电针对糖尿病性胃轻瘫模型大鼠INS水平和CCK含量的影响

贺凤娥，万全荃，林亚平，彭　艳，沈　菁

（湖南中医药大学，长沙410007）

电针对糖尿病性胃轻瘫模型大鼠INS水平和CCK含量的影响

贺凤娥，万全荃，林亚平，彭艳，沈菁

（湖南中医药大学，长沙410007）

目的观察电针对糖尿病胃轻瘫（DGP）大鼠血清胰岛素（INS）水平和胃窦组织胆囊收缩素（CCK）含量的影响。方法将60只SD大鼠随机分为A组、B组、C组、D组和E组，每组12只。A组为正常对照组，B组、C组、D组和E组采用腹腔一次性注射2%链脲佐菌素（STZ）配合高糖高脂不规则饮食建立DGP模型。B组为模型组，不接受治疗；C组采用电针足三里、三阴交和梁门治疗；D组采用电针足三里、三阴交和梁门的对照点治疗；E组采用甲氧氯普胺片（胃复安）药液灌胃治疗。采用OneTouch血糖仪测血糖，尿糖试纸测尿糖，酚红灌胃法测胃排空率和肠移行率，并采用ELISA法检测各组大鼠治疗前后血清INS水平和胃窦组织CCK的含量。结果B组、C组、D组和E组大鼠血糖值及尿糖值与A组比较，差异均具有统计学意义（P＜0.01）。C组大鼠血糖值及尿糖值与B组和E组比较，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。B组、C组、D组和E组大鼠胃排空率与A组比较，差异均具有统计学意义（P＜0.01）。C组大鼠胃排空率与B组和D组比较，差异均具有统计学意义（P＜0.01，P＜0.05）。B组和D组大鼠肠移行率与A组比较，差异均具有统计学意义（P＜0.01）。C组大鼠肠移行率与B组和D组比较，差异均具有统计学意义（P＜0.01）。B组大鼠血清INS水平及胃窦组织CCK含量与A组比较，差异均具有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。D组大鼠胃窦组织CCK含量与A组比较，差异具有统计学意义（P＜0.01）。C组和E组大鼠血清INS水平及胃窦组织CCK含量与B组比较，差异均具有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。C组大鼠胃窦组织CCK含量与D组比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论电针能明显改善DGP大鼠的胃肠功能症状，促进胃排空，其疗效可能与电针刺激能提高血清INS水平，同时降低胃窦组织CCK含量有关。

针刺疗法；电针；胃轻瘫；糖尿病并发症；胰岛素；胆囊收缩素

糖尿病胃轻瘫（diabetic gastroparesis，DGP）又称糖尿病性胃麻痹或胃潴留，是以胃动力低下为特点的临床症候群，是糖尿病慢性并发症之一，其主要临床表现为腹痛、餐后饱胀、食欲不振、嗳气、反酸、恶心干呕、体重减轻等症状。血糖控制不良是糖尿病发生并发症的主要原因之一，糖尿病并发症是决定糖尿病患者预后的最主要因素，是导致糖尿病致死和致残的最主要原因。

DGP发病机制相当复杂，至今尚未阐明。研究认为高血糖不仅可直接影响自主神经功能及胃肠激素的分泌，而且还可直接影响胃的运动功能，血糖浓度的增高与胃排空延缓之间互为因果关系［1］。

近年来，现代医学治疗DGP大多是在控制血糖的基础上配合促胃肠动力药，如甲氧氯普胺片（胃复安）、多潘立酮片（吗丁啉）等，其副反应较大，易产生耐药性。而中医针灸治疗DGP有其独特的疗效和优势，其作用主要以多环节、多靶点、多层次的综合调节为特点，且复发率较低，副反应较少。现代研究亦表明，电针足三里等穴对胃肠功能不良患者胃肠运动功能具有调节作用。基于以上认识，本实验以DGP模型大鼠为研究对象，观察电针对DGP大鼠胃动力障碍的治疗作用以及对DGP模型大鼠血清胰岛素（insulin，INS）水平和胃窦组织胆囊收缩素（cholecystokinin，CCK）含量的影响，现报告如下。

1　材料与方法

1.1实验动物

60只健康SD大鼠，SPF级，雌雄各半，体重为（231 ±10）g，购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司（动物质量合格证号43004700002152）。随机分为A组、B组、C组、D组和E组，每组12只。

1.2试剂与仪器

链脲佐菌素（streptozotocin，STZ），美国Sigama公司生产；高糖高脂饲料，由普通饲料按比例（普通饲料、熟猪油、蔗糖、奶粉、鸡蛋之间比例为58:15: 20:5:2）加工而成；血糖仪及血糖试纸，美国强生公司生产；尿糖试纸，广州花都高尔宝生物技术有限公司生产；SDZ-Ⅱ型电针仪，苏州医疗用品厂有限公司生产；针灸针，苏州华伦医疗用品有限公司生产；甲氧氯普胺片（胃复安），山西云鹏制药生产；酚红，天津恒兴化学试剂制造有限公司生产；氢氧化钠，湖南汇虹试剂公司生产；三氯乙酸，天津科密欧化学试剂有限公司生产；ELISA法检测血清INS水平、胃窦组织CCK含量试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。

1.3DGP模型制作

将大鼠购回先适应性喂养7 d，然后禁食12 h，按55 mg/kg的剂量于左下腹腔内单次注射2%STZ溶液，72 h后取尾静脉血，采用OneTouch血糖仪和血糖试纸测血糖，即刻血糖≥16.7 mmol/L者作为糖尿病大鼠。之后给予高糖高脂饲料不规则喂养（即采取单日上午和双日下午进食法）持续8星期，期间检测血糖＜16.7 mmol/L者予以剔除。DGP造模成功指标分为①血糖≥16.7mmol/L，尿糖呈阳性；②大鼠一般情况及大便性状与正常对照组有明显差别；③大鼠胃排空率及肠移行率与正常对照组相比有显著差异。

1.4处理方法

1.4.1A组

正常饲养（以下各组略），不进行造模及治疗，每日捆绑20 min。

1.4.2B组

造模，不给予任何治疗，每日捆绑20 min。

1.4.3C组

造模成功后，取足三里、三阴交和梁门穴。穴位定位参照李忠仁主编的《实验针灸学》常用动物穴位定位法及拟人对照法定位，以胸锁联合和耻骨联合连线下1/4与上3/4交点为肚脐，足三里位于膝关节后外侧，腓骨小头下约5 mm处；三阴交位于后肢内踝尖直上10 mm处；梁门位于胸剑联合到肚脐连线中点的水平线与锁骨中线相交处。将大鼠束缚于鼠板上，定位后局部剪毛，采用0.32 mm×25 mm毫针直刺5～7 mm，针刺后接用电针治疗仪，一组输出线的负极接在穴位上，正极接在该穴位下2 mm的附点上，每只大鼠共接3组输出线，采用疏密波（疏波为10 Hz，密波为50 Hz；疏波时间为5 s，密波时间为10 s），强度以毫针或穴位周围肌肉出现轻微颤动为度，留针20 min。隔日左右交替治疗，每日1次，连续治疗15 d。

1.4.4D组

造模成功后，取足三里、三阴交和梁门穴的相应对照点。足三里对照点在平足三里穴外侧5 mm处；三阴交对照点在平三阴交穴内侧5 mm处；梁门对照点在平梁门穴外侧5 mm处。电针方法及疗程同C组。

1.4.5E组

以1.7%甲氧氯普胺片（胃复安）药液按1 mL/100 g灌胃治疗。每日1次，连续治疗15 d。

1.5标本采集

实验期间大鼠均自由摄食和饮水。实验第15天处理后，5组大鼠禁食24 h，禁水2 h。第16天所有大鼠予腹腔注射10%水合氯醛麻醉后取材。

血清处理:腹主动脉采血，常温放置2～3 h，4℃3000 r/min离心15 min，取上清液，EP管分装，-20℃保存，待测INS水平。

胃肠处理:大鼠剖腹，结扎贲门及幽门取胃，沿胃大弯切开，用冰0.9%氯化钠溶液冲洗并收集胃内容物，定容20 mL，测胃排空；迅速剪取胃窦组织一块置冻存管中，液氮中保存，待测CCK含量；取小肠，测肠移行率。

1.6观察指标

1.6.1血糖及尿糖值

取尾静脉血用OneTouch血糖仪及血糖试纸测血糖，用尿糖试纸测尿糖。

1.6.2胃排空

将收集的20 mL胃内容物加入0.5 mol/L氢氧化钠溶液20 mL搅拌混匀，静置1 h后，取5 mL上清液，加入20%三氯乙酸0.5 mL去蛋白，以3500 r/min离心10 min，取上清液在560 nm波长紫外分光光度计下检测吸光度值（OD）。胃排空率计算公式为，胃排空率=［1 -实测酚红吸光度（OD）/标准酚红吸光度（OD）］× 100%。

1.6.3肠移行率

将小肠轻轻剥离后直铺在冰面上，先肉眼观察小肠被酚红染成红色的末端，然后用眼科剪在该末端剪一小口，往该口上滴少量0.5 mol/L氢氧化钠溶液，若变紫色则为酚红到达的部位，之后在紫色区前后各滴少量氢氧化钠溶液以确定酚红到达的实际部位。肠移行率计算公式为，肠移行率=［小肠被酚红染成红色的末端至幽门的距离（a）/小肠的总长度（A，即幽门至回盲瓣的距离）］×100%。

1.6.4血清INS水平及胃窦组织CCK含量测定

采用ELISA法检测，按照南京建成生物工程研究所试剂盒的要求进行。

1.7统计学方法

所有数据采用SPSS 17.0软件进行统计处理。资料进行正态性检验，符合正态分布的数据用均数±标准差表示，多组计量资料采用单因素方差分析（One-way ANOVA），方差齐者用LSD法，方差不齐者用Dunnett’s T3法；不符合正态分布的数据用中位数（四分位间距）［M（Q）］表示，采用秩和检验。以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2　结果

2.1各组大鼠血糖值及尿糖值比较

表1　各组大鼠血糖值及尿糖值比较［M（Q）］

由表1可见，B组、C组、D组和E组大鼠血糖值及尿糖值与A组比较，差异均具有统计学意义（P＜0.01），提示造模成功。C组大鼠血糖值及尿糖值与B组和E组比较，差异均具有统计学意义（P＜0.05），提示C组控制血糖值及尿糖值优于B组和E组。

2.2各组大鼠胃排空率及肠移行率比较

由表2可见，B组、C组、D组和E组大鼠胃排空率与A组比较，差异均具有统计学意义（P＜0.01）。C组大鼠胃排空率与B组和D组比较，差异均具有统计学意义（P＜0.01，P＜0.05）。B组和D组大鼠肠移行率与A组比较，差异均具有统计学意义（P＜0.01）。C组大鼠肠移行率与B组和D组比较，差异均具有统计学意义（P＜0.01）。

表2　各组大鼠胃排空率及肠移行率比较（x±s，%）

2.3各组大鼠血清INS水平及胃窦组织CCK含量比较

由表3可见，B组大鼠血清INS水平及胃窦组织CCK含量与A组比较，差异均具有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。D组大鼠胃窦组织CCK含量与A组比较，差异具有统计学意义（P＜0.01）。C组和E组大鼠血清INS水平及胃窦组织CCK含量与B组比较，差异均具有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）。C组大鼠胃窦组织CCK含量与D组比较，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

表3　各组大鼠血清INS水平及胃窦组织CCK含量比较（x±s）

3　讨论

糖尿病是一种严重危害人类健康的常见病、多发病，其发病率高，并发症多，已成为继肿瘤和心脑血管疾病之后的第3大疾病［2-3］。预计到2025年，全世界的糖尿病患者将达3亿，其中有50%～76%糖尿病患者并发胃轻瘫［4］。DGP的主要病理表现为胃运动减弱，胃排空延迟，致食物滞留于胃腔内。以往研究显示针灸可通过影响胃肠激素的释放来调节胃肠运动［5］。本课题组在针灸足阳明经穴对胃黏膜保护作用方面进行了长期大量的研究，证实针灸可调节胃运动［6-7］。本实验在以往研究的基础上，认为电针足三里等穴可提高血清INS水平，降低胃窦组织CCK含量，以促进胃排空，控制血糖值，改善DGP症状。

INS是促进合成代谢、调节血糖稳定的主要激素，INS的分泌不足会直接或间接影响血糖的稳定，从而反馈性地影响胃运动，血糖的升高则可抑制胃排空。本研究结果显示，DGP模型大鼠血清INS水平下降，与以往研究结果一致。而经电针足三里等穴治疗的DGP大鼠血清INS水平高于B组，血糖值显著低于B组，表明电针足三里等穴能够提高机体血清INS水平，控制血糖。

CCK既是胃肠道激素又是神经肽，广泛分布于中枢神经系统和周围神经系统中，可对餐后胃排空、胃肠动力以及摄食、饱感和镇痛具有重要的调节作用［8］。在对人、狗、鼠、兔、猴等多种哺乳动物实验研究中发现，CCK能抑制进食后的胃排空活动，且浓度与胃的排空率呈反比关系［8］。有研究［9］发现，CCK对胃运动的调节，主要是使近端胃松弛，抑制胃窦运动，延缓胃排空。CCK可通过其特异性受体（CCK-AR、CCK-BR）来抑制胃排空，产生饱腹感抑制摄食行为［10］。本实验结果显示，DGP模型大鼠胃窦组织CCK含量明显增高，胃排空及肠移行率明显降低，而经电针足三里等穴治疗的DGP大鼠胃窦组织CCK含量低于B组，且胃排空及肠移行率均高于B组，提示电针足三里等穴可降低机体胃窦组织CCK含量，从而促进胃排空，改善胃肠功能障碍。

综上所述，电针足三里等穴可促进DGP模型大鼠的胃肠运动，控制血糖值，其机制可能与血清INS水平的升高和胃窦组织CCK含量的降低有关。但其机制是通过何种信号途径达到效应，则有待进一步的研究。

［1］姚东英，刘菲.糖尿病胃轻瘫发病机制的研究进展［J］.国际消化病杂志，2011，31（1）:16-18.

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Effect of Electroacupuncture on the INS Level and CCK Content in a Rat Model of DGP

HE Feng-e，WAN Quan-quan，LIN Ya-ping，PENG Yan，SHEN Jing.Hunan University of Traditional Chinese Medicine，Changsha，Hunan 410007，China

ObjectiveTo investigate the effect of electroacupuncture on serum insulin（INS）levels and gastric antral cholecystokinin（CCK）content in rats with diabetic gastroparesis（DGP）.MethodsSixty SD rats were randomized into groups A，B，C，D and E，12 rats each.Group A is a normal control.A DGP model was made by an intraperitoneal injection of 2%streptozocin（STZ）plus an irregular high sugar and fat diet in groups B，C，D and E.group B is a model one and did not receive treatment.Group C

electroacupuncture at points Zusanli，Sanyinjiao and Liangmen；group D，electroacupuncture at the control points of Zusanli，Sanyinjiao and Liangmen.Group C，an oral gavage of metoclopramide tablet solution.Blood sugar and urine sugar were determined using a OneTouch lood glucose meter and Tes-Tape，respectively.The gastric emptying rate and the intestinal migration rate were measured by an oral gavage of phenol red.Serum INS levels and gastric antral CCK content were measured by ELISA in every group of rats before and after treatment.ResultsThere were statistically significant differences in blood and urine sugar values between group B，C，D or E rats and group A（P＜0.01）and between group C rats and group B or E（P＜0.05）.There was a statistically significant difference in the gastric emptying rate between group B，C，D or E rats and group A（P＜0.01）and between group C rats and group B or D（P＜0.01，P＜0.05）.There was a statistically significant difference in the intestinal migration rate between group B or D rats and group A（P＜0.01）and between group C rats and group B or D（P＜0.01）.There were statistically significant differences in serum INS levels and gastric antral CCK content between groups B and A rats（P＜0.05，P＜0.01）.There was a statistically significant difference in gastric antral CCK content between groups D and A rats（P＜0.01）.There were statistically significant differences in serum INS levels and gastric antral CCK content between groups C or E rats and group B（P＜0.05，P＜0.01）.There was a statistically significant difference in gastric antral CCK content between groups C and D rats（P＜0.05）.ConclusionsElectroacupuncture can markedly improve gastrointestinal functions and promote gastric emptying in DGP rats.Its therapeutic effect may be related to electroacupuncture raising serum INS levels and reducing gastric antral CCK content.

Acupuncture therapy；Electroacupuncture；Gastroparesis；Diabetic complications；Insulin；Cholecystokinin

加

R2-03

A

10.13460/j.issn.1005-0957.2016.01.0081

1005-0957（2016）01-0081-04

国家自然科学基金项目（81403487）；湖南省高校创新平台开放基金项目（12K088）

贺凤娥（1987-），女，2012级硕士生

林亚平（1956-），女，教授，博士生导师，研究方向为针灸治病的临床与实验研究，Email:lyp5381161@126.com

2015-09-12