受体羊品种属于常年性发情羊，采用2次注射PG法进行同期发情处理，同期率达91%，受体羊利用率达95.6%，受胎率取得较好效果。

（3）本次供体羊采用自然观察法结合PG注射法，再用FSH递减法对绵羊进行超排处理，是一种有效的处理方法。

［1］ 国家畜禽遗传资源委员会.中国畜禽遗传资源志羊志［M］.北京：中国农业出版社，2011：223-224.

［2］ NY/T1571—2007.中华人民共和国农业行业标准［S］.羊胚胎移植技术规程.

［3］ 柳占奇.牛羊胚胎移植技术推广及影响受体羊利用率、妊娠率的因素分析［D］.兰州：甘肃农业大学，2004.

［4］ 邵庆勇，赵志勇，杨红远，等.弥勒红骨山羊重复超数排卵及胚胎移植研究［C］//全国养羊生产与学术研讨会议论文集.兰州：中国草食动物编辑部，2012：255-257.

S826.3

A

2095-3887（2016）02-0026-03

10.3969/j.issn.2095-3887.2016.02.007随着国民经济的发展和人民生活水平的提高，高质量羊肉的需求与日俱增。与发达国家相比，我国目前的羊肉生产还存在产量低、肉质差等突出问题，在国际市场上缺乏竞争力。萨福克羊（Suffolk）原产于英国，具有早熟、生长发育快、体格大的特点。其成年公羊体重100～136 kg，成年母羊体重70～96kg，是生产大胴体和优质羔羊肉的理想品种。美国、英国、澳大利亚等国都将该品种作为生产肉羔的终端父本品种［1］。因此，2015年2月新疆哈密市牧祥合作社种羊场从澳大利亚引进了萨福克肉羊100只，在同一饲养管理条件下进行了诱导发情、超数排卵、胚胎鉴定、胚胎移植等的系统研究，以期总结出适合本地区推广应用的肉羊超数排卵与胚胎移植技术的操作规程，为推动本地区胚胎移植技术的产业化提供依据。

2015-02-02

哈密地区科技兴农项目——国外专用肉羊胚胎移植推广项目

罗生金（1973-），男，高级兽医师，执业兽医师，硕士。

马春江（1972-），男，农业推广研究员，本科，主要从事畜牧业新技术推广工作。