P16表达在宫颈上皮内病变中的诊断价值

程涛，沈红，邱学芳

昭通市第一人民医院病理科，云南昭通　657000

P16表达在宫颈上皮内病变中的诊断价值

程涛，沈红，邱学芳

昭通市第一人民医院病理科，云南昭通657000

目的 探讨p16蛋白表达在宫颈上皮内病变中的诊断价值。方法 方便选取云南省昭通市第一人民医院2004—2015年间的宫颈标本180例作为研究对象，采用免疫组化SP法检测180例宫颈良性病变及宫颈上皮内病变中p16蛋白的表达，并对其表达和意义进行分析。结果 宫颈良性病变中p16表达率为0%，LSIL中p16表达率为45%且多为点灶状表达并主要局限于中间及表层，HSIL中p16表达率100%且多为带状强阳性表达，各组之间差异有统计学意义（P＜0.05）。结论p16可以作为宫颈良性病变、LSIL及HSIL之间鉴别诊断的一个有用的标记物。

宫颈上皮内病变；p16；诊断

在女性生殖系统三大恶性肿瘤之中，宫颈癌居首位，发病率9.98/10万，30～50岁是发病高峰年龄，死亡的高峰为50～70岁，在中国地区农村高发病率高于城市，山区地区高于平原地区。在以前使用的是宫颈上皮内肿瘤（CIN）的诊断术语来诊断宫颈鳞状细胞癌的癌前病变，分为三级，分别简称为CIN1、CIN2和CIN3，这种诊断方式在第3版WHO分类（2003年）提出后，已经使用了10多年。第4版WHO（2014年）的女性生殖系统肿瘤分类中，宫颈鳞状细胞癌前病变使用鳞状上皮内病变（SIL）来命名，只分为低级别鳞状上皮内病变(LSIL)及高级别鳞状上皮内病变(HSIL)两类[1]。近些年以来国际和国内使用了一种新的分子标记物，就是使用免疫组织化学染色的方法在宫颈组织中检测p16有无过度表达，来作为HPV感染引起的细胞周期失调的整合标记物。该研究选取2004—2015年该院宫颈标本180例为研究对象，旨在研究P16在宫颈上皮内病变中的辅助诊断价值，现报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料

方便选取云南省昭通市第一人民医院2004—2015年间的宫颈标本180例，包括良性病变50例，LSIL 60例，HSIL 70例，所有病例均经病理检验证实。

1.2方法

采用10%中性甲醛进行组织脱水固定，常规石蜡包埋，切片厚度在3～4 μm之间，免疫组化染色采用SP法，DAB显色，阴性对照采用 PBS液 （0.01 mol/L，pH7.4）代替第一抗体作为对照，阳性对照用已知阳性组织切片对照。选用的P16单克隆抗体、SP试剂盒等相关试剂均购自福州迈新生物技术开发有限公司。所有实验操作均严格按照说明书进行。

1.3结果判定

结果评价参照说明书，棕黄色颗粒视为P16阳性染色，随机选取10个高倍视野，人工计数阳性细胞数量，＜30%为（+），30%～50%为（++），＞50%为（+++）。

1.4统计方法

使用SPSS 17.0统计学软件分析数据，设定P＜0.05为差异具有统计学意义。

2　结果

从表1中可以看出p16在宫颈良性病变中均不表达，LSIL中p16阳性率达45%，主要为点灶状表达并主要集中在中间及表层，HSIL中p16表达率达100%，且绝大部分为带状表达，各组之间差异有统计学意义（P＜0.05）。

表1　p16在180例宫颈病变中的表达情况

3　讨论

随着社会的发展，在女性群体当中，宫颈癌已经逐渐成为女性生殖系统恶性肿瘤之中发病率最高的肿瘤，而且患者多为老年妇女，致死率较高，严重危害妇女的生命健康。为了更好地防范和治疗宫颈癌，临床上常常使用p16基因作为病情诊断的标记物，具有一定应用意义。在医学上p16基因又称p161NK4a、CDKN2及MTS1基因，是美国冷泉实验室Kamb等于1994年发现的新的一种抗癌基因，它是一种重要的抑癌基因，是一种细胞周期中的基本基因，负调节细胞增殖及分裂，抑制CDK4的活性，从而抑制细胞由G1进入S期，对Rb基因控制的细胞增殖有负性调节。p16染色体定位在9p21上，是由2个内含子及2个外显子组成，它是细胞周期依赖激酶抑制子。正常情况下，p16通过对抑癌基因视网膜母细胞瘤蛋白（pRb）磷酸化过程的阻止，起到抑制细胞周期的进展的作用。当高危型HPV病毒蛋白与pRb结合，从而导致转录因子E2F的释放，引起pRb依赖的p16表达上调。所以p16阳性被认为是存在高危HPV感染的替代性标志物，而应用于高级别上皮内病变的辅助诊断中。相关报道已经证实p16的异常甲基化能够参与多种肿瘤细胞的增殖和发展[2]。Sano等[3]的研究显示，p16能够作为宫颈上皮内瘤变的一个病理诊断标志物被应用于临床。

由于宫颈良性病变和恶性变的处理方案完全不同，因此做好鉴别诊断，区分良性病变、LSIL及HSIL是个比较困难的问题。在第四版WHO分类（2014年）方案中也没有简单地将CIN2病变归入到HSIL中，许多之前诊断的CIN2病变包含了部分的LSIL及部分的HSIL。近些年来的研究显示：利用免疫组织化学染色检测P16的表达情况，可以帮助区别两者。按照美国阴道镜与宫颈病理学会和美国病理学会的LAST项目研究，加做p16标记有助于对CIN进行更为准确的分级。对临床较难处理的CIN1-CIN2宫颈标本，p16阳性时，可诊断为HSIL，判定为CIN2；p16阴性则可诊断为LSIL，判定为CIN1。LAST研究结果表明，p16的标记对提高诊断重复性具很好的作用，推荐以下几种情况中使用p16标记：HSIL和容易混淆的非肿瘤性病变的鉴别，譬如不成熟性鳞状上皮化生、萎缩、上皮修复性增生及人为假象；有争议的CIN2；病理医师之间诊断意见不同；组织学诊断为阴性，但细胞学阴道镜提示有高级别病变可能，HPV检测高危型病毒感染。通过该研究提示按照宫颈良性病变→LSIL→HSIL的顺序，p16的表达也逐渐增高，组间对比差异有统计学意义，且表达方式逐渐由弱阳性转为强阳性，说明p16的表达会随着宫颈病变的恶性程度而升高，可以作为鉴别宫颈上皮内瘤变的一个有效标志物。

综上所述，当患者的病情加重的时候，p16的表达也逐渐增高，充分表现出宫颈病变的恶性程度的变化规律，因此p16可以作为宫颈良性病变、LSIL及HSIL之间鉴别诊断的一个有用的标记物，值得临床上加以使用。

[1]沈丹华.解读第4版WHO（2014）女性生殖系统肿瘤分类中宫颈癌前期病变的命名及分级变化[J].诊断病理学杂志,2015,22(3):129-132.

[2]Rocco JW,Sidransky D p16(MTS-1/CDKN2/INK4a)in cancer progression[J].Exp Cell Res,2001,264(1):42-55.

[3]Sano T,Oyama T,Kashiwabara K,et al.Immunohistochemical overexpression of p16 protein associated with intact retinoblastoma protein expression in cervical cancer and cervical intraepithelial neoplasia[J].Pathol lnt,1998,48(8):580-585.

[4]刘彤,崔莉,许丽娟,等.p16、Ki-67蛋白表达及HPV检测在宫颈上皮内瘤变中的诊断意义[J].诊断病理学杂志,2009，16(5):343-345.

[5]张王亮.P16、Ki-67联合半定量评分在宫颈上皮内瘤变分级诊断中的应用及其HPV感染的关系[D].太原：山西医科大学：2015.

[6]李艳东,郑建云,刘冰.E-cadherin、p16及Ki67在宫颈上皮内瘤变诊断中的应用[J].山西医科大学学报,2011,42(11): 876-879，939-940.

[7]张红凯,杜强,严美申,等.Ki-67和p16在子宫宫颈病变中的表达及其协助诊断的意义[J].首都医科大学学报,2008, 29(3):344-349.

[8]刘涛,何丽超,李竹琴.p16蛋白和Ki67抗原标记指数表达在宫颈上皮内瘤变中的诊断价值[J].中国肿瘤临床与康复,2013,2(2）：119-121.

Diagnostic Value of P16 Expression in Cervical Intraepithelial Lesions

CHENG Tao，SHENG Hong，QIU Xue-fang
Zhaotong City People's Hospital Department of Pathology,Zhaotong,Yunnan Province,657000 China

Objective To investigate the expression of p16 protein in cervical intraepithelial lesions diagnostic value. Methods Convenient from Zhaotong City of Yunnan Province in 2004 to 2015 the first people's Hospital cervical specimens of 180 cases as the research object,using immunohistochemistry SP method to detect the expression of 180 cases of benign cervical lesions and cervical intraepithelial lesion in p16 protein,and the expression and significance of analysis. Results Cervical benign lesions of p16 expression rate was 0%,the rate of p16 expression in LSIL is 45%and is focal point to express and largely confined to the middle and the surface,p16 expression in HSIL rate more than 100%and for ribbon strong positive expression,the significant difference between groups(P＜0.05).Conclusion P16 can be used as a differential diagnosis between cervical benign lesions,LSIL and HSIL a useful marker.

Cervical intraepithelial lesions;P16;Diagnosis

R737.33

A

1674-0742（2016）10（c）－0019-03

10.16662/j.cnki.1674-0742.2016.30.019

程涛（1974.12-），男，云南镇雄人，本科，副主任医师，研究方向：病理学。

（2016-07-26）