狼疮肾炎患者循环miRNA表达谱研究及循环miR-130b-3p的临床意义

孙芳，李文双，滕舰，林淑华，于鹏飞

1.烟台市烟台山医院肾内科，山东烟台　264000；2.山东省莱阳市结核病防治所内科，山东莱阳　265200；3.烟台毓璜顶医院呼吸内科，山东烟台　264000

狼疮肾炎患者循环miRNA表达谱研究及循环miR-130b-3p的临床意义

孙芳1，李文双2，滕舰1，林淑华1，于鹏飞3

1.烟台市烟台山医院肾内科，山东烟台264000；2.山东省莱阳市结核病防治所内科，山东莱阳265200；3.烟台毓璜顶医院呼吸内科，山东烟台264000

目的 研究探讨狼疮肾炎患者外周循环miRNA表达变化及其可能存在的临床意义，为狼疮肾炎的临床治疗提供更多的客观依据。方法 方便选取2013年9月—2015年9月于该院诊治的50例狼疮肾炎患者，同时另选同期于该院体检的50名健康者作为对照组。在100例研究对象中随机选取15例患者做循环miRNA的表达谱检测筛选（检测组），85例患者做循环miRNA的表达谱验证筛选（验证组），同时应用循环miR-130b-3p为验证对象，观察与比较狼疮肾炎患者与对照组患者的血清总RNA水平及检测组中两组患者的血清miRNA水平、验证组中miR-130b-3p的水平，并进行数据统计学分析及相关性分析。结果 在验证组中，与对照组相比较（3.7±1.6）ng/μL，狼疮肾炎组患者的循环血清中miR-130b-3p的表达水平（9.8±1.4）ng/μL显著上升，其差异有统计学意义（P＜0.05）；在检测组中，与对照组相比较（28.6±2.4）ng/μL，狼疮肾炎组患者循环表达的miRNA水平（46.8±5.6）ng/μL明显上升，其差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论 狼疮肾炎患者循环miRNA表达水平可能随着肾功能的进一步下降而出现表达下调，其循环miR-130b-3p的表达与肾脏功能、血脂水平呈现明显的相关性，这在狼疮肾炎的疾病发生发展中可能起着重要的作用。

狼疮肾炎；miRNA；miR-130b-3p；表观遗传调节

狼疮肾炎（Lupus Nephritis,LN）是一种继发于系统性红斑狼疮（SLE）的自身免疫性疾病，是SLE临床上常见的、多发的并发症，其在SLE患者中发病率高达80%左右。患该病后因其具有多器官受累的特点，故严重影响患者的日常生活质量，给患者带来极大的负担[1]。目前，该病的治疗主要以免疫抑制剂及糖皮质激素为主，虽然能在一定程度上改善患者的症状及其预后，但仍有不少患者的治疗效果不甚满意，进而并发慢性肾衰竭[2-3]。因此，早期诊断、早期治疗、积极改善预后是治疗本病的关键。该研究方便选取该院2013年9月—2015年9月于该院诊治的50例狼疮肾炎患者，同时另选同期于该院体检的50名健康者作为对照组，此100例患者为该研究入选研究对象。通过对LN患者及部分健康者的血清标本应用PCR技术检测miRNA并进行比较分析，以研究探讨循环中miRNA作为狼疮肾炎的新型生物标志物的可行性，现报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料

方便选取2013年9月—2015年9月于该院诊治的50例狼疮肾炎患者，均符合狼疮肾炎的诊断标准[4]及该研究的纳入标准及排除标准；同时另选同期于该院体检的50名健康者作为对照组。在100例研究对象中随机选取15例患者做循环miRNA的表达谱检测筛选（检测组），85例患者做循环miRNA的表达谱验证筛选（验证组），同时应用循环miR-130b-3p为验证对象。对照组组中男性25例，女性25例，年龄为（40.6±9.3）岁；狼疮肾炎组患者男性30例，女性20例，年龄为（41.9± 9.4）岁。两组研究对象在性别、年龄等一般性资料上比较，差异无统计学意义（P＞0.05），组间具有可比性。该研究已通过该院临床研究伦理委员会批准。

1.2方法

1.2.1血清标本采集所有研究对象均抽取空腹静脉血3～5 mL，离心机离心15 min（3 000 r/min），于-20℃环境下保存备用。

1.2.2血清总RNA提取应用miRNA试剂盒并依据其说明书操作步骤对研究对象的血清标本进行检测，并记录数据。

1.3观察指标

观察与比较狼疮肾炎患者与对照组患者的血清总RNA水平及检测组中两组患者的血清miRNA水平、验证组中两组患者的血清miR-130b-3p的水平。

1.4统计方法

研究中各项数据均应用SPSS 17.0统计学软件进行统计学处理。计量资料以均数±标准差表示，符合正态分布及方差齐性，则组间比较采用单因素方差分析，否则采用非参数检验。对miRNA表达量及相关临床指标等相关数据采用Spearman相关分析。以P＜0.05为差异具有统计学意义。

2　结果

2.1血清总RNA表达水平比较

与对照组相比较，狼疮肾炎组患者循环表达的miRNA水平明显下降，其差异具有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1　两组患者血清总RNA表达水平比较[，ng/μL]

表1　两组患者血清总RNA表达水平比较[，ng/μL]

注：与对照组比较，*P＜0.05。

组别血清总RNA表达水平对照组（n=50）狼疮肾炎组（n=50）t P 30.6±2.5（19.4±2.6）*1.135＜0.05

2.2检测组中两组患者的血清miRNA表达谱分析比较

在检测组中，与对照组相比较，狼疮肾炎组患者循环表达的miRNA水平明显上升，其差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2　检测组中miRNA表达水平比较[，ng/μL]

表2　检测组中miRNA表达水平比较[，ng/μL]

注：与对照组比较，*P＜0.05。

组别血清miRNA表达水平对照组（n=7）狼疮肾炎组（n=8）t P 28.6±2.4（46.8±5.6）* 1.027＜0.05

2.3验证组中两组患者的血清循环miR-130b-3p分析比较

在验证组中，与对照组相比较，狼疮肾炎组患者的循环血清中miR-130b-3p的表达水平显著上升，其差异具有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3　验证组中miR-130b-3p表达水平比较，ng/μL]

表3　验证组中miR-130b-3p表达水平比较，ng/μL]

注：与对照组比较，*P＜0.05。

组别　血清miR-130b-3p表达水平对照组（n=43）狼疮肾炎组（n=42）t P 3.7±1.6（9.8±1.4）*0.156＜0.05

2.4患者的循环miR-130b-3p的表达与相应指标间的相关性分析

狼疮肾炎患者的循环miR-130b-3p的表达与肾脏慢性活动指数、24 h尿蛋白含量及血清甘油三酯水平均呈现明显的正相关（r＝0.201，0.319，0.346，P＜0.05）。

3　讨论

该研究基于表观遗传学，对狼疮肾炎患者血清中异常表达的miRNA进行PCR分析，研究结果显示狼疮肾炎患者的血清总RNA水平和含量较正常健康人是明显下降的，其差异具有统计学意义（P＜0.05），表明狼疮肾炎患者广泛存在循环miRNA的表达下调。这一结果与王万鹏等[5]研究结果基本一致，其中可能的原因与狼疮肾炎患者的慢性肾功能受损存在一定的关系。因在临床实际中，狼疮肾炎患者的肾功能是逐渐恶化进展的，在此过程中出现的循环miRNA水平表达下降或与肾功能密切相关，但具体病理机制尚不十分明确。miR-130b-3p最初多见于肿瘤类相关研究报道中，如张科等[6]研究指出miR-130b-3p能抑制某些基因的表达，参与肿瘤的早期转移过程，很大程度上影响了肿瘤的进展及治疗预后。因此，在miR-130b-3p的后续多项相关研究报道中，将其作为疾病诊疗过程中的生物学标志，指导疾病的诊治。而在该研究中，研究结果显示狼疮肾炎患者的循环miR-130b-3p较正常健康人是显著升高的（P＜0.05），且与患者的肾脏慢性活动指数、24 h尿蛋白含量及血清甘油三酯水平均呈现明显的正相关，表明循环miR-130b-3p的高表达可能参与了狼疮肾炎的疾病进程，同时对狼疮肾炎的早期诊断具有一定的参考价值，并能预测预后，这一结果与相关文献报道基本一致[7-8]。

综上所述，狼疮肾炎患者循环miRNA表达水平可能随着肾功能的进一步下降而出现表达下调，其循环miR-130b-3p的表达与肾脏功能、血脂水平呈现明显的相关性，这在狼疮肾炎的疾病发生发展中可能起着重要的作用。

[1]任义乐，冯学兵，邹耀红，等.狼疮肾炎患者的临床特点及预后分析[J].中华医学杂志，2014，94（13）：973-976.

[2]王万鹏，王玲，车霞静，等.微小RNA-130b-3p通过抑制ERBB2IP和PPARγ表达促进肾小管上皮细胞转分化[J].中华肾脏病杂志，2015，31（12）：932-935.

[3]王彬，杨敏，李旻，等.他克莫司和环磷酰胺治疗狼疮肾炎的Meta分析[J].中华肾脏病杂志，2013，11（3）：210-213.

[4]魏玉翠，列才华，黄海，等.狼疮肾炎的病理和免疫学指标及临床相关性分析[J].临床肾脏病杂志，2014，11（10）：98-100.

[5]王万鹏，张敏芳，王玲，等．狼疮肾炎患者循环miRNA表达谱研究及循环miRNA-130b-3p的临床意义[J].中华肾脏病杂志，2015，4（6）：302-308.

[6]张科,邱茜,廖兢业，等.甲氨蝶呤联合环孢素A治疗难治性狼疮肾炎的临床疗效[J].实用医学杂志,2013,29(13): 2192-2194.

[7]许嵘,钟一红,丁小强，等.外周血Th17/Treg和白细胞介素17与狼疮肾炎临床病理的相关性研究[J].中华肾脏病杂志,2014,30(4):247-253.

[8]温晓宏,郑毅,陈珊珊，等.中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白单核细胞趋化蛋白-1及肿瘤坏死因子样凋亡的微弱诱导剂在狼疮肾炎中的临床意义[J].中华风湿病学杂志, 2013,17(9):611-615.

Research on the Expression Profiling of Circulating miRNA and Clinical Significance of Circulating miR-130b-3p for LN Patients

SUN Fang1,LI Wen-shuang2,TENG Jian1,LIN Shu-hua1,YU Peng-fei3
1.Nephrology Department,Yantai Mountain Hospital of Yantai City,Yantai,Shandong Province,264000 China;2.Tuberculosis Control and Prevention of Laiyang City,Shandong Province,Internal Medicine,Laiyang，Shandong Province,265200 China;3.Yuhuangding Hospital of Yantai City,Respiratory Medicine,Yantai，Shandong Province,264000 China

Objective To study the clinical expression and significance of circulating miRNA and provide more objective basis in the treatment of LN(Lupus Nephritis).Methods Convenient selection 50 LN patients treated from September 2013 to September 2015 in our hospital were selected.50 healthy check-ups were selected as control group.15 subjects were randomly selected to receive the detection of circulating miRNA expression profiling(detection group);85 subjects 3p was the verification object;Observation and comparison of lupus nephritis patients and the control group of patients and the serum levels of total RNA and detecting group in two groups of patients with serum miRNA levels,the validation group miR-130b-3p level,and data statistical analysis and correlation analysis Results In the validation group,and control group comparison(3.7±1.6)ng/μL,significantly increased the expression levels of miR-130b-3p of circulating serum in patients with lupus nephritis(9.8±1.4)ng/μL,the difference has statistical significance(P＜0.05).In the test group,compared with the control group(28.6±2.4)ng/μL,miRNA levels(46.8±5.6)μg/uL were significantly increased in patients with lupus nephritis, and the difference was statistically significant(P＜0.05).Conclusion For LN patients,the expression of circulating miRNA may be degraded with the lower renal function.The expression of circulating miR-130b-3p has an obvious correlation with renal function and blood lipid level,which it plays an important role in the genesis of LN.

the verification of circulating miRNA expression profiling(verification group);at the same time,the circulating miR-130b-

LN;miRNA;miR-130b-3p;Epigenetic regulation

R5

A

1674-0742（2016）10（c）－0001-03

10.16662/j.cnki.1674-0742.2016.30.001

烟台市科技计划发展项目（2013WS237）。

孙芳（1983.1-），女，山东烟台人，硕士，主治医师，主要从事肾脏病的研究工作。

于鹏飞（1981.2-），男，山东青岛人，硕士，主治医师，研究方向：呼吸系统及免疫系统疾病，E-mail:42246967 @qq.com。

（2016-07-28）