顶空气相色谱法测定苯并三嗪衍生物YABQ的溶剂残留量

刘少磊　杨建云　肖炳坤　黄荣清军事医学科学院放射与辐射医学研究所，北京100850

顶空气相色谱法测定苯并三嗪衍生物YABQ的溶剂残留量

刘少磊杨建云肖炳坤黄荣清
军事医学科学院放射与辐射医学研究所，北京100850

目的建立顶空气相色谱法测定苯并三嗪衍生物YABQ中3种残留溶剂含量的方法。方法采用DBWAX毛细管色谱柱（0.45mm×30mm，0.85μm），程序升温，柱头压为4 psi（1 psi=6.895 kPa），进样口温度为200℃，FID检测器温度为250℃，顶空进样，平衡温度为70℃，平衡时间为10 min，以DMSO为溶剂，检测残留溶剂的含量。结果丙酮、吡啶和四氢呋喃检测限分别为0.48、0.10、1.76μg/mL，3种残留溶剂均能有效分离，丙酮、吡啶、四氢呋喃线性关系良好（r＞0.9996），平均回收率（n=3）分别为102.22%、99.21%、97.87%，RSD分别为0.56%、1.60%、1.09%，丙酮残留量分别为0.0676%、0.0342%、0.0833%，吡啶和四氢呋喃未检出，残留溶剂含量符合药典规定。结论该方法简便、快速、准确，可用于YABQ中残留溶剂的含量测定。

残留溶剂；丙酮；吡啶；四氢呋喃；气相色谱法

肿瘤是当今社会的一大杀手，在我国肿瘤的死亡占全部死因的1/4［1］。国内外学者经过多年研究发现了一种化学物质即放射增敏剂［2］，使癌细胞对射线的敏感性增强而对机体的免疫功能、造血系统不会造成大的伤害［3-9］。放射增敏剂YABQ是在苯并三嗪基础上改造后的一个化合物，作为一种新型放射增敏剂，与市场上已有的相比，结构上摆脱了硝基并且母核不再是五元含氮环，大大降低毒副作用，化学结构独特新颖；YABQ可在短时间、低剂量射线照射下提高乏氧细胞的敏感性，又可在肿瘤乏氧区还原，增强杀伤肿瘤细胞的能力，具有双重功效和良好治疗效果［10-17］。放射增敏剂YABQ在提取过程中使用了丙酮、吡啶和四氢呋喃，因此可能残留上述溶剂。

顶空气相色谱法具有检测灵敏度高、选择性好、所需样品量少的特点，可以满足样品残留溶剂的测定要求。本研究建立了顶空气相色谱法测定丙酮、吡啶和四氢呋喃3种残留溶剂的方法。

1　仪器与试药

Agilent 6820气相色谱仪，HP7694顶空进样器，FID检测器，Agilent DB-WAX毛细管色谱柱（30 m× 0.45 mm，0.85μm），德国sartorius（BP211D）电子天平，对照品YABQ（批号20140406，纯度99.7%），YABQ原料药（批号20140410、20140416、20140424）均由军事医学科学院放射与辐射医学研究所提供，丙酮、吡啶、四氢呋喃、二甲基亚砜（国药集团化学试剂有限公司，批号2014001，纯度99.5%）。

2　方法与结果

2.1色谱条件

Agilent DB-WAX毛细管柱（0.45 mm×30 mm，0.85μm），程序升温，进样口温度：200℃，检测器温度：250℃，柱头压：4 psi（1 psi=6.895 kPa），载气：N2，顶空气化室温度：70℃，平衡10 min，定量环温度：80℃，样品传输管温度：90℃，进样量：1.0 mL。柱温：50℃，保持6 min，然后以35℃/min的速度升温至200℃，保持10min。

2.2溶液配制

2.2.1对照品溶液精密称定丙酮781.25mg于25mL量瓶中，加DMSO稀释至刻度，作为丙酮溶液。精密称定吡啶31.25mg，同法处理，作为吡啶溶液。精密称定四氢呋喃137.5mg，同法处理，作为四氢呋喃溶液。分别取其1 mL置25 mL量瓶中，加DMSO刻度，为对照储备液。精密移取2mL对照品储备液，置10mL量瓶中，加DMSO稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液。2.2.2供试品溶液取YABQ样品（批号：20140410）100mg，精密称定，置20 mL顶空瓶中，加2.0 mL DMSO，密封，摇匀。

2.2.3空白溶液精密移取2mL的DMSO于顶空进样瓶中作为空白溶液。

2.3方法学验证

2.3.1系统适应性试验按“2.2.1”项下方法配制对照品溶液及空白溶液（溶剂DMSO），进样，记录色谱图，残留溶剂峰均能够完全分离，且溶剂DMSO无干扰，说明系统适应性良好。见图1～2。

2.3.2检测限尧定量限与线性范围将对照品贮备液溶液逐级稀释，以每种残留溶剂信噪比（S/N）≥3作为检测限（LOD），信噪比（S/N）≥10作为定量限（LOQ）。结果表明，3种残留溶剂均具有良好的线性关系（r≥0.9996），满足残留溶剂检测方法要求。结果见表1。精密移取对照品贮备液1.6、2、2.4、3、4、5 m L分别置10mL量瓶中，加DMSO稀释至刻度超声混匀作为标准溶液。各取2 mL置20mL顶空瓶中。进样，以浓度（X）为横坐标，峰面积为纵坐标（Y）进行线性回归。结果见表1。

图1　对照品溶液气相色谱图

图2　空白溶剂气相色谱图

表1　线性范围、检测限和定量限（μg/m L）

2.3.3精密度试验精密移取2mL对照品溶液置顶空进样瓶中，加2mLDMSO，密封。连续进样6次，计算丙酮、吡啶和四氢呋喃对照品溶液峰面积，RSD分别为0.28%、1.84%、1.25%，结果表明仪器精密度良好。

2.3.4重复性试验取YABQ样品（批号：20140410），按“2.2.2”项下方法配制样品溶液6份，顶空测定。结果吡啶和四氢呋喃未检出，丙酮RSD=1.26%，表明重复性良好。

2.3.5稳定性试验取“2.2.2”项下供试品溶液（批号：20140410），分别于0、2、4、8、10、12 h时进样测定，记录峰面积。结果吡啶和四氢呋喃未检出，丙酮RSD= 1.75%，表明溶液在12 h内稳定。

2.3.6回收率试验取对照品储备液1.6、2.0、2.4 mL分别置10 mL量瓶中，加DMSO稀释至刻度，配成3个浓度的待测溶液，相当于对照的80%、100%、120%。取供试品溶液（批号：20140410），分别加3个不同浓度（每个浓度3份）的待测液2 mL，顶空测定。计算时扣除原料药中所含的残留剂量。结果平均回收率分别为102.22%、99.21%、97.87%，RSD分别为0.56%、1.60%、1.09%，3种残留溶剂平均回收率均在95%～105%，结果表明样品的回收率良好。

2.4样品的测定

按照“2.2.1、2.2.2”项下方法制备对照品及供试品溶液，顶空进样并计算样品中残留溶剂的含量。3批样品中丙酮残留溶剂量均低于药典标准0.5%［18］附录63，其他残留溶剂未检出。见表2。

表2　样品中残留溶剂含量测定结果（%）

3　讨论

3.1溶剂的选择

本实验采用DMSO作为溶剂［19］61-65。对3种残留的溶剂的溶解和分离均良好。

3.2进样方式的选择

药典规定丙酮、吡啶、THF限量为0.005%、0.002%、0.072%，采用一般的分析方法很难准确检测。溶液直接进样法，不仅对色谱柱有污染而且样品基线会漂移，产生鼓包，顶空进样可以避免污染色谱柱［19-20］。本研究采用顶空进样，检测结果显示YABQ中残留溶剂量符合药典规定。

3.3顶空平衡温度和时间的选择

选择了60、70、80℃顶空平衡，结果表明温度越高峰面积响应越大，过高温度对仪器有一定损伤，考虑温度和峰灵敏度，故选择70℃；平衡时间选择了10、20、30、40 min，结果显示平衡时间对峰面积影响不大，故选择10min。

综上所述，放射敏感性是肿瘤放射治疗的核心问题，如何提高敏感性是肿瘤放射治疗所关注的问题，长期的临床研究并没有找到理想的低毒高效的放射增敏剂［21］，对物质的化学结构进行改造为其提供了一种重要思路。本研究通过对YABQ残留溶剂的研究，成功建立了顶空气相色谱法测定YABQ中残留溶剂的含量，为质量控制、制剂生产提供了科学保障。

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Head-space gas chrom atography determ ination of residual solvents in benzene and triazine derivatives YABQ

LIU Shaolei YANG Jianyun XIAO Bingkun HUANG Rongqing
Institute of Radiation Medicine，Academy of Military Medical Science，Beijing 100850，China

Objective To establish a head-space gas chromatography method for determination of three residual solvents in benzene and triazine derivatives YABQ.Methods DB-WAX capillary column（0.45mm×30 mm，0.85μm）and temperature program were adopted，the stigma pressure was 4 psi（1 psi=6.895 kPa），the inlet temperaturewas 200℃，the FID detector temperature was 250℃，the head-space equilibrium temperature was 70℃，the equilibrium time was 10 min，DMSO was selected as the solvent，the content of residual solventswere detected.Resu lts The results of acetone，pyridine and tetrahydrofuran detection limits were 0.48μg/mL，0.10μg/mL and 1.76μg/mL，three kinds of residual solvents could be separated，a good linear relationship（r＞0.9996）ofacetone，pyridine，tetrahydrofuran were showed，the average recoveries（n=3）were 102.22%，99.21%，97.87%，the RSD were 0.56%，1.60%，1.09%，the residual amount of acetone were 0.0676%，0.0342%，0.0833%，pyridine and tetrahydrofuran were undetected，the residual solvent content in line with the pharmacopoeia.Conclusion Themethod is simple，rapid，accurate，and can be used as a method for the determination YABQ residual solvent.

Residual solvent；Acetone；Pyridine；Tetrahydrofuran；Gas chromatography

R917

A

1673-7210（2016）06（c）-0135-03

国家自然科学基金资助项目（21375147）；国家科技重大新药创制专项（2013ZX09102-016）。

刘少磊（1984-），男，军事医学科学院2012级药物分析专业在读硕士研究生；研究方向：新药质量标准。

黄荣清（1965-），男，博士生导师；研究方向：新药质量标准、代谢组学。

（2016-02-12本文编辑：赵鲁枫）