水飞蓟素对肾间质纤维化大鼠AngⅡ、NF-κB表达的影响

王　鹏　韩子明（.信阳市中心医院儿科信阳464000；.新乡医学院第一附属医院儿科新乡45300）

水飞蓟素对肾间质纤维化大鼠AngⅡ、NF-κB表达的影响

王鹏1韩子明2（1.信阳市中心医院儿科信阳464000；2.新乡医学院第一附属医院儿科新乡453100）

目的：探讨水飞蓟素对肾小管间质纤维化大鼠AngⅡ、NF-κB表达的影响。方法：随机将13周龄SD大鼠56只分为假手术组8只、梗阻组24只和水飞蓟素治疗组24只。采用左侧输尿管结扎术造成肾间质纤维化模型，分为梗阻组和治疗组，分别于实验d7、d14、d21对梗阻组和治疗组各处死大鼠8只，假手术组于d21处死全部大鼠，观察术侧肾组织病理变化并应用免疫组织化学方法检测肾组织AngⅡ及NF-κBp65的表达。结果：肾小管间质评分显示水飞蓟素在各观察时间点能显著改善肾组织纤维化，降低肾间质评分；免疫组化提示水飞蓟素显著下调AngⅡ及NF-κBp65各时间点的表达。结论：水飞蓟素可能是通过下调AngⅡ、NF-κBp65的表达从而起到对肾脏的保护作用。

水飞蓟素 肾间质纤维化 AngⅡNF-κB

肾小管间质纤维化（TIF）是各种病因导致的肾脏疾病进展至终末期肾病的共同病理途径及最终结局[1]。在肾间质纤维化的进程中，主要有炎性细胞浸润（主要为巨噬细胞）、肌成纤维细胞增殖、肾小管细胞凋亡、肾小管上皮-间充质细胞转分化以及细胞外基质（ECM）过度积聚等不断呈现出来[2]。水飞蓟素作为一种有效防治肝脏纤维化的传统药物，根据中医异病同治理论，我们建立了大鼠肾间质纤维化模型，观察水飞蓟素抗肾纤维化作用及其对AngⅡ、NF-κB表达的影响。

1　材料与方法

1.1肾小管间质损伤评定：光镜下（×200）采用双盲法对每张HE染色的组织切片行肾小管间质损伤并评分：随机选取10个不重叠视野，采用IDA-2000高清晰度数码显微图像分析系统测定小管间质纤维化面积与同视野小管间质总面积的百分比，肾间质纤维化病理过程主要表现为①程度不同的炎症细胞浸润；②肾小管肿胀或萎缩；③间质纤维组织形成3个变量判定，每个变量为0～3分，每张组织切片肾间质损伤评分为0～9分。（0分为正常，病变无；1分为轻微损伤，病变范围<25％；2分为中度损伤，25％≤病变范围<50％；3分为重度损伤，病变范围≥50％）。

1.2统计学方法：采用SPSS11.5软件，组间差异采用单因素方差分析（one-way ANOVA），组间两两比较用LSD检验法，计量资料用均数±标准差（±s）表示，差异有统计学意义（P<0.05）。

2　结果

光镜下假手术组大鼠肾组织无明显变化，肾小球、近端小管、远端小管的大小形态与正常肾组织一样，间质无炎症细胞浸润、小管肿胀及纤维组织形成。梗阻组与治疗组术后d7，可见少量巨噬细胞等炎性细胞浸润、小管上皮细胞之间连接疏松、细胞变性、水肿，肾小管间质出现成纤维细胞增生聚集，肾小管管腔轻度扩张及部分呈现萎缩，肾间质面积稍增大。术后14d肾小管间质呈现大量巨噬细胞、淋巴细胞浸润，成纤维细胞增生明显，大量上皮细胞出现肿胀及空泡变性，部分肾小管因严重破坏而消失，部分肾小管及集合管扩张成囊腔状，小管间质增宽明显。术后21d，炎性细胞浸润较前稍减少，小管上皮细胞变性进一步加重，几乎全部小管上皮细胞出现萎缩、坏死脱落，残余的肾小管也在被逐渐破坏，肾小管间质面积增宽显著，皮髓质均变薄、失去功能。同一观察点，肾间质损伤评分治疗组明显低于梗阻组（P＜0.05），梗阻组随着造模时间延长，与假手术组相比，肾间质损伤评分逐渐加重（P＜0.01）；见表1。

表1　肾小管间质损伤评分各组之间比较（±s）

表1　肾小管间质损伤评分各组之间比较（±s）

★P＜0.01与假手术组比较；◆P＜0.05治疗组与梗阻组比较；▲P＜0.05梗阻组与治疗组后一时间点与前一时间点比较。

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3　讨论

本试验结果显示NF-κBp65的表达与肾间质纤维化损伤评分呈正相关，梗阻组肾小管上皮细胞及间质细胞NF-κBp65表达无论染色强度还是染色面积均较假手术组增强，支持NF-κBp65参与肾纤维化的发生过程。NF-κBp65的表达治疗组与梗阻组相比，每一时间点均减少，差异显著，推测可能是水飞蓟素对肾组织NF-κB产生和活性的干预作用有关。单侧输尿管梗阻大鼠用血管紧张素转化酶抑制剂处理后，发现肾皮质中激活的NF-κB活性有所下降，这可能与AngII生成的减少抑制了的NF-κB产生与活性有关。由此可以推测出AngII与NF-κB在肾间质纤维化的演变进程中扮演着重要的角色，且具有协同作用，阻断一种物质的生成或共同阻断都能起到一定的抗纤维化作用。水飞蓟素系指从菊科植物水飞蓟的种子中提取的一类二氢黄酮醇与苯丙素衍生物缩合而成的黄酮木脂素类成分，主要含有水飞蓟宁、水飞蓟宾。据最新研究[3]，清除自由基、抗炎、免疫调节和抗肝纤维化及保护肝细胞膜、促进损伤肝细胞合成结构蛋白等是这类药物的基本药理活性。本实验观察到了水飞蓟素对肾间质纤维化大鼠肾组织的保护作用，据此推测可能是通过抑制肾组织AngⅡ、NF-κB的表达进而延缓TIF进展，这可能是水飞蓟素“多途径、多靶点”抗肾间质纤维化的作用之一。

[1]TherrienFJ，AgharaziiM，LebelM，et al.Neutralization of tumor necrosis factor-alpha reduces renal fibrosis and hypertension in rats with renal failure[J].Am J Nephrol，2012，36（2）：151-161.

[2]López-GuisaJM，RassaAC，CaiX，et al.Vitronectin accumulates in the interstitium but minimally impacts fibrogenesis in experimental chronic kidney disease[J].Am J Physiol Renal Physiol，2011，300（5）：1244-1254.

[3]马星海.水飞蓟化学成分和药理作用研究进展[J].亚太传统医药，2015，11（19）：62-65.

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1672-8351（2016）11-0129-01