黄刺玫果中VC的含量测定

杨莹莹，叶松华，冯夏珍，王晓燕，宋高林，阮文辉

（山西省医药与生命科学研究院，山西太原　030006）

黄刺玫果中VC的含量测定

杨莹莹，叶松华，冯夏珍，王晓燕，宋高林，阮文辉

（山西省医药与生命科学研究院，山西太原030006）

采用改进后的2，6-二氯靛酚-紫外分光光度法测定黄刺玫果中VC的含量。结果显示，VC质量浓度在2.03～39.27 μg/mL范围内线性关系良好，R2=0.999 9，加样回收率为98.82%～101.57%，RSD值为0.90%。改进后的方法操作简便、稳定性好，准确性和重复性能满足试验需求，适用于黄刺玫果中VC的含量测定。

黄刺玫果；VC；紫外分光光度法

黄刺玫果为蔷薇科蔷薇属野生落叶灌木黄刺玫（Rosa xanthina Lindl）的成熟果实，广泛分布于我国北方各省的山区和丘陵地带［1］。黄刺玫果富含多种维生素和氨基酸成分，尤其是VC含量丰富，因此有国外药典收载其用于治疗坏血病。《中药大辞典》谓黄刺玫果有健脾理气、养血调经的作用［2］，现代研究表明其还具有防治心血管疾病和抗衰老等作用［3］。黄刺玫果作为一种药食同源的天然保健食品，正被日益重视和广泛应用。

目前，文献报道的VC含量测定方法有多种，主要有高效液相色谱法［4］、滴定分析法［5］、荧光法［6］、2，4-二硝基苯肼比色法以及紫外分光光度法［7］等。其中，滴定法步骤繁琐、滴定终点不易判断，高效液相色谱法、荧光法相对操作较简便且成本较高，2，4-二硝基苯肼比色法操作繁琐、耗时长。相比之下，紫外分光光度法操作简便、干扰因素少，应用更为广泛。由于VC本身不稳定，直接紫外法测定过程中稳定性较差，且不适用于深色样品的测定。本文选用2，6-二氯靛酚-紫外分光光度法（间接紫外法），即将定量的2，6-二氯靛酚染料与还原型VC发生氧化还原反应，多余的染料在酸性条件下显色，经溶剂萃取后测定其吸光度，计算VC含量。试验在传统方法的基础上进行了条件优化，改进后的方法专属性强、稳定性好，且不受样品本身颜色的影响，适用于黄刺玫果中VC的含量测定。

1　材料与方法

1.1材料与仪器

野生黄刺玫果，采自山西省左权县；VC对照品（分析纯，99.7%），天津市申泰化学试剂有限公司产品；试验用水为蒸馏水；其他试剂均为分析纯。

AB104.N型分析天平，上海托利-梅特勒仪器有限公司产品；YK-1000A型高速粉碎机，山东省青州市益康中药机械有限公司产品；UV3000型紫外/可见分光光度计，日本岛津公司产品。

1.2试验方法

1.2.1VC标准溶液的配制

精密称取VC对照品100 mg，置于100 mL容量瓶中，用2%偏磷酸溶解，并稀释至刻度。得质量浓度为1 mg/mL的VC标准液，备用。

1.2.22，6-二氯靛酚标准液的配制

取碳酸氢钠104 mg，溶于400 mL蒸馏水中，精确称取2，6-二氯靛酚50 mg置于250 mL容量瓶中，用适量上述溶液溶解，冷却后稀释至刻度，过滤，置于棕色瓶中，冷藏备用。每次用前用VC标准液标定，并计算滴定度。

1.2.3供试品溶液的制备

取黄刺玫果若干，粉碎后分离可食用部分，称取10 g，加入1%柠檬酸溶液100 mL，混匀，40℃下超声提取30 min，加入白陶土10 g混匀，脱色，过滤。取续滤液5 mL，加入乙酸钠缓冲溶液（pH值4.0）5 mL，2，6-二氯靛酚2 mL，混匀，精密吸取二甲苯10 mL，振荡萃取20 s，静置分层，取二甲苯层作为供试品溶液，于500 nm处测定吸光度。由于脱色后样品仍为浅红色，为防止样品本身颜色的影响，以不加入2，6-二氯靛酚染料的样品经上述步骤处理作为空白对照，扣除空白干扰。

2　结果与分析

2.1提取条件的选择

2.1.1提取溶剂的选择

不同提取溶剂对VC含量的影响见图1。

图1　不同提取溶剂对VC含量的影响

由于VC是一种不稳定的维生素，在测定时选择适宜的提取溶剂，不但可以提高VC的稳定性，还可提高提取效率。试验比较了2%偏磷酸、2%草酸以及不同质量分数柠檬酸作为提取溶剂对VC含量测定的影响。结果表明，1%柠檬酸作为提取溶剂时VC的含量最高，故选择1%柠檬酸溶液作为提取溶剂。

2.1.2超声时间的选择

传统方法未对样品进行超声处理，本研究经预试验发现，经超声处理后VC含量有明显提高，因此对超声时间进行了考察。在其他条件不变的情况下，分别在超声0，10，20，30，40，50，60 min时测定其吸光度。

不同超声时间对VC含量的影响见图2。

由图2可知，超声30 min时提取效率达到最高；随着超声时间的延长，提取率趋于稳定但略有降低。因此，本试验选择超声时间为30 min。

2.1.3超声温度的选择

图2　不同超声时间对VC含量的影响

在超声的同时进行适当的水浴加热，对VC的提取率也有较大影响。取供试品4份，分别在30，40，50，60℃的恒温水浴中超声提取30 min后测定吸光度。结果显示，在40℃水浴时VC的含量较高，而高于40℃时含量有所降低，可能是温度升高VC加速氧化导致。因此，试验选择40℃作为超声温度。

2.2方法学考察

2.2.1波长的选择

取适量样品按1.2.3操作后，以二甲苯为参比溶液，将2，6-二氯靛酚标准液和样品供试液于200～700 nm波长范围内进行扫描。结果显示，二者在500 nm处有最大吸收值，且吸收峰相同；由于黄刺玫果中含有花色素、黄酮等成分，其提取液有较深颜色，即使经白陶土脱色后仍有颜色，为防止干扰，以相同样品经相同操作但不加2，6-二氯靛酚作为空白对照进行基线扫描，结果显示在500 nm处几乎没有吸收，故试验选择500 nm为检测波长。

2.2.2线性关系考察

分别精密吸取2，6-二氯靛酚0.1，0.5，1.0，1.5，1.9 mL置于20 mL具塞试管中（相当VC质量浓度分别为40，30，20，10，2 μg/mL），用碳酸氢钠溶液补足体积至2 mL，依次加入1%的柠檬酸溶液5 mL、乙酸钠缓冲溶液（pH值4.0）5 mL，混匀，精密吸取二甲苯10 mL，振荡萃取20 s，静置分层后取上层溶液，于500 nm处测定吸光度，同时做空白对照。以吸光度为纵坐标、2，6-二氯靛酚体积为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为Y=0.292 9X-0.002 9，R2=0.999 9；相当于VC质量浓度在2.03～39.27 μg/mL范围内线性关系良好。

标准曲线见图3。

图3 标准曲线

2.2.3稳定性试验

由于VC极易被空气中的氧气氧化，因此需考察样品测定中的稳定性。取供试品适量按1.2.3操作后分别放置0，30，60，90 min后测定吸光度。由结果可知，样品处理后在90 min内具有良好的稳定性。与直接紫外法相比（放置2 min后VC含量明显降低），该方法稳定性好，可满足样品处理及测定过程中的稳定性要求。

2.2.4重复性试验

按照1.2.3的方法制备5份供试品溶液，测定其吸光度，考察重复性。结果表明，VC的平均含量为174.49 mg/100 g，RSD值为0.35%，说明该方法的重复性良好。

2.2.5加样回收率试验

取已知VC含量的黄刺玫果提取液6份，每份5 mL，精密加入VC标准液适量，按1.2.3方法制备，测定吸光度，计算加样回收率。

加样回收率结果见表1。

表1　加样回收率结果

由表1可知，平均加样回收率为100.19%，RSD值为0.90%。

2.3样品测定

取5批样品，按照1.2.3方法制备后测定吸光度，根据标准曲线计算VC含量。

样品中VC的含量见表2。

表2　样品中VC的含量

由表2可知，黄刺玫果中的VC平均含量为175.77 mg/100 g。

3　结论

通过试验条件的优化与方法学验证，建立了2，6-二氯靛酚-紫外分光光度法测定野生黄刺玫果中VC含量的方法。该方法操作简便、稳定性好，准确度和重复性能均满足试验要求，适用于野生黄刺玫果中VC含量的测定，同时可为野生黄刺玫果资源的综合开发和利用提供参考。

［1］山西植物志编委会.山西植物志 ［M］.北京：中国科学技术出版社，1998：335.

［2］江苏新医学院.中药大辞典（上册）［M］.上海：上海人民出版社，1985：1 269.

［3］陈帅，钟方丽，祝波.刺玫果药理学研究进展 ［J］.吉林化工学院学报，2011，28（5）：31-32.

［4］肖竦.RP-HPLC法测定刺梨中的VC含量 ［J］.安徽农业科学，2011，39（3）：1 356-1 358.

［5］李瑞国，郑权.4种常见蔬菜维生素C含量测定 ［J］.西南农业学报，2011，24（1）：198-201.

［6］姜成君，殷帅，孟庆玉.荧光法测定保健食品中VC［J］.农产品加工（学刊），2015（9）：45-50.

［7］孙荣欣，杨灵.黄瓜中VC含量测定的方法研究 ［J］.农产品加工（学刊），2014（5）：61-62.◇

Determination of Vitamin C in Fruit of Rosa Xanthina Lindl

YANG Yingying，YE Songhua，FENG Xiazhen，WANG Xiaoyan，SONG Gaolin，RUAN Wenhui
（Shanxi Institute of Medicine and Life Sciences，Taiyuan，Shanxi 030006，China）

A improved 2，6-dichloro meisoindigo phenol-UV spectrophotometry has been developed for the determination of vitamin C in fruit of wild Rosa xanthina Lindl.The results show that the linear relationship of vitamin C in the rang of 2.03～39.27 μg/mL is good，R2=0.999 9.The recovery is between 98.82%～101.57%，and RSD is 0.90%.The improved method has the advantages of simple operation，good stability，and its accuracy and reproducibility can meet the test requirements for determination of vitamin C in fruit of wild Rosa xanthina Lindl.

Rosa xanthina Lindl；VC；UV spectrophotometry

O657.9

A

10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2016.01.039

2015-12-01

山西省基础研究项目（2015021190）；山西省科技攻关项目（20110321081-01，20120313016-6）。

杨莹莹（1984— ），女，硕士，工程师，研究方向为药物分析与质量控制。