通心降脂滴丸对异丙肾上腺素致大鼠急性心肌缺血的保护作用

张梦迪，吕晓丽，3，白图雅，3，常福厚，3，高峰，张秀慧

（1.内蒙古医科大学新药安全评价研究中心，内蒙古呼和浩特010010；2.内蒙古自治区新药筛选工程研究中心，内蒙古呼和浩特010010；3.内蒙古医科大学药学院药理教研室，内蒙古呼和浩特010010）

通心降脂滴丸对异丙肾上腺素致大鼠急性心肌缺血的保护作用

张梦迪1，2，吕晓丽1，2，3，白图雅1，2，3，常福厚1，2，3，高峰2，3，张秀慧2，3

（1.内蒙古医科大学新药安全评价研究中心，内蒙古呼和浩特010010；2.内蒙古自治区新药筛选工程研究中心，内蒙古呼和浩特010010；3.内蒙古医科大学药学院药理教研室，内蒙古呼和浩特010010）

目的探讨通心降脂滴丸对异丙肾上腺素（ISO）致急性心肌缺血的保护作用，为通心降脂滴丸的临床试验及临床应用提供药效学依据。方法取健康Wistar大鼠80只，乌拉坦麻醉，背位固定，测定标准肢体二导联心电图，筛选出心电图（ECG）正常动物60只。将60只大鼠随机均分为空白对照组，缺血模型组，普萘洛尔组，通心降脂滴丸低、中、高剂量组。通过皮下注射异丙肾上腺素建立大鼠心肌缺血损伤模型，检测各组大鼠血清中肌酸激酶（CK）、乳酸脱氢酶（LDH）、丙二醛（MDA）的含量和心肌组织中超氧化物歧化酶（SOD）活力，以及对异丙肾上腺素致心肌缺血后心电图的影响，评价通心降脂滴丸对异丙肾上腺素引起的心肌缺血的改善作用。结果缺血模型组大鼠心电图S-T段明显抬高，与空白对照组比较有显著性差异（P＜0.05）；与缺血模型组比较，通心降脂滴丸低、高剂量组大鼠的心电图S-T段均有明显下降。与空白对照组比较，缺血模型组LDH、CK活力、MDA含量均显著增高（P＜0.05）；与缺血模型组比较，通心降脂滴丸中剂量组MDA含量显著降低（P＜0.05），SOD活力显著增高（P＜0.05）；通心降脂滴丸高剂量组LDH、CK活力及MDA含量显著降低（P＜0.05），SOD活力显著增高（P＜0.05）。结论通心降脂滴丸可使心肌缺血大鼠心电图S-T段降低，缓解心肌缺血程度，减少心肌缺血后血清中LDH、CK的释放，以及心肌组织中MDA的产生，提高SOD活力，降低心肌损伤程度，对缺血心肌有保护作用。

通心降脂滴丸；异丙肾上腺素；急性心肌缺血

冠状动脉粥样硬化性心脏病（简称冠心病），又称缺血性心脏病，主要是由于心肌供氧供血不足，冠状动脉痉挛，从而导致心肌代谢异常［1］。通心降脂滴丸的主要成分为丹参、三七、降香、山楂、冰片等药材［2-4］。本试验中通过制备急性心肌缺血动物模型，研究通心降脂滴丸对冠心病的治疗价值，为通心降脂滴丸的临床试验及临床应用提供充分的药效学依据。现报道如下。

1　仪器、动物与材料

1.1仪器

BL-420s型生物机能试验系统（成都泰盟科技有限公司）；分析天平（美国丹佛仪器公司）；3K15型低温离心机（Sigma公司）；水浴箱（上海梅香仪器有限公司）；TU-1901型双光束紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）。

1.2动物

清洁级Wistar大鼠，体重180～220 g，雌雄各半，购自内蒙古大学动物中心，实验动物质量合格证编号为SCXK（蒙）2002-0001。动物饲养于聚碳酸酯大鼠饲养笼，每笼饲养同剂量组的5只同性别大鼠；饲养环境温度20～24℃，湿度40%～70%；由内蒙古大学动物中心提供标准大鼠颗粒饲料，自由摄取纯净水。

1.3试药

通心降脂滴丸（内蒙古医科大学药学院研制，批号为20120125，规格为每丸27 mg）；盐酸普萘洛尔片（山西云鹏制药有限公司，批号为A100102，规格为每片10 mg）；盐酸异丙肾上腺素（ISO，西南药业股份有限公司，批号为20120322）；0.9%氯化钠注射液（生理盐水，河北天成药业有限公司，批号为09122510）；无水乙醇（天津市北联精细化学品开发有限公司，批号为20101127）；丙二醛试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号为20110315）；乳酸脱氢酶试剂盒（批号为20110315），肌酸激酶试剂盒（批号为20110315）均由南京建成生物工程研究所提供。

2　方法与结果

2.1试验方法

2.1.1分组及给药

取健康Wistar大鼠60只，随机分为空白对照组，缺血模型组，普萘洛尔组，通心降脂滴丸低、中、高剂量组（分别按0.242，0.726，2.180 g/kg［5］灌胃给药），各10只。灌胃给药，每天灌胃1次，空白对照组与缺血模型组给予生理盐水，普萘洛尔组给予盐酸普奈洛尔混悬药液，给药剂量均为1 mL/100 g，连续灌胃7 d。

2.1.2建立急性心肌缺血模型及心电图测量

取健康Wistar大鼠80只，乌拉坦麻醉，背位固定，测定标准肢体二导联心电图，筛选出心电图正常动物60只。按简化分层随机法将60只Wistar大鼠分为空白对照组，缺血模型组，普萘洛尔组，通心降脂滴丸低（0.242 g/kg）、中（0.726 g/kg）、高（2.180 g/kg）剂量组，各10只。试验前用标准肢体Ⅱ导联测定所有大鼠的正常心电图。测完心电图次日开始灌胃给药，每天灌胃1次，空白对照组与缺血模型组给予生理盐水，普萘洛尔组给予盐酸普奈洛尔混悬药液。给药剂量均为1 mL/100 g，连续灌胃7 d。灌胃第6天时，空白对照组皮下注射生理盐水（1 mL/100 g），缺血模型组、普萘洛尔组、通心降脂滴丸低、中、高剂量组皮下注射ISO（5 mg/kg），连续注射3 d，建立大鼠急性心肌缺血模型。全部动物在末次皮下注射ISO后，作心电图检查，观察S-T段变化情况。

2.1.3测定乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶（CK）、超氧化物歧化酶（SOD）活力及丙二醛（MDA）含量

全部动物在末次皮下注射ISO 24 h后麻醉，主动脉取血，分离血清，按试剂盒测定方法测定各样本LDH和CK活力。剖取心脏，用生理盐水冲洗，剪去血管和结缔组织，滤纸吸干后称重，制备10%心脏组织匀浆，使用MDA和SOD试剂盒测定各组大鼠心脏组织匀浆中MDA含量及SOD活力。

2.1.4统计学处理

2.2试验结果

2.2.1对心肌缺血大鼠心电图S-T段的影响

缺血模型组大鼠心电图S-T段明显抬高，与空白对照组比较有显著性差异（P＜0.05），通心降脂滴丸中、高剂量组心电图与缺血模型组比较，S-T段均有明显下降（P＜0.05），表明通心降脂滴丸可改善心肌梗死程度。详见表1。

表1　对心肌缺血大鼠心电图S-T的影响（±s，n=10）

表1　对心肌缺血大鼠心电图S-T的影响（±s，n=10）

注：NS为生理盐水；括号内为变化百分率；与缺血模型组相比， P＜0.05。下表同。

组别空白对照组缺血模型组普萘洛尔组通心降脂滴丸低剂量组中剂量组高剂量组剂量N S N S 1 8 . 5 0 0 m g / k g 0 . 2 4 2 g / k g 0 . 7 2 6 g / k g 2 . 1 8 0 g / k g造模前0 . 2 8 ± 0 . 1 8（1 0 0 ± 0）0 . 2 8 ± 0 . 1 8（1 0 0 ± 0）0 . 3 8 ± 0 . 2 6（1 0 0 ± 0）0 . 2 9 ± 0 . 1 8（1 0 0 ± 0）0 . 3 4 ± 0 . 2 2（1 0 0 ± 0）0 . 4 7 ± 0 . 2 3（1 0 0 ± 0）造模后0 . 3 0 ± 0 . 2 1（1 0 6 . 3 7 ± 2 1 . 3 7）0 . 4 7 ± 0 . 2 0（2 0 5 . 1 1 ± 7 7 . 8 4）0 . 4 0 ± 0 . 2 5（1 1 6 . 0 2 ± 4 8 . 5 0）0 . 4 2 ± 0 . 1 7（1 6 0 . 0 1 ± 2 7 . 5 2）0 . 4 4 ± 0 . 2 3（1 4 0 . 7 0 ± 4 4 . 1 6）0 . 5 3 ± 0 . 2 3（1 1 6 . 2 4 ± 2 4 . 2 8）

2.2.2对急性心肌缺血大鼠LDH活力的影响

与空白对照组比较，缺血模型组LDH活力显著升高（P＜0.05）；与缺血模型组比较，通心降脂滴丸高剂量组LDH活力显著降低（P＜0.05）。详见表2。

2.2.3对急性心肌缺血大鼠CK和SOD活力的影响

表2　对急性心肌缺血大鼠LDH活力的影响（±s，n=10）

表2　对急性心肌缺血大鼠LDH活力的影响（±s，n=10）

组别空白对照组缺血模型组普萘洛尔组通心降脂滴丸低剂量组中剂量组高剂量组剂量N S N S 1 8 . 5 0 0 m g / k g 0 . 2 4 2 g / k g 0 . 7 2 6 g / k g 2 . 1 8 0 g / k g L D H（U / L）4 2 4 5 . 1 3 ± 5 5 2 . 6 4 5 2 0 4 . 6 6 ± 2 4 7 . 2 5 4 3 3 2 . 1 4 ± 6 8 9 . 0 8 4 9 8 9 . 6 5 ± 2 2 2 . 1 0 4 7 9 3 . 6 5 ± 3 6 4 . 7 1 4 2 8 3 . 3 6 ± 7 8 1 . 2 9

与空白对照组比较，缺血模型组CK活力显著增高（P＜0.05）；与缺血模型组比较，通心降脂滴丸高剂量组CK活力显著降低（P＜0.05）。与缺血模型组比较，通心降脂滴丸中剂量组SOD活力显著增高（P＜0.05），高剂量组MDA含量显著降低（P＜0.05），SOD活力显著增高（P＜0.05）。与空白对照组比较，缺血模型组MDA含量显著增高（P＜0.05）；与缺血模型组比较，通心降脂滴丸中剂量组MDA含量显著降低（P＜0.05），高剂量组MDA含量显著降低（P＜0.05）。详见表3。

表3　对急性心肌缺血CK、SOD活力及MDA含量的影响（±s，n=10）

表3　对急性心肌缺血CK、SOD活力及MDA含量的影响（±s，n=10）

组别空白对照组缺血模型组普萘洛尔组通心降脂滴丸低剂量组中剂量组高剂量组剂量N S N S 1 8 . 5 0 0 m g / k g 0 . 2 4 2 g / k g 0 . 7 2 6 g / k g 2 . 1 8 0 g / k g C K（U / L）0 . 7 5 ± 0 . 1 4 1 . 3 4 ± 0 . 3 0 0 . 7 9 ± 0 . 1 5 1 . 1 8 ± 0 . 1 9 1 . 1 4 ± 0 . 3 1 0 . 7 9 ± 0 . 2 3 S O D（U / m L）1 1 8 . 8 7 ± 7 . 6 9 7 8 . 6 7 ± 8 . 6 8 1 1 5 . 2 6 ± 6 . 4 6 1 0 0 . 7 9 ± 7 . 8 9 1 2 1 . 4 9 ± 7 . 0 5 1 1 9 . 8 7 ± 6 . 6 7 M D A（ m o l / m L）8 . 6 8 ± 0 . 4 9 1 3 . 8 8 ± 1 . 8 7 9 . 1 9 ± 1 . 5 0 1 0 . 1 6 ± 1 . 3 4 8 . 8 7 ± 1 . 5 0 9 . 0 3 ± 0 . 6 8

3　讨论

ISO为β-受体激动剂，作用于支气管β肾上腺素受体，使支气管平滑肌松弛，增强心肌收缩力，缩短收缩期和舒张期。大剂量注射ISO可显著降低心肌血和氧的供给量，促使心肌结构及功能严重损伤，最终导致心肌细胞坏死，这种急性心肌缺血损伤，人与大鼠较相似，故这种简便易行的试验方法常用于国内外复制心肌缺血的试验动物疾病模型［6-7］。

LDH是参与糖酵解和糖异生工程中催化乳酸和丙酮酸之间氧化还原反应的重要酶类，CK通常存在于动物的心脏、肌肉及脑等组织的细胞浆和线粒体中，是一个与细胞内能量运转、肌肉收缩、三磷酸腺苷（ATP）再生有直接关系的重要激酶1和2，其可逆地催化肌酸与ATP之间的转磷酰基反应。当少量组织坏死时，LDH及CK即可大量释放入血，以升高其在血液中的活力［8-9］。

SOD是一种源于生命体的重要抗氧化酶，能消除生物体在新陈代谢过程中产生的有害物质。心肌缺血会造成体循环缺氧，导致体内氧自由基增多，促进MDA的含量增加，而SOD可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞，复原因自由基造成的细胞伤害［10］。

高剂量通心降脂滴丸对冠脉结扎引起的局部缺血心肌有保护作用［11］，但对ISO致大鼠急性心肌缺血保护作用的试验还未见报道。本试验中通过皮下注射ISO建立大鼠心肌缺血损伤模型，检测各组大鼠血清中CK，LDH，MDA的含量和心肌组织中SOD的活力，以及对ISO致心肌缺血后心电图的影响。结果显示，通心降脂滴丸可使心肌梗死大鼠抬高的心电图S-T段降低，缓解心肌梗死程度，减少心肌缺血、梗死后血清中LDH和CK的释放及心肌组织中MDA的产生，提高SOD活力，减弱心肌缺血程度，在一定程度上提高了心肌组织的耐缺血耐缺氧能力，对缺血、梗死心肌起到一定保护作用，为通心降脂滴丸临床试验及临床应用提供了充分的药效学依据。

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Protective Effect of Tongxin Jiangzhi Drops on Isoproterenol Induced Acute Myocardial Ischemia in Rats

Zhang Mengdi1，2，Lyu Xiaoli1，2，3，Bai Tuya1，2，3，Chang Fuhou1，2，3，Gao Feng2，3，Zhang Xiuhui2，3
（1.Research Center for New Drug Safety Evaluation of Inner Mongolia University，Huhehaote，Neimenggu，China010010；2.Inner Mongolia Research Center for Drug Screening，Huhehaote，Neimenggu，China010010；3.Department of Pharmacology，Medical University of Inner Mongolia，Huhehaote，Neimenggu，China010010）

ObjectiveToexploretheprotectiveeffectsof TongxinJiangzhiDropsonisoproterenol（ISO）induced acutemyocardial ischemia，providing its pharmacodynamic evidence for clinical trials and clinical application.MethodsTaking 80 healthy Wistar rats were chosen and given urethane anesthesia and supine position fixing，the determination of limb standard two-lead ECG were conducted to screen out 60 normal animals.Totally 60 healthy Wistar rats were randomly divided into control group，ischemia model group，propranolol group，Tongxin Jiangzhi Drops low dose group，middle dose group and high dose group.Acute myocardial ischemia model in rats was established by subcutaneous injection of isoproterenol.Content of creatine kinase（CK）lactate dehydrogenase（LDH）and content of malondialdehyde（MDA）in serum and activity of the super oxide dismutase（SOD）in myocardial tissue homogenate were detected. ResultsCompared with the control group，the ischemia group′s LDH，CK vitality，MDA content were significantly increased（P＜0.05）；Compared with the ischemia group，MDA content in the Tongxin Jiangzhi drops middle dose group was significantly lower（P＜0.05），SOD activity was significantly increased（P＜0.05）；LDH，CK activity and MDA of the Tongxin Jiangzhi drops high dose group were significantly decreased（P＜0.05），SOD activity was significantly increased（P＜0.05）.ConclusionTongxin Jiangzhi Drops can reduce the release of LDH and CK in serum，reduce the production of myocardial tissue MDA，increase SOD activity and decrease the degree of myocardial injury，have a protective effect on acute ischemic myocardium.

Tongxin Jiangzhi Drops；isoproterenol；acute myocardial ischemia

R285.5；R286

A

1006-4931（2016）12-0025-03

张梦迪，女，硕士研究生，研究方向为药理学，（电子信箱）zhangmd1108@163.com；常福厚，男，教授，研究方向为生化与分子药理学，本文通讯作者，（电子信箱）changfh@163.com。

（2016-01-10）