TRPV1及TGF-β2的ELISA及免疫组化方法检测对上气道咳嗽综合征的诊断价值

石晓岚

(西安市儿童医院，陕西 西安　710003)



TRPV1及TGF-β2的ELISA及免疫组化方法检测对上气道咳嗽综合征的诊断价值

石晓岚

(西安市儿童医院，陕西 西安710003)

目的：探讨瞬时受体电位香草酸受体1(transient receptor potential vanniloid 1,TRPV1)及转化生长因子β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)的免疫酶联吸附试验(enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA)及免疫组化方法检测对儿科上气道咳嗽综合征(upper airway cough syndrome,UACS)的诊断价值。方法：94例UACS患儿作为试验组，另选择同一时期的92例腺体样肥大，但无UACS的患儿作为对照组。采集两组患儿血清进行TRPV1及TGF-β2的ELISA测定，采集患儿腺样体组织进行TRPV1及TGF-β2的免疫组化检测，对检测结果进行对照分析。结果：UACS组患儿ELISA检测的TRPV1和TGF-β2值均显著高于对照组，差异具有统计学意义(均P<0.001)；UACS组患儿免疫组化检测的TRPV1、TGF-β2阳性率均显著高于对照组，差异具有统计学意义(P=0.018，0.001)；TRPV1和TGF-β2的免疫组化检测方法的敏感度均显著干预ELASA，差异具有统计学意义(均P<0.001),TRPV1和TGF-β2的ELASA检测的特异度均显著高于免疫组化检测，差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论：TRPV1及TGF-β2的升高与UACS的发病可能有关，TRPV1和TGF-β2的免疫组化检测对UACS诊断的敏感性较高，而TRPV1和TGF-β2的 ELASA检测对UACS诊断的特异性较高，联合应用ELISA及免疫组化检测UACS可疑病例，有助于提高UACS患者诊断的准确性，降低漏诊、误诊率。

瞬时受体电位香草酸受体1；转化生长因子β2；免疫酶联吸附试验；免疫组化；上气道咳嗽综合征

上气道咳嗽综合征(upper airway cough syndrome,UACS)是指由上气道各种病因引起的鼻腔或鼻窦炎性分泌物倒流入鼻后或咽部、甚至反流入声门或气管，直接或间接刺激咽部咳嗽感受器而导致的以慢性咳嗽、咽部异物感等为主要表现的一系列临床综合征[1]。引起UACS的基础疾病复杂多样，包括过敏性鼻炎、感染后鼻炎、细菌性鼻窦炎、过敏性真菌性鼻窦炎等多种鼻部疾病以及变应性咽炎、慢性扁桃体炎等多种咽部疾病，且大部分UACS患者是多种病因联合致病，从而导致UACS的漏诊、误诊率极高[2]。目前，UACS的发病机制尚未明确，但多项研究结果显示，UACS患儿的瞬时受体电位香草酸受体1(transient receptor potential vanniloid 1,TRPV1)及转化生长因子β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)等指标与正常同龄幼儿存在一定差异，而这种差异是否能成为UACS的诊断依据目前仍处于研究阶段[3]。当前UACS的临床诊断主要依靠患者病史、症状、体征等临床资料等，缺乏较为客观且具有特异性的辅助检查结果支持[4]。Narula等[5]发现，采用免疫酶联吸附试验(enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA)及免疫组化法检测患儿的TRPV1以及TGF-β2可有效提高对UACS患儿诊断的灵敏度和特异度。本次研究以此为依据，采用对ELISA及免疫组化法检测94例UACS患儿的TRPV1以及TGF-β2，探讨其对UACS的诊断价值。以下为本次研究的主要内容。

1　资料与方法

1.1临床资料

选择2013年1月至2015年12月在我院住院治疗的94例UACS患儿作为研究对象，其中男性62例，女性32例，年龄3～8岁,平均年龄(4.15±1.32)岁，UACS患儿选择标准：(1)患者的病史、临床症状及体征均符合UACS相关诊断标准[6]；(2)电子鼻咽镜检查均可见鼻咽部炎性分泌物；(3)咽后壁淋巴滤泡增生明显，呈“鹅卵石”样外观，同时可见炎性分泌物自鼻咽部后流或有分泌物黏附；(4)经对症治疗后可见咳嗽明显好转。患儿排除标准：(1)各种急性、亚急性咳嗽以及与支原体、衣原体、百日咳等相关的咳嗽；(2)合并有心、肺、肝、肾功能障碍以及其他全身性系统疾病的患儿；(3)其他呼吸系统疾病引发的慢性咳嗽者。另选于同一时期在我院住院治疗的腺体样肥大，但无UACS的92例患儿作为对照组，其中男性62例，女性30例，年龄3～7岁，平均年龄(4.07±1.26)岁。参与本研究的所有患儿监护人均已被告知本研究的相关内容，自愿参与本研究并已签署相关知情同意书。两组患儿在性别、年龄等一般资料的比较差异均无统计学意义(均P>0.05)，资料具有可比性。

1.2研究方法

1.2.1两组患儿均行低温等离子射频腺样体消融术术前采集血清进行TRPV1及TGF-β2的ELISA测定，术中采集腺样体组织进行TRPV1及TGF-β2的免疫组化检验。

1.2.2ELISA 检测方法术前取患儿的不抗凝全血，离心后留取血清，冻存于-20 ℃待测。应用ELISA试剂盒(江苏宝莱生物科技有限公司，F26241-A)检测患儿血清中TRPV1和 TGF-β2水平[7]。以标准物的浓度为横坐标(对数坐标)，OD值为纵坐标(普通坐标)，在半对数坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的OD值由标准曲线查出相应的浓度，再乘以稀释倍数即为样品的实际浓度。本研究中TRPV1及TGF-β2的r值分别为0.986和0.992。

1.2.3免疫组化检测方法术中取患儿腺样体组织，经10%甲醛溶液固定及石蜡包埋后，3 μm厚度连续切片，行TRPV1和TGF-β2的免疫组化染色(一抗和二抗，杭州赫贝科技有限公司，PB0334，BM1637)，镜下观察明显被染成黄色/棕黄色的细胞即为阳性细胞。根据显微镜视野下阳性细胞的分布情况划分等级，其中等级“-”(视野下阳性细胞几乎不可见)、“+”(视野下可见局灶性分布阳性细胞，所占总细胞比例低于30%)、“++”(阳性细胞所占总细胞比例介于30%～60%之间)、“+++”(视野下可见弥漫性分布阳性细胞，所占总细胞比例大于60%)。将等级“-”和“+”归为阴性结果，等级“++”和“+++”归为阳性结果[8]。

1.3观察指标

(1)比较两组患儿TRPV1和TGF-β2的ELISA及免疫组化检测结果；(2)两组患儿TRPV1和TGF-β2的ELISA阳性检出率及免疫组化阳性检出率。

1.4统计学分析

2　结果

2.1两组患儿TRPV1和TGF-β2的ELISA检测结果比较

UACS组患儿ELISA检测的TRPV1和TGF-β2值均显著高于对照组，差异具有统计学意义(均P<0.001)，见表1。

组别nTRPV1(pg/mL)TGF-β2(ng/L)UACS组9415.14±3.76153.52±3.14对照组926.41±1.81104.05±1.97t值-20.106128.390P值-<0.001<0.001

2.2两组患儿TRPV1和TGF-β2的免疫组化检测结果比较

UACS组患儿免疫组化检测的TRPV1、TGF-β2阳性率均显著高于对照组，差异具有统计学意义(均P<0.001)，见表2。

表2　两组患儿TRPV1和TGF-β2的免疫组化检测结果比较

2.3两组患儿TRPV1和TGF-β2的ELISA及免疫组化阳性检出率比较

TRPV1和TGF-β2的免疫组化检测方法的敏感度均显著干预ELASA，差异具有统计学意义(χ2=43.843，13.791，均P<0.001),TRPV1和TGF-β2的 ELASA检测的特异度均显著高于免疫组化检测，差异具有统计学意义(χ2=45.316，4.997，均P<0.05)，见表3和图1。

表3　两组患儿TRPV1和TGF-β2的ELISA及免疫组化阳性检出率比较

3　讨论

UACS是指上气道各种病因引起的鼻腔或鼻窦炎性分泌物倒流入鼻后或咽部、甚至反流入声门或气管，直接或间接刺激咽部咳嗽感受器而导致的以慢性咳嗽为主要表现的一系列临床综合，其伴随症状可包括脓性黏稠痰液、咽部异物感、睡眠打鼾、鼻塞、流涕、喷嚏、睡眠呼吸障碍等[9]。临床上UACS多见于儿童，但由于儿童主诉较少、临床症状常不典型、且UACS的病因复杂、甚至大部分UACS患者是多种病因联合致病等，UACS的漏诊、误诊率极高，有研究报道称，UACS的误诊率可高达50%[10]。目前，UACS的发病机制尚未完全明确，但有学者报道称，UACS所致的慢性咳嗽症状是多种因素共同作用的结果，一方面，鼻粘膜炎性反应导致气道高反应，抗原反复刺激引起鼻-肺反射；另一方面，鼻粘膜炎性反应导致鼻纤毛运动和清除异物能力减弱、温湿度调节能力降低[11]；此外，鼻腔或鼻窦炎性分泌物增多并反流如鼻咽部，长期刺激咳嗽感受器，均可引起慢性咳嗽[12]。

当前UACS的临床诊断主要依靠患者病史、症状、体征等临床资料，缺乏较为客观且具有特异性的辅助检查结果支持[13]。有研究报道称，UACS患者的慢性咳嗽可进一步损伤气道黏膜，加重患者气道炎症，同时促使气道上皮细胞产生各种生长因子，如转化生长因子β2 (TGF-β2)、上皮生长因子样生长因子、神经生长因子等，其中神经生长因子的过量分泌又可引发TRPV1的表达上调，从而造成咳嗽敏感性增高，加重患者的咳嗽症状[14]。故有学者认为以TRPV1升高导致的气道高反应和TGF-β2升高引发的气道慢性炎症共同作用，是UACS的致病机制之一，因而TRPV1及TGF-β2的ELISA及免疫组化方法检测对UACS的诊断具有一定的辅助价值[15]。

本研究中186例患儿TRPV1、TGF-β2的ELISA及免疫组化检测结果显示，UACS组患儿ELISA检测的TRPV1和TGF-β2值均显著高于对照组，差异具有统计学意义(均P<0.001)；UACS组患儿免疫组化检测的TRPV1、TGF-β2阳性率均显著高于对照组，差异具有统计学意义(P=0.018，0.001)。说明，TRPV1以及TGF-β2的升高于UACS的发生有关，此结果与此前研究结果基本一致。

此外，本研究结果显示，UACS患儿TRPV1和TGF-β2的免疫组化检测方法的敏感度均显著高于ELASA，差异具有统计学意义(χ2=43.843，13.791，均P<0.001),而UACS患儿TRPV1和TGF-β2的 ELASA检测的特异度均显著高于免疫组化检测，差异具有统计学意义(χ2=45.316，4.997，均P<0.05)。说明，对于UACS患儿，免疫组化检测的阳性率较高，阴性预测值较高，敏感性较高，对可疑病例进行免疫组化检测可降低漏诊率；而ELISA的阳性率偏低，但特异性较高，可用于可疑病例的非UACS排除。

综上所述，TRPV1及TGF-β2的升高与UACS的发病有关，TRPV1和TGF-β2的免疫组化检测对UACS诊断的敏感性较高，而TRPV1和TGF-β2的 ELASA检测对UACS诊断的特异性较高，联合应用ELISA及免疫组化检测UACS可疑病例，有助于提高UACS患者诊断的准确性，降低漏诊、误诊率。

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(学术编辑：刘云)

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Clinical value of ELISA and immunohistochemical of TRPV1 and TGF-β2 in diagnosis of UACS

SHI Xiao-lan

(Xi’anChildren’sHospital,Xi’an710003,Shaanxi,China)

Objective：To explore the clinical value of ELISA and immunohistochemical of TRPV1 and TGF-β2 in diagnosis of UACS.Methods：Choosing 94 patients as UACS group.And choosing 92 patients with adenoid hypertrophy but without UACS as the control group.All the patients were tested for TRPV1 and TGF-β2 with ELISA and immunohistochemical.Results：TRPV1 and TGF-β2 tested with ELISA and immunohistochemical of patients in UACS group were significantly higher than those of control group(P<0.05).The sensitivity of ELISA of TRPV1 and TGF-β2 was significantly higher than that of immunohistochemical,and the specificity of immunohistochemical of TRPV1 and TGF-β2 was significantly higher than that of ELISA(P<0.05).Conclusion：The rise of TRPV1 and TGF-β2 is connected with the attack of UACS. ELISA of TRPV1 and TGF-β2 has high specificity and immunohistochemical of TRPV1 and TGF-β2 has high sensitivity in the diagnosis of UACS.Combined detection of ELISA and immunohistochemical of TRPV1 and TGF-β2 can improve the diagnosis rate of UACS.

Transient receptor potential vanniloid 1(TRPV1);Transforming growth factor-β2(TGF-β2);Enzyme-linked immuno sorbent assay(ELISA);Immunohistochemical(IHC);Upper airway cough syndrome(UACS)

10.3969/j.issn.1005-3697.2016.05.04

2016-01-24

石晓岚(1980-)，女，硕士，主治医师。E-mail：sinian119@126.com

时间：2016-10-2511∶31

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1254.R.20161014.1716.008.html

1005-3697(2016)05-0637-04

R73；R68

A