EMP1、EGF和NRG3在鼻息肉中的表达水平及糖皮质激素的影响

缑丽军



EMP1、EGF和NRG3在鼻息肉中的表达水平及糖皮质激素的影响

缑丽军

目的探讨上皮膜蛋白1(EMP1)、表皮生长因子(EGF)、神经调节蛋白3(NRG3)在鼻息肉中的表达水平及糖皮质激素对其表达的影响。方法鼻息肉组织标本取自于40例鼻息肉病例。选择30例因鼻中隔偏曲接受鼻内镜手术的病例的下鼻甲黏膜组织作为对照组。40例鼻息肉病例中，伴重度上皮增生14例，伴轻中度上皮增生26例；伴鳞状上皮化生12例，不伴鳞状上皮化生28例。采用实时荧光定量技术(qRT-PCR)、免疫组化方法检测EMP1、EGF和NRG3的表达水平。结果鼻息肉组组织中EMP1、EGF、NRG3 mRNA的表达水平均低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。鼻息肉组组织中EMP1、EGF、NRG3的表达阳性率均低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。伴有重度上皮增生鼻息肉组织中EMP1、EGF、NRG3 mRNA的表达水平均低于伴有轻中度上皮增生鼻息肉组织，差异有统计学意义(P<0.05)。伴有鳞状上皮化生鼻息肉组织中EMP1、EGF、NRG3 mRNA的表达水平均低于不伴有鳞状上皮化生鼻息肉组织，差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后，鼻息肉组织中EMP1、EGF、NRG3 mRNA的表达水平均较治疗前明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后，鼻息肉组织中EMP1、EGF、NRG3的表达阳性率均较治疗前升高，差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前鼻息肉组织中EMP1与EGF、NRG3的 mRNA表达水平均呈正比(r=0.367，P=0.014，r=0.352，P=0.019)，EGF、NRG3的 mRNA表达水平呈正比(r=0.361，P=0.016)；治疗后鼻息肉组织中EMP1与EGF、NRG3的 mRNA表达水平均呈正比(r=0.356，P=0.026，r=0.341，P=0.029)，EGF、NRG3的 mRNA表达水平呈正比(r=0.350，P=0.027)。结论EMP1、EGF和NRG3在鼻息肉发病及上皮损伤、修复过程中起重要作用。糖皮质激素可通过上调EMP1、EGF和NRG3的表达在鼻息肉的上皮损伤和修复中起积极作用。

鼻息肉；糖皮质激素；上皮膜蛋白1；表皮生长因子；神经调节蛋白3

鼻息肉是一种常见的头颈部良性病变，常伴有炎性细胞的浸润、上皮组织的重构及损伤[1]。鼻息肉发病的具体病因和机制尚未得到明确。近年来鼻息肉组织中某些生化指标的异常表达已引起学术界注意[2,3]。上皮膜蛋白1(EMP1)是一种膜糖蛋白，与良恶性肿瘤的发病及病理变化密切相关。表皮生长因子(EGF)、神经调节蛋白3(NRG3)均是酪氨酸激酶受体家族的配体，在多种疾病的发病过程中起重要作用[4]。有关EMP1、EGF、NRG3在鼻息肉组织中的表达与鼻息肉发病、上皮损伤修复的关系及糖皮质激素对上述指标表达的影响的研究笔者所见较少，本研究通过检测糖皮质激素治疗前后鼻息肉组织中EMP1、EGF、NRG3等指标的表达情况，旨在探讨EMP1、EGF、NRG3等指标的表达在鼻息肉上皮损伤修复中的作用及糖皮质激素对上述指标表达的影响。

1　资料与方法

1.1一般资料鼻息肉组织标本取自2014年11月至2015年8月我院耳鼻喉科收治的40例患有双侧鼻息肉并接受鼻内镜治疗的病例，鼻息肉经病理科病理确诊，符合鼻息肉的诊断标准[5]。鼻息肉组患者，男26例，女14例；年龄23～75岁，平均年龄(47.91±5.56)岁；40例鼻息肉病例中，经病理科病理检测，伴重度上皮增生14例，伴轻中度上皮增生26例；伴鳞状上皮化生12例，不伴鳞状上皮化生28例。选择30例同期在我院因鼻中隔偏曲接受鼻内镜手术的病例的下鼻甲黏膜组织作为对照组，男20例，女10例；年龄23～75岁，平均年龄(46.82±5.32)岁。2组性别比、年龄比较，差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性。本研究均经入组患者知情同意，并获我院伦理委员会审批通过。

1.2标本采集及处理鼻息肉患者均在鼻内镜手术前6周接受过布地奈德鼻喷剂鼻治疗(128 μg/次，2次/d，生产厂家：瑞典Astra Zeneca AB)，分别于糖皮质激素治疗前、治疗后取鼻息肉组织。对照组患者组织标本取自于手术中。将新鲜组织样本分为两部分：一部分装入无菌EP管中，分存于液氮，以备后续荧光定量PCR(qRT-PCR)检测使用；一部分用甲醛固定石蜡包埋后(厚约4 μm的切片)用于免疫组化。

1.3实验方法

1.3.1荧光定量PCR：采用美国BD公司生产的荧光定量PCR(qRT-PCR)仪行qRT-PCR，检测鼻息肉组织和对照组组织中EMP1、EGF、NRG3 mRNA的表达水平。PCR反应步骤如下：94℃预变性3 min;94℃变性20 s，60℃退火30 s，72℃延伸40 s;35个循环，72℃延伸10 min。

1.3.2免疫组化：采用SP法对石蜡切片行免疫组化检测，每张切片在高倍显微镜下(×400) 观察。上皮增生程度判定：4<上皮层数≤8代表轻度或者中度上皮增生；上皮层数>8代表重度上皮增生。免疫组化评分：0分，阴性：1分，阳性细胞比例<15%；2分，15%～60%；3分，≥60%。

2　结果

2.12组组织中EMP1、EGF、NRG3 mRNA的表达水平鼻息肉组组织中EMP1、EGF、NRG3 mRNA的表达水平均低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

　组别EMP1EGFNRG3鼻息肉组(n=40)1．61±0．211．12±0．170．82±0．11对照组(n=30)4．01±0．592．98±0．301．96±0．19　t值4．1273．3513．023　P值0．0000．0020．009

2.22组组织中EMP1、EGF、NRG3表达阳性率比较鼻息肉组组织中EMP1、EGF、NRG3的表达阳性率均低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

　组别EMP1EGFNRG3鼻息肉组(n=40)46．42±8．1938．19±7．0124．61±3．26对照组(n=30)87．78±10．6776．81±8．5269．87±5．39　t值18．75520．79322．182　P值0．0000．0000．000

2.3鼻息肉组织中EMP1、EGF、NRG3 mRNA的表达水平比较伴有重度上皮增生的鼻息肉组织中EMP1、EGF、NRG3 mRNA的表达水平均低于伴有轻中度上皮增生的鼻息肉组织，差异均有统计学意义(P<0.05)。伴有鳞状上皮化生鼻息肉组织中EMP1、EGF、NRG3 mRNA的表达水平均低于不伴有鳞状上皮化生鼻息肉组织，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表3。

　类别EMP1EGFNRG3重度上皮增生(n=14)1．04±0．220．98±0．180．71±0．10轻中度上皮增生(n=26)2．92±0．291．17±0．201．07±0．17　t值4．5063．3263．011　P值0．0000．0040．011伴有鳞状上皮化生(n=12)1．02±0．200．96±0．160．68±0．11不伴有鳞状上皮化生(n=28)2．94±0．271．19±0．221．09±0．15　t值4．2613．2963．008　P值0．0000．0070．015

2.4治疗前、后鼻息肉组织中EMP1、EGF、NRG3 mRNA的表达水平比较治疗后，鼻息肉组织中EMP1、EGF、NRG3 mRNA的表达水平均较治疗前明显升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表4。

组别EMP1EGFNRG3治疗前1．61±0．211．12±0．170．82±0．11治疗后3．87±0．292．68±0．211．86±0．15t值4．1193．3223．009P值0．0000．0070．016

2.5治疗前、后鼻息肉组织中EMP1、EGF、NRG3表达阳性率比较治疗后，鼻息肉组织中EMP1、EGF、NRG3的表达阳性率均较治疗前升高，差异有统计学意义(P<0.05)。见表5。

组别EMP1EGFNRG3治疗前46．42±8．1938．19±7．0124．61±3．26治疗后80．92±10．5671．26±8．4265．91±4．32t值19．01521．82722．218P值0．0000．0000．000

2.6相关性分析治疗前鼻息肉组织中EMP1与EGF、NRG3的 mRNA表达水平均呈正比(r=0.367，P=0.014;r=0.352，P=0.019)，EGF、NRG3的 mRNA表达水平呈正比(r=0.361，P=0.016)；治疗后鼻息肉组织中EMP1与EGF、NRG3的 mRNA表达水平均呈正比(r=0.356，P=0.026;r=0.341，P=0.029)，EGF、NRG3的 mRNA表达水平呈正比(r=0.350，P=0.027)。

3　讨论

EMP1是一种完整的膜糖蛋白，具有调节上皮分化的功能，最早发现于脑组织、胃肠道等重要组织[6]。有研究发现，EMP1与头颈部肿瘤、口腔肿瘤等良恶性肿瘤的发病有关，在其中起了重要作用[7-10]。为探讨EMP1在鼻息肉发病过程中的作用，本研究检测了鼻息肉组织中EMP1的表达水平，RT-PCR和免疫组化检测结果均显示，鼻息肉组织中EMP1的表达明显较对照组下调。表明EMP1的低表达可能参与了鼻息肉的发病。此外，本研究亦检测了鼻息肉伴上皮增生组织和伴鳞状上皮化生组织中EMP1的表达情况。RT-PCR检测结果显示，鼻息肉伴重度上皮增生组织和鼻息肉伴鳞状上皮化生组织中EMP1的表达水平明显较轻中度上皮增生组织及不伴鳞状上皮化生组织中下调。表明EMP1可能与鼻息肉上皮组织重塑及鳞状上皮化生有关，EMP1可能参与了鼻息肉上述病理变化的过程。即EMP1的表达下调在鼻息肉上皮损伤和修复过程中起重要作用。目前学术界普遍支持鼻息肉不具有恶变倾向的观点，但鼻息肉具有上皮增生、鳞状上皮化生等头颈部常见良恶性肿瘤所具有的病理特点[11]，因此推测鼻息肉是否与这些良恶性肿瘤具有类似的病理变化，而检测EMP1在鼻息肉组织中的表达水平对判定鼻息肉上皮增生、鳞状上皮化生具有重要价值[12]。

EGF和NRG3是酪氨酸激酶受体家族的配体，研究发现，EGF和NRG3在众多疾病的发病过程中起作用[11]。本研究亦采用RT-PCR和免疫组化方法检测鼻息肉组织中EGF和NRG3的表达水平。检测结果显示，鼻息肉组织中EGF和NRG3的表达水平亦较对照组中明显下调。表明EGF和NRG3的低表达亦参与了鼻息肉的发病。国外研究发现，EGF和NRG3在乳腺上皮增生和分化中扮演重要角色[11]。我们猜想，EGF和NRG3在鼻息肉上皮增生和鳞状上皮化生过程中是否亦发挥一定的作用。RT-PCR检测结果证实了我们的想法。本检测结果显示，鼻息肉伴重度上皮增生组织和鼻息肉伴鳞状上皮化生组织中EGF和NRG3的表达水平明显较轻中度上皮增生组织及不伴鳞状上皮化生组织中下调。表明EGF和NRG3可能与鼻息肉上皮组织重塑及鳞状上皮化生有关，EGF和NRG3的表达下调可能参与了鼻息肉上述病理变化的过程。相关性显示，在糖皮质激素治疗前和治疗后，EMP1、EGF、NRG3的表达水平均呈正相关，表明EMP1、EGF、NRG3等指标在鼻息肉的发病及病理变化中可能共同发挥作用。

糖皮质激素对鼻息肉症状的缓解及疗效具有重要价值。为探讨糖皮质激素对鼻息肉组织中EMP1、EGF和NRG3表达的影响，本研究采用RT-PCR和免疫组化检测了糖皮质激素治疗前和治疗后鼻息肉组织中EMP1、EGF和NRG3等指标的表达情况。检测结果显示，经糖皮质激素治疗后，鼻息肉组织中EMP1、EGF和NRG3等指标的表达明显较治疗前上调。表明糖皮质激素对鼻息肉组织的上皮损伤和修复具有积极作用，糖皮质激素可通过上调EMP1、EGF和NRG3等生化指标的表达进而抑制鼻息肉的上皮异常重塑，修复鼻息肉损伤的组织。

综上所述，EMP1、EGF和NRG3等生化指标在鼻息肉发病及上皮损伤、修复过程中起重要作用。检测EMP1、EGF和NRG3在鼻息肉组织中的表达水平对判定鼻息肉上皮增生、鳞状上皮化生具有重要价值。糖皮质激素可通过上调EMP1、EGF和NRG3等生化指标的表达在鼻息肉的上皮损伤和修复中起积极作用。

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The expressions of EMP1, EGF, NRG3 in nasal polyps and the effects of glucocorticoids on their expressions

GOULijun.

DepartmentofOtorhinolaryngology,People’sHospitalofJianyangCity,Sichuang,Jianyang641400,China

ObjectiveTo observe the expressions of EMP1, EGF, NRG3 in nasal polyps and the effects of glucocorticoids on their expressions.MethodsThe nasal polyps tissue specimens were taken from 40 cases of nasal polyps,and the other 30 cases of nasal septum deviation of inferior turbinate mucosa taken by nasal endoscopic surgery were selected as control group. Among 40 cases of nasal polyps,there were 14 cases with severe epithelial hyperplasia, 26 cases with mild or moderate epithelial hyperplasia,moreover, there were 12 cases with squamous metaplasia, 28 cases without squamous metaplasia. The expression levels of EMP1, EGF and NRG3 were detected by Real-time fluorescence quantitative PCR technology (qRT - PCR), immunohistochemistry,respectively.ResultsThe expression levels of EMP1, EGF, NRG3 mRNA in nasal polyps tissues were significantly lower than those in control group (P<0.05). The expression levels of EMP1, EGF,NRG3 mRNA in nasal polyps tissues with severe epithelial hyperplasia were significantly lower than those of nasal polyps tissues with mild or moderate epithelial hyperplasia (P<0.05). The expression levels of EMP1,EGF,NRG3 mRNA in nasal polyps tissues with squamous metaplasia were significantly lower than those of nasal polyps tissues without squamous metaplasia (P<0.05). After treatment, the expression levels of EMP1, EGF, NRG3 mRNA in nasal polyps tissues were significantly increased,as compared with those before treatment (P<0.05). Before treatment and after treatment,the expression levels of EMP1 were positively correlated to those of EGF,NRG3 mRNA (P<0.05),and the expression levels of EGF were positively correlated to those of NRG3 mRNA (P<0.05).ConclusionEMP1, EGF and NRG3 play an important role in the pathogenesis of nasal polyps and in the process of epithelial damage and repairing.Moreover glucocorticoid can increase the expression levels of EMPl, EGF and NRG3 in nasal polyps and may play a positive role in the process of epithelial damage and repairing.

nasal polyps;glucocorticoids;epithelial membrane protein 1; epidermal growth factor; neuromodulation protein 3

10.3969/j.issn.1002-7386.2016.21.010

641400四川省简阳市人民医院耳鼻喉科

R 765.2

A

1002-7386(2016)21-3237-04

2016-04-17)