CD103+T细胞在银屑病皮损中的表达

郝志敏　栾　超　胡　煜　杨永红　刘　毅　陈　敏　崔盘根



·论著·

CD103+T细胞在银屑病皮损中的表达

郝志敏栾超胡煜杨永红刘毅陈敏崔盘根

目的：明确银屑病患者皮肤CD103+T细胞的表达及其与银屑病严重程度的关系。方法：免疫组化检测29例银屑病患者皮损和非皮损及6名健康对照皮肤中表皮及真皮CD103+T细胞的表达。结果：CD103+T细胞主要在真皮表达。银屑病患者皮损和非皮损真皮中每个高倍视野CD103+T细胞百分率分别为(26.06±11.72)%和(12.82±4.50)%(P<0.05)；健康人对照皮肤真皮内CD103+T细胞百分率为(7.47±1.30)%，明显低于银屑病非皮损区(P<0.05)。银屑病患者皮损中，CD103+T的表达与PASI值正相关(P<0.05)。 结论：真皮中CD103+T细胞可能与银屑病的发病及严重程度有关。

银屑病；CD103+T细胞；免疫组化

银屑病是一种T细胞介导的慢性炎症性皮肤病[1]。有研究认为：黏附分子，包括整合素，调节皮肤中T细胞的功能，从而影响银屑病的发生和发展[2,3]。CD103是整合素αEb7的αE亚基，具有独特的结构特点。它只表达于特定的免疫细胞，如上皮内T细胞、树突状细胞、肥大细胞、T调节细胞。并通过氨基酸148～337域，绑定到E-钙黏素上[4]。其主要作用有：控制效应T细胞和记忆T细胞、介导移植物抗宿主反应、对抗肿瘤发生、控制T调节细胞(Treg)和树突状细胞的定位和作用[5]。有证据显示，T细胞表达CD103不局限于经典的黏膜部位，而且在不同种类的上皮细胞中也表达，如肺和皮肤。近来有报道显示在感染性皮肤病和皮肤肿瘤中CD103也起作用[6,7]。关于CD103在银屑病发病机制中的作用，研究甚少，目前还未见文献报道银屑病真皮中CD103+T细胞的情况。我们通过免疫组化技术检测银屑病患者皮损、非皮损中CD103的表达，分析其与银屑病皮损严重程度关系及临床意义。

1　病例和方法

1.1病例资料临床或组织病理学诊断为进行期寻常型银屑病(斑块状)患者29例，男19例、女10例，年龄19～59岁，平均(39.2±10.0)岁，病程1周～20年，PASI评分5.2～46，平均17.1±10.6。患者近4周内未应用糖皮质激素或免疫抑制剂等系统治疗，未合并其他皮肤病及自身免疫性疾病和肿瘤等病史。经本院伦理委员会批准并征得患者知情同意，皮肤钻孔法活检取材，除皮损外同时切取皮损临近2 cm处正常皮肤作为非皮损组织(均取自背部)。健康人对照皮肤6名，取自我院外科整形手术多余的正常皮肤(取自背部)，其中男5例、女1例，年龄19～46岁，平均(32.2±8.6)岁。患者和健康对照组在性别和年龄上比较差异无统计学意义。

1.2试剂兔抗人CD103单克隆抗体均产自英国Abcam公司。磷酸盐缓冲液(PBS)由美国Gibco公司生产。枸橼酸抗原修复缓冲液、内源性过氧化氢酶抑制剂、非免疫动物血清(羊)、辣根过氧化物酶(HRP)标记抗兔IgG、苏木素和中性树胶均产自福州迈新生物技术有限公司。

1.3方法

1.3.1免疫组化在躯干皮损处按常规钻孔取直径约5 mm皮肤标本，经甲醛固定，将组织制成蜡块后连续切成5 μm，免疫组化染色按照染色试剂盒操作说明进行，所有切片均在同一质控条件下进行，设阳性和阴性对照。染色为AEC染色，阳性为棕黄色。

1.3.2结果判定CD103阳性表达定位于细胞膜和胞质，结果为棕黄色颗粒。随机选取真皮中5个显微镜高倍视野(×200)，计算阳性表达T细胞的平均百分比。

2　结果

29例银屑病患者皮损和非皮损、6名正常人对照皮肤中均可见表达CD103+T细胞。29例银屑病患者皮损中CD103+T细胞分布广泛，包括表皮和真皮浅深层，主要分布在真皮，其中26例表皮内可见阳性细胞，数量少(未统计)。非皮损中CD103+T细胞主要分布在真皮内，16例表皮内可见阳性细胞，数量极少。6名健康人对照皮肤中CD103+T细胞主要分布于真皮浅层，1例表皮内可见阳性细胞(图1)。

1a:皮损中，CD103+T细胞分布广泛，包括表皮和真皮浅深层，主要分布在真皮(HE,×100)；1b:非皮损中， CD103+T细胞主要分布在真皮浅层(HE，×100)；1c:正常对照，皮肤中CD103+T细胞少量分布于真皮浅层(HE,×100)

图1银屑病皮损CD103连续切片染色结果表皮和真皮均有CD103+T细胞，见棕黄色颗粒

银屑病患者皮损真皮每个显微镜高倍视野中CD103+T细胞平均百分率明显高于非皮损，及健康人对照皮肤(表1)。银屑病患者皮损中CD103+T细胞百分率与PASI评分呈正相关(r=0.43，P<0.05)(图2)。

表1　银屑病患者皮肤真皮CD103+T细胞百分率比较

注：a皮损组与非皮损组比较，t=7.19，P<0.05；b皮损组与健康对照组比较，t=2.84，P<0.05；c非皮损组与健康对照组比较，t=9.03，P<0.05

图2　银屑病患者皮损中CD103+T细胞百分率

3　讨论

目前普遍认同，T细胞在银屑病的发病机制中起了关键性的作用。活化的T细胞先从外周血管和淋巴管进入皮肤真皮，引起真皮炎症，然后进入表皮导致角质形成细胞的增生[8]。有研究提示，CD103分子有助于T细胞与角质形成细胞的黏附[9-11]。Teraki等[3]研究发现，银屑病患者非皮损中不表达CD103+T细胞，皮损表皮中CD103+T细胞明显高于真皮，表皮CD8+CD103+T细胞明显高于CD4+CD103+T细胞；另有研究表明，正常皮肤中，20%～30%表皮CD8+T细胞表达CD103，而在活动期银屑病患者皮损表皮中，高达50% CD8+T细胞表达CD103[9]。以上研究主要阐述了银屑病皮损表皮中CD103+T细胞的表达和功能，但目前对真皮中CD103+T细胞的研究尚不明确。在此项研究中，我们首次发现并指出，在银屑病患者的皮损中，CD103不仅表达于表皮中T细胞，更重要的是也能在真皮活化的T细胞上大量表达。本段开头我们已经讨论过，活化的T细胞是由真皮进入表皮，引起表皮增生。我们研究发现，银屑病患者皮损和非皮损真皮中CD103+T细胞的表达明显高于正常对照，提示CD103+T细胞在银屑病发病机制中起到重要作用。

银屑病作为一种慢性炎症性皮肤病，病程长，易反复，但其机制目前尚不清楚。炎症阶段高TGF-β(由成纤维细胞、肥大细胞、角质细胞分泌)或维A酸诱导下，T细胞与抗原相互作用，表达CD103[3，12]。CD103+T细胞在慢性炎症状态组织内高表达(如肿瘤、感染及一些自身免疫性疾病)，其主要功能可能是作为抵御肿瘤和炎症的第一线[6,13,14]。本研究发现银屑病皮损真皮中CD103+T细胞百分比明显高于非皮损，再次证实了CD103+T细胞的数量与银屑病皮损的形成有关。有趣的是，在我们另一篇已发表的相关研究中，我们发现在银屑病患者皮损处，皮损消退前后CD103+CD69+T细胞数量无明显统计学差异[15]，提示CD103可能与银屑病的反复发作相关。

Eysteinsdottir等[11]曾研究发现银屑病患者外周血中CD103+T细胞数目与PASI评分密切相关，但他们未研究皮损中CD103+T细胞的情况。在银屑病活动期，大量表达IL-17A和IL-22的CD103+T细胞(包括CD4+T，CD8+T)迁移入皮损真皮和表皮。IL-17A具有募集炎症细胞作用，而IL-22参与角质细胞激活以及棘细胞层增厚[9]。我们研究发现银屑病皮损真皮中CD103+T细胞与PASI相关，和病情严重程度一致。进一步证实了CD103+T细胞参与银屑病病情发展。并提示CD103+T细胞可以作为评估银屑病病情严重程度的实验室指标。

综上所述，银屑病患者皮损真皮中CD103+T细胞表达明显高于非皮损及健康皮肤，并与银屑病病情严重程度相关，真皮中的CD103+T细胞在银屑病发病机制中起一定作用。由于免疫组化法同时检测3种表面标记存在困难，我们尚未区别CD103+T细胞属于CD4+T细胞还是CD8+T细胞亚群。在Pauls等[10]研究中，CD8+CD103+T细胞主要表达于银屑病皮损表皮中，CD4+CD103+T细胞主要表达于真皮中。而CD4+CD103+T细胞属于记忆T调节细胞，而且他们的调节能力与CD103 T细胞表达水平相关[16]，有文献支持这一细胞与某些炎症疾病慢性化有关[17]。推测真皮中CD103+T细胞主要为CD4+T细胞。但其功能、活化机制以及调节机制还有待进一步研究。

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(收稿：2015-04-26修回：2015-10-29)

Expression of CD103+T cells in psoriatic lesions

HAOZhimin,LUANChao,HUYu,YANGYonghong,LIUYi,CHENMin,CUIPangen.

ChineseAcademyofMedicalSciencesandPekingUnionMedicalCollege,Nanjing210042,China

CHENMin,E-mail:drchenmin@126.comCUIPangenE-mail:pangencui@126.com

Objective: To detect the level of CD103+T lymphocytes in psoriatic lesions and to determine the relationship with the severity of psoriasis. Methods: CD103+T lymphocytes in dermis and epidermis of the lesions and non-lesional skin from 29 patients with psoriasis and skin from 6 healthy controls were detected by immunohistochemical staining. Results: CD103+T lymphocytes mainly distributed in dermis. The mean percentage of CD103+T lymphocytes in lesions, non-lesional skin and normal skin was (26.06±11.72)%, (12.82±4.50)% and (7.47±1.30)% and there were significant differences among the groups (P<0.05). There was a positive correlation between the level of CD103+T lymphocytes and the PASI score (P<0.05). Conclusion: CD103+T lymphocytes in the dermis may associate with the occurrence and severity of psoriasis.

psoriasis; CD103+T lymphocytes; immunohistochemical staining

卫生公益性行业科研专项经费项目(编号：201002016)

中国医学科学院皮肤病医院，江苏省皮肤病与性病分子生物学重点实验室，南京，210042

陈敏，E-mail:drchenmin@126.com

崔盘根，E-mail:pangencui@126.com