乳酸链球菌素对大肠杆菌所致腹泻小鼠的脑-肠轴中单胺类神经递质的影响

贾知锋，王纯洁*，敖日格乐，高瑞娟，巴森胡

(1.内蒙古农业大学兽医学院，呼和浩特 010018；2.内蒙古农业大学动物科学学院，呼和浩特 010018)



乳酸链球菌素对大肠杆菌所致腹泻小鼠的脑-肠轴中单胺类神经递质的影响

贾知锋1，王纯洁1*，敖日格乐2，高瑞娟1，巴森胡1

(1.内蒙古农业大学兽医学院，呼和浩特 010018；2.内蒙古农业大学动物科学学院，呼和浩特 010018)

旨在研究乳酸链球菌素(nisin)对应激性腹泻导致的肠道菌群与脑-肠轴功能之间的相关性，进一步揭示nisin对单胺类神经递质的调控机制。通过注入3种血清型大肠杆菌混合菌悬液(1∶1，1.0×109CFU·mL-1)制备小鼠腹泻模型，并用nisin和蒙药复方进行治疗；在造模后0、 72 h，ELISA检测5-HT、DA和NE水平，以及平板涂布法将盲肠内容物分别10倍稀释成8个梯度涂布于相应培养基，计算菌落数。结果表明，(1)在脑组织中，造模后72 h时nisin、传统蒙药复方、成分复方、抗生素组中5-HT分别升高到0 h时的108.60%、124.04%、117.47%、115.57%；并且使十二指肠中5-HT分别增加到0 h时的289.18%、200.30%、271.59%，nisin组显著高于其他各组(P<0.05)；造模后除空肠外，72 h与0 h相比，nisin和传统蒙药复方对小鼠血清、脑、十二指肠、回肠以及结肠中5-HT都有显著提升作用(P<0.05)；(2)造模后72 h时，nisin、蒙药复方、成分复方及抗生素可提高正常小鼠脑、肠中多巴胺，并以回肠中增加最多，且差异显著(P<0.05)；(3)在脑组织中0 h与72 h时NE的浓度，传统蒙药复方、nisin分别升高到115.62%和106.17%，且均与空白、阴性对照组相比差异显著(P<0.05)；在十二指肠、回肠中，nisin组72 h比0 h升高了170.97%、121.74%，尤其十二指肠明显高于其他各组且差异显著(P<0.05)；(4)nisin、有效成分复方和传统蒙药复方可显著提高感染E.coli小鼠肠道内有益菌乳酸菌和双歧杆菌数量，显著降低有害菌肠杆菌和肠球菌数量(P<0.05)。可见，nisin和蒙药复方均显著提高细菌感染小鼠血液、脑和各肠段中5-HT、NE含量，尤以十二指肠突出，nisin和传统蒙药能打破肠道中5-HT的平衡，并伴随着肠道各段、血液中5-HT的升高脑组织中5-HT含量也增加。

nisin；传统蒙药复方；神经递质；应激性腹泻；肠道菌群；脑-肠轴

肠道菌群与人类的行为、情绪以及疾病(如抑郁症、阿尔茨海默病、帕金森症等)有着奇妙关联，通过摄入一些益生菌可在一定程度上改善情绪，从而改变肠道微生物环境达到治疗部分心理疾病作用[1]。人体肠道中定植了大量的细菌，可达到人体基因总数的150倍，另外，肠黏膜生物屏障是一个由肠道内的有益菌和宿主的三维空间结构共同构成的微生态系统，当其被破坏时，就会导致致病菌(如：大肠杆菌等)的入侵和定植[2]。研究发现，胃肠道不仅受大脑的调控，而且还反作用于大脑，并且肠道菌群还参与人体诸多生理功能和疾病等相关活动[3]。随着对腹泻型IBS患者血浆中5-HT研究的不断深入，肠嗜铬细胞释放5-HT逐渐增加[4]。同时，B.Isgar等[5]认为，5-羟色胺(5-HT)系统在功能性胃肠道疾病中扮演着重要的角色，5-HT异常可影响胃肠道动力以及功能性异常和内脏高敏感性。另一方面，肠道菌群的代谢产物短链脂肪酸可显著增加5-HT分泌，并且使结肠收缩增强，肠道动力增加[6]。目前，在临床上对细菌性腹泻普遍采用抗生素治疗，然而长期滥用抗生素产生的残留、耐药性和降低家畜免疫力等问题备受关注[7]。因此，人们开始寻求一种新型、环保并用于替代抗生素的新产品。而乳酸链球菌素(nisin)属乳酸乳球菌乳酸亚种，通过发酵经核糖体合成机制产生的一种多肽抗菌类物质、蛋白质或蛋白质复合物，其作为一种天然杀菌物质具有高效无毒副作用、能耐高温、无残留、不产生抗药性等特点[7]。在1988年nisin首次用于食品添加剂，并得到FDA的认可，从而促进了人们对细菌素这类绿色环保型产品在其畜牧业的广泛应用[8]。据研究，nisin的肽聚糖前体分子在结合脂质Ⅱ时，nisin嵌入到细胞膜中，导致膜快速去极化和细菌细胞死亡，nisin的抗菌活性通过不同的结构域活性的双重作用来抑制和干扰细胞壁的生物合成[9]。据A.M.Brand等[10]研究表明，使用单剂量的乳酸链球菌素可以抑制小鼠腹腔内葡萄球菌(1×108CFU·mL-1)的代谢活动，其抑菌机制是通过蛋白水解酶降解乳酸链球菌素在小鼠腹腔内起到抗菌作用，并作用于细菌细胞壁引起的免疫反应。本研究通过大肠杆菌建立小鼠腹泻模型，并探索nisin对细菌性腹泻小鼠血清、脑-肠中5-HT、DA、NE的影响和机体应激时相关单胺类神经递质的相关性以及机体内益生菌对致病菌的定植拮抗作用。为今后用nisin调节脑中5-HT、DA、NE来治疗与之相关的脑神经疾病提供理论依据。

1　材料与方法

1.1试验材料

1.1.1试验动物SPF级昆明小鼠，雌雄各半，体重20 g±2 g(内蒙医科大学实验动物中心)。

1.1.2受试菌3种血清型牛源致病性大肠杆菌分别为O14、O2、O8，使用前将斜面保存的3种血清型Escherichiacoli分别接种于肉汤中，37 ℃培养至对数期18～24 h，调整混合指示菌为1×109CFU· mL-1；盐酸环丙沙星(广州白云山制药股份有限公司)；ELISA试剂盒(购自北京诚林生物科技有限公司)。细菌素(nisin)配成0.1 mg·mL-1[6]，由内蒙古农业大学牛生产学实验室提取保存。成分复方制备：茜草素0.34 mg/20 g、大黄素0.8 mg/20 g、大黄酸4.8 mg/20 g等(西安开来生物工程有限公司)等剂量[11]，均由内蒙古农业大学牛生产学实验室提供。蒙药复方的制备：称取茜草、草乌叶、黑云香、多叶棘豆等，制备方法参见文献[12]，蒙药复方药物均购自内蒙古呼和浩特市京远大药房。

1.2试验仪器

酶标仪(Synergy HT，上海迭戈生物科技有限公司)；Multifuge XIR离心机(美国Thermo Heraeus公司)等。

1.3试验方法

1.3.1试验分组给与给药方案每组10只小鼠，详细处理见表1。

表1Nisin及其有效成分复方对小鼠腹泻病模型的治疗方案(n=10)

Table 1Effect of nisin and Mongolian Compound of active efficiency ingredient for the calf disease model mice (n=10)

组别Groups给药方案Administrationgroups乳酸链球菌素组Nisingroup灌服0.1mg·mL-1,连续7d,2次/d,每次0.3mL,第5天腹腔注射80%MLD的混合菌悬液0.3mL·只-1,继续给药3d蒙药有效成分复方Activeingredientcompound灌服“巴布-7”有效成分复方0.5g·kg-1,同上传统蒙药复方Mongolianmedicinecompound灌服传统蒙药复方0.5g·kg-1,同上抗生素组Antibioticgroup灌服环丙沙星0.13g·kg-1,如上注菌阴性对照组Controlgroup灌服生理盐水20g·kg-1,同上空白对照Blankcontrolgroup不做任何处理

以上复方粉剂及环丙沙星每次配合蒸馏水灌服，单只动物单次所用药量需用0.3 mL蒸馏水配合灌服

Above compound powder and ciprofloxacin each with distilled water gavage，in a single animal single used single dosage required 0.3 mL of distilled water with gavage

1.3.2nisin对小鼠脑-肠中5-HT、DA及NE神经递质含量的检测给药方案同表1，于灌药第5、7天，分别作为0 h和72 h，将分别取其小鼠脑、十二指肠、空肠、回肠、结肠制备组织匀浆，收集上清液，分离血清，-20 ℃保存，按照5-羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)及去甲肾上腺素(NE)ELISA试剂盒说明操作(购于上海宝曼生物科技有限公司)。

1.3.3nisin对小鼠盲肠微生物影响给药方案同表1，连续给药7 d，末次给药2 h后，将每组小鼠颈部脱臼之后(在无菌操作台上)，对小鼠消毒，打开腹腔。接着取出全部盲肠，置于无菌瓶中。将盲肠内容物分别10倍稀释8个梯度，即为原液的101～108倍，分别吸取 50 μL涂布于伊红美蓝琼脂培养基(EMB)、乳酸细菌培养基(MRS)、双歧杆菌培养基(BBL)、肠球菌选择性培养基(EF)上，按不同的培养所需要的条件，分别检测E.coli、乳酸杆菌、双歧杆菌、肠球菌数量，每个稀释度做三个重复，待菌落长出，选适合的稀释度计数菌落数(同稀释度平均菌落数为X)，菌群数量用1 g CFU·g-1盲肠内容物表示，计算公式：菌落数量(1 g CFU·g-1)=lg[X/0.5×稀释倍数/盲肠内容物质量(g)][13]。

1.4数据统计

2　结　果

2.1动物腹泻观察

观察小鼠模型0 h 时，各试验组中小鼠无明显的临床症状变化，采食和饮水均正常。对照组小鼠注菌后其临床症状主要表现为腹泻、被毛耸立、精神沉郁、眯眼、嗜睡、行为迟钝、食欲不振，有的小鼠出现死亡，解剖死亡小鼠后发现其肠管腔内充满黄色不明物，然后在EMB和甘露醇平板上划线，经革兰染色、形态观察和生化鉴定菌符合E.coli菌株[14]。然而，72 h时，阴性对照组表现为，体重下降，且出现死亡小鼠增加，昏睡、呼吸急促、厌食。而nisin、有效成分复方组小鼠症状逐渐减轻。

2.2血清及组织5-HT、DA、NE含量的变化

小鼠血清及组织5-HT、DA、NE含量的变化见表2 。

2.2.1nisin对小鼠脑-肠中5-HT的影响由表2可知，小鼠腹腔注射0.3 mL 1.0×109CFU·mL-1混合大肠杆菌后，在血清中72 h时，成分复方、nisin、蒙药复方及抗生组中5-HT的量明显增加，且均显著高于0 h(P<0.05)，小鼠血清中5-HT浓度，同时间点各组间比较：0 h时，蒙药复方和抗生素组显著高、成分复方组显著低于阴性对照组(P<0.05)；72 h时，nisin组和其他各用药组显著高于阴性对照组(P<0.05)，而这4个用药组间无显著差异(P>0.05)。十二指肠中，72 h时nisin组、蒙药成分复方及蒙药复方组的5-HT分别增加到0 h时的289.18%、271.59%、200.30%，nisin组与其他各组相比差异显著(P<0.05)，nisin和蒙药复方对于细菌感染小鼠的脑和各肠段中的5-HT的含量显著提高，尤其nisin对十二指肠中5-HT的提高突出(P<0.05)；空肠中，72 h时蒙药成分复方、nisin组使5-HT分别增加到0 h时的249.54%、134.34%；回肠中蒙药有效成分复方对5-HT的含量增加到0 h时的204.80%；结肠中，蒙药有效成分复方对5-HT的含量增加到0 h时的149.31%，而nisin对结肠中5-HT增加到0 h时的161.43%，两者之间nisin优于蒙药有效成分复方组，且nisin组之间差异显著(P<0.05)。

表2nisin及其蒙药有效成分复方对小鼠腹泻病血清中5-HT、DA、NE的影响

Table 2 Effect of nisin and Mongolian medicine active ingredient compounds on the 5-HT，DA，NE in mice with diarrhea ng·L-1

(转下页 Carried forward)

表2(续)Continued

大写字母不同表示同列(0 h vs 72 h)间差异显著(P<0.05)，小写字母不同表示同行差异显著(P<0.05)

Different capital letters means significant difference within the same column between 0 h and 72 h (P<0.05)，however different lowercase capital letters mean significant within the same peer

2.2.2nisin对小鼠脑-肠中NE的影响由表2知，72 h时，小鼠血清中NE浓度，不同时间点各组之间比较传统蒙药复方、nisin、抗生素及蒙药有效成分复方组分别提高到0 h时的129.17%、122.86%、110.23%、105.95%，且除蒙药有效成分复方组外，其他各用药组0 h与72 h之间差异显著(P<0.05)。由0 h到72 h，在十二指肠中NE浓度，传统蒙药复方、nisin、蒙药有效成分复方及抗生素243.59%、170.97%、114.86%、97.83%；且0 h时，蒙药有效成分复方与其他各用药组差异显著(P<0.05)，nisin组与抗生素组相当；然而，72 h时，nisin组明显高于其他各用药组且差异显著(P<0.05)；在空肠中72 h时，nisin和传统蒙药复方中NE的浓度明显降低并低于其他各用药组；在回肠中，传统蒙药复方、nisin、蒙药有效成分复方及抗生素中NE的浓度分别升高了130.88%、121.74%、102.47%、92.59%，传统蒙药复方和nisin组仍然比对照组高26.77%和17.63%；在72 h结肠中，nisin组对NE的浓度的影响明显，72 h时与传统蒙药复方相当，且均与其他组差异显著(P<0.05)；在脑组织中72 h时，传统蒙药复方、nisin分别升高到129.17%和122.86%，与对照相比升高了31.87%和25.56%，且均与对照组差异显著(P<0.05)。

2.2.3nisin对小鼠脑-肠中DA的影响由表2知，小鼠血清中成分复方组、蒙药复方、nisin及抗生素对DA增加量，72 h时，分别为0 h时的260.34%、241.84%、234.42%、239.08%，且与0 h差异显著(P<0.05)，然而各用药组间差异不显著(P>0.05)。由0 h到72 h，各用药组显著提高大肠杆菌感染小鼠脑组织中多巴胺含量，且蒙药复方组显著低于抗生素组(P<0.05)，在72 h时，蒙药复方组、抗生素组、nisin及成分复方提高小鼠十二指肠中多巴胺的含量分别为965.67%、700.26%、692.11%、490.67%，且与阴性组相比差异显著(P<0.05)；nisin对回肠和空肠中多巴胺提升了4864%和484.40%，而抗生素也提升了139.22%和131.57%；蒙药复方、成分复方、nisin及抗生素可提高正常小鼠脑中多巴胺，并以回肠中增加最多(P<0.05)。

2.3蒙药复方及其有效成分复方对小鼠盲肠微生物影响

由表3可知，小鼠盲肠中大肠杆菌数量，阴性对照组显著高于空白对照组(P<0.05)，nisin组、传统蒙药复方组、蒙药有效成分复方组显著低于阴性对照组(P<0.05)，其三者组之间差异不显著(P>0.05)、抗生素组显著低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05)，但其余组与空白对照组差异不显著(P>0.05)；肠球菌数量，各用药组和空白对照组显著低于生理盐水组(P<0.05)，蒙药有效成分复方组、传统蒙药复方组之间均差异不显著(P>0.05)，nisin组显著高于抗生素组和蒙药有效成分复方组(P<0.05)，但与传统蒙药复方组差异不显著(P>0.05)；乳酸杆菌数量，各用药组和空白对照组均显著高于生理盐水组(P<0.05)，蒙药有效成分复方组显著高于传统蒙药复方组(P<0.05)，但显著低于抗生素组(P<0.05)；双歧杆菌数量，传统蒙药复方组、nisin组显著低于抗生素组、蒙药有效成分复方组和空白对照组显著(P<0.05)，但显著高于生理盐水组(P<0.05)，蒙药有效成分复方组显著高于传统蒙药复方组、nisin组和生理盐水组(P<0.05)，但显著低于抗生素照组和空白对照组(P<0.05)，抗生素组显著高于传统蒙药复方组、nisin组、蒙药有效成分复方组和生理盐水组(P<0.05)，但显著低于空白对照组(P<0.05)。

表3蒙药复方及其有效成分复方对小鼠盲肠微生物的影响

Table 3Effect of Mongolian compound and its active ingredients on caecal microflora in mice

组别Group大肠杆菌E.coli肠球菌Enterococcus乳酸杆菌Lactobacillus双歧杆菌Bifidobacte空白对照组Blankcontrolgroup6.95±0.15b6.62±0.30b6.26±0.15bc11.08±0.44a阴性对照组Negativecontrolgroup8.59±0.53a7.17±0.06a5.94±0.07d8.83±0.08e抗生素组Antibioticgroup6.49±0.08c5.49±0.16d6.82±0.11a10.47±0.25b蒙药有效成分复方Activeingredientcompound6.66±0.21bc5.66±0.24d6.39±0.14b9.73±0.10c传统蒙药复方Mongolianmedicinecompound6.80±0.08bc5.73±0.11cd6.15±0.18c9.25±0.09d乳酸链球菌素Nisingroup6.57±0.11bc5.83±0.12bc6.35±0.06bc9.21±0.07d

肩标不同字母表示差异显著(P<0.05)，相同字母表示差异无显著(P>0.05)

Values with different letter superscripts mean significant difference(P<0.05)，while with the same letter superscripts mean no significant difference(P>0.05)

3　讨　论

据研究表明，5-HT可使大多数交感节前神经元兴奋，然而使副交感节前神经元抑制；损坏动物的中缝核或使用药物阻止5-HT的合成，都可使脑组织中5-HT的含量明显降低，从而引起动物睡眠障碍和吗啡的阵痛作用减弱乃至消失[15]。用外界电刺激大鼠的中缝核能导致大鼠体表温度升高，脑内5-HT更新加速，并且用来治疗抑郁症患者能够调节亢进的肾上腺HPA轴功能，这些现象解释了脑组织中5-HT与睡眠、阵痛及体表温度的调节有着紧密的关系，同时，5-HT能改变垂体的内分泌机制，而破坏5-羟色胺使神经元出现幻觉，因此，5-HT可能和精神疾病或者精神活动存在一定的相关性[16]。B.Isgar等[5]认为，炎症性肠病的发病机制是由于肠功能性因素，5-HT系统在功能性胃肠道疾病中扮演着重要的角色，5-HT异常可影响胃肠道动力以及功能性异常和内脏高敏感性。研究表明，应激腹泻可以兴奋肠道交感神经系统，刺激NE的释放，从而作用于主要合成5-HT的细胞肠嗜铬细胞，在综合征便秘型结肠黏膜中5-羟色胺的含量高于健康人和腹泻型肠应激综合征患者[17]。通过本试验，传统蒙药复方、蒙药有效成分复方、抗生组及nisin对脑组织中5-HT分别增加了124.04%、117.47%、115.57%、108.60%，且蒙药复方也能打破肠道中5-HT的平衡，然而随着脑组织中5-HT的升高伴随着肠道各段中5-HT的含量也增加，蒙药复方对其作用有可能是作用于肠道，从而影响脑组织5-HT的含量，然而这两者之间的生物学意义还尚不清楚。

试验中，蒙药复方能提高正常小鼠血液、十二指肠中的5-HT的含量，细菌素能提高正常小鼠十二指肠、结肠中的5-HT的含量、却降低空肠中含量，对其脑组织中的5-HT的含量无显著影响；但是，nisin和蒙药复方对于细菌感染小鼠的血液、脑和各肠段中的5-HT的含量却有提高作用，尤其对十二指肠中5-HT的提高明显。与阴性对照组相比，蒙药复方能打破肠道中5-HT的平衡，并且随着血液、脑组织中5-HT的升高伴随着肠道各段中5-HT的含量也增加。本试验发现，nisin组能提高十二指肠中NE的浓度且均与其他用药组差异显著，然而nisin组对空肠无提高作用；在72 h回肠中相对于对照组提高了17.63%；在72 h结肠中(除传统蒙药复方外)nisin组均高于其他组且差异显著；在脑组织中72 h时，传统蒙药复方、nisin分别升高到129.17%和122.86%，与对照相比升高了31.87%和25.56%，且均与对照组差异显著。

多巴胺(DA)是去甲肾上腺素的前体，其主要作用于多巴胺受体。多巴胺可以提高感染性休克患者心率失常的概率[7]。M.Argalious等[18]认为，多巴胺是房颤发生的独立因素。N.Rasheed等[19]认为，多巴胺能系统失调与抑郁症有着密切地联系，多巴胺降低可改善小鼠绝望但是不影响其正常探究活动。研究发现，脑内灌注多巴胺D1受体能降低前额叶细胞外的谷氨酸及γ-氨基丁酸的含量，若在刺激前给予D1受体拮抗剂可提高抗抑郁药的抗抑作用。 本试验表明，蒙药复方组和成分复方提高大肠杆菌感染小鼠十二指肠中多巴胺的含量分别为965.67%和490.67%，并均高于抗生素组，且与阴对照性组相比差异显著；蒙药复方对结肠多巴胺提升了146.84%，而抗生素也提升了142.54%，说明在多巴胺的效果更优于抗生素组。蒙药复方、成分复方、乳酸链球菌素及抗生素可提高正常小鼠血液、脑中多巴胺，却可降低肠中的含量，并以回肠中降低最多，可达到显著，多巴胺有可能由回肠经血液到达脑。

肠道菌群系指动物或人肠道内存在的大量细菌，其主要包括厚壁菌、拟杆菌、放线菌以及变形杆菌组成，正常的菌群结构是调节人体代谢、泌尿和免疫等功能，菌群紊乱则导致多种疾病的发生，如人肠应激综合征(IBS)、小鼠腹泻病、糖尿病等[20]。人肠综合征患者接受益生菌和抗菌药物的治疗后可以缓解内脏敏感性，改善肠道菌群关系。据A.Agrawal等[21]报道，便秘型IBS患者接受益生菌治疗后，可促进5-HT分泌增多，增强和加快结肠的收缩和传输速度，改善肠道动力，也是保障机体健康的必要条件。大肠杆菌和肠球菌是肠道的条件致病菌，双歧杆菌、乳酸杆菌是肠道的有益菌，它们数量的变化是肠道健康的重要指标[22]。目前，研究发现，自闭症儿童的肠道中粪球菌、普雷沃菌等菌群结构发生相应的改变[23]。试验表明：对小鼠腹腔注射致病性E.coli后可导致肠道菌群失调，采用有效成分复方、传统蒙药复方和细菌素进行治疗后可显著改善肠道菌群结构。其中有效成分复方可显著提高感染E.coli小鼠肠道内有益菌(即乳酸菌和双歧杆菌)数量，显著降低有害菌(肠杆菌和肠球菌)数量。

Nisin、有效成分复方、传统蒙药复方显著提高脑、肠、血清中5-HT、DA、NE，有可能有利于改善抑郁症时NE、5-HT的减少，改善老年性痴呆(SD)患者认知障碍和血浆单胺类神经递质去甲肾上腺素、多巴胺和5-HT水平下降，改善帕金森病时多巴胺合成减少[24]。

4　结　论

Nisin和蒙药复方均显著提高E.coli感染小鼠血液、脑和各肠段中5-HT、DA、NE含量，尤以十二指肠突出；同时还增加盲肠有益菌数量、减少致病性有害菌数量。

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(编辑白永平)

Effect of Nisin on Monoamine Neurotransmitters of Mice with Diarrhea Induced byEscherichiacoli

JIA Zhi-feng1，WANG Chun-jie1*，AO-Ri-ge-le1，GAO Rui-juan1，BA Sen-hu1

(1.CollegeofVeterinaryMedicine，InnerMongoliaAgriculturalUniversity，Hohhot010018，China；2.Collegeofanimalscience，InnerMongoliaAgriculturalUniversity，Hohhot010018，China)

The paper aims to study the correlation betweenStreptococcusthermophilusand intestinal flora and brain-gut axis function during diarrhea irritable，and further reveals the regulation mechanism of nisin on monoamine neurotransmitters.By injecting three serotypes ofEscherichiacolimixed bacterium suspension liquid (1∶1，1.0×109CFU· mL-1),the diarrhea model of mice was prepared，and nisin and Mongolian medicine were used for treatment.Tissus samples were collected at 0 h，72 h post modeling and ELISA kits were used to detect the levels of 5-HT，DA and NE，as well as the caecum contents plate were diluted 10 fold into eight gradient coating on the responging medium to calculate bacterial colony number by using plat coating method.The results showed that：(1)In brain tissue,5-HT level at 72 h post modeling in the nisin，traditional Mongolian medicine(TMM) compound，TMM ingredients，and antibiotic groups were increased to 108.60%，124.04%，117.47%，115.57% of 0 h， respectively; and the duodenal 5-HT in the nisin， TMM compound and TMM ingredients groups at 72 h post modeling were increased to 289.18%，200.30%，271.59% of 0 h,respectively，nisin group was significantly higher than other groups (P<0.05).After modeling，in addition to the jejunum，compared 72 h’s with 0 h’s，nisin and TMM compound have signicantly improved 5-HT level (P<0.05) in mice serum，brain，duodenum，ileum and colon.(2) After 72 h，nisin，TMM compound，TMM ingredients and antibiotic can improve the dopamine in the intestine and brain of normal mice,and that in the ileum increased the most，and the difference was significant (P<0.05).(3)In brain tissue at 0 h and 72 h, NE concentration increased to 115.62% and 106.17%，respectively under the react of TMM compound and nisin,and which also have significant difference comparing with blank control，and the negative control group (P<0.05)；in the duodenum and ileum，the EN concentration of nisin group at by 72 h were increased by 170.97%，121.74%，especially that in the duodenum was higher than other groups and the difference was significant (P<0.05).(4) Nisin，TMM effective ingredients and TMM compound can significantly increase the number of intestinal probioticLactobacillusandBifidobacteriuminE.coliinfected mice，and significantly reduce the number of harmful bacteriaEnterobacterandEnterococcus(P<0.05).In addition，nisin and TMM compound were significantly increased bacterial infections in mice blood，brain and various intestinal segments in 5-HT，NE content，especially in the duodenum，nisin and traditional Mongolian medicine can break the balance of intestinal 5-HT，and accompanied by increase of 5-HT in the intestine and blood,the brain 5-HT content also increased.

nisin；Mongolian medicine；neurotransmitter；stress-diarrhea；intestinal flora

10.11843/j.issn.0366-6964.2016.09.023

2016-05-06

国家自然科学基金项目(31260590)，国家科技支撑项目(2015BAD29B06)

贾知锋(1989-)，男，四川省巴中市人，硕士研究生，主要从事蒙兽药的抗炎免疫，Tel:18847161462，E-mail: sicau2016_1@163.com

王纯洁，教授，博士生导师，主要从事动物生理调控机制研究，E-mail:chunjiewang200@sohu.com

S852

A

0366-6964(2016)09-1931-09