宫颈鳞癌中RECK与MMP-9的表达及意义

张运彩，赵　锦，李胜泽



·临床医学·

宫颈鳞癌中RECK与MMP-9的表达及意义

张运彩1，赵锦1，李胜泽2

目的：探讨宫颈鳞癌中逆转录富含半胱氨酸蛋白(RECK)和基质金属蛋白酶(MMP)-9的表达及意义。方法：应用免疫组织化学法，检测20例正常子宫颈组织及70例子宫颈鳞状细胞癌中RECK和MMP-9的表达。结果：RECK蛋白在正常宫颈组织、子宫颈鳞癌组织中表达的阳性率分别为95.00%和31.43%，差异有统计学意义(P<0.01)；有淋巴转移组的阳性率较无淋巴转移组明显降低(P<0.01)。MMP-9在正常宫颈组织、子宫颈鳞癌组织中表达的阳性率分别为25.00%和80.00%，差异亦有统计学意义(P<0.01)；MMP-9表达在宫颈鳞癌有淋巴转移组的阳性率较无淋巴转移组明显升高(P<0.01)。RECK及MMP-9在宫颈鳞癌中的表达呈负相关关系(P<0.01)。结论：RECK在宫颈鳞癌中表达减少或缺失可能是通过上调MMP-9的表达从而促进宫颈鳞癌的侵袭与转移,RECK和MMP-9与宫颈鳞癌的浸润转移密切相关。

宫颈肿瘤；逆转录富含半胱氨酸蛋白；基质金属蛋白酶-9

在世界范围内，宫颈癌是女性第4位常见的恶性肿瘤。2012年，全球全年发生宫颈癌528 000例，年死亡数为266 000例。85%宫颈癌发生于发展中国家，并且在这些国家宫颈癌居癌症死因的首位[1]。逆转录富含半胱氨酸蛋白(RECK)是一种可以调节基质金属蛋白酶和抑制血管生成的膜固定糖蛋白，它可以在转录水平抑制基质金属蛋白酶的表达与活性，RECK基因的表达量降低或者缺失与肿瘤的浸润及血管生成相关性十分密切。研究[2]表明，多种恶性肿瘤组织侵袭转移与RECK基因瘤表达缺失或者其表达含量与呈负相关。经典分子基质金属蛋白酶(MMPs)是细胞外基质的一类水解酶，是具有二价锌离子的内源性肽酶，可降解胶原蛋白、弹性蛋白、糖蛋白以及蛋白多糖等，MMP-9可以降低和摧毁恶性肿瘤细胞外基质和基膜，使肿瘤细胞向周围组织浸润时通过基膜的缺损处。本研究通过EliVision plus免疫组织化学(免疫组化)技术检测RECK及MMP-9在宫颈鳞癌组织中的表达情况，进一步研究其与宫颈鳞癌发生、发展、浸润转移的关系，为宫颈鳞癌患者临床诊断及治疗提供新的方向。

1　资料与方法

1.1标本来源收集2012年5月至2015年8月蚌埠市第一人民医院、蚌埠医学院第一附属医院宫颈鳞癌术后组织存档蜡块标本70例，正常宫颈组织标本20例。宫颈鳞癌均经病理学检查证实，年龄35～57岁。患者术前均未行放疗及化疗。按组织学分级：高分化20例，中分化 20例，低分化30例。临床分期按FIGO2009年标准其中Ⅰ期46例，Ⅱ期24例。对照组20例为同期因子宫肌瘤或子宫脱垂行全子宫切除术的正常宫颈组织，年龄46～74岁。

1.2方法所有标本经10%甲醛液固定，常规脱水。EliVision plus法染色步骤：收集标本—标本固定—玻片处理—脱蜡—热修复—自然冷却—过氧化氢室温避光—滴加山羊血清—滴加兔抗人RECK单克隆抗体—滴加Ⅱ抗、Ⅲ抗—DAB显色—中性树胶固定。MMP-9同法。

1.3结果2组均由2位病理学专家采用双盲法对染色结果进行评定，结果不一致时协商统一判定最终结果。结果判断[3]：细胞质出现黄色或棕黄色颗粒为阳性细胞。RECK正常染色部位位于细胞相邻的侧面即细胞与细胞的连接处；MMP-9抗原阳性为棕黄色颗粒，主要位于正常复层鳞状上皮及肿瘤细胞的细胞质上。对切片上肿瘤细胞进行评定，随机观察10个高倍镜视野，选取染色较为集中的区域进行结果判定，平均每高倍镜视野的阳性染色细胞数按百分比记数，百分比为0%、<50%、50%～75%、>75%者分别划归为-、1+、2+、3+共4组。弱阳性表达组为-和1+，强阳性表达组2+和3+。

1.4统计学方法采用χ2检验和等级相关分析。

2　结果

2.1宫颈鳞癌组织中RECK表达情况比较RECK表达大部分位于细胞质中，多呈散在片状、灶状分布，且不均匀分布，为淡黄色至棕褐色不等颗粒(见图1)，其在正常宫颈组织中的表达率为95.00%，而在宫颈鳞癌中的表达率为31.43%，差异有统计学意义(P<0.01)(见表1)。RECK表达在宫颈鳞癌患者的年龄、临床分期及肿瘤大小间差异均无统计学意义(P>0.05)，而肿瘤组织高分化组高于低分化组(P<0.05)，无淋巴结转移组明显高于有淋巴结转移组(P<0.01)(见表2)。

2.2宫颈鳞癌组织中MMP-9表达情况比较MMP-9表达也主要位于细胞质中，多呈散在片状或灶状分布，且分布不均匀，为淡黄色至棕褐色不等颗粒(见图2)，其在宫颈鳞癌中的表达率为80.00%，而在正常宫颈组织中表达率为25.00%，差异有统计学意义(P<0.01)(见表1)。宫颈鳞癌组织中MMP-9表达在患者年龄、临床分期及肿瘤大小间差异均无统计学意义(P>0.05)，而肿瘤淋巴结转移组的MMP-9阳性表达率明显高于无淋巴结转移期组(P<0.01)，肿瘤高分化组的MMP-9阳性表达率明显低于低分化组(P<0.01)(见表3)。

3　讨论

RECK基因是一种MMPs抑制剂，能在转录后水平抑制至少3种MMPs，即MMP-2、MMP-9及MTI-MMP。其中MMP-9是在肿瘤侵袭转移过程中发生作用的主要蛋白水解酶，MMPs降解细胞外基质通过周围血管、调节和释放血管活性因子，能促进肿瘤血管生成。研究[4-5]发现，RECK在癌组织中表达较非癌组织显著降低，MMP-9表达则相反，提示RECK基因通过抑制MMP-9发挥抑癌作用[6-9]。本研究结果显示，RECK在正常宫颈表达明显高于宫颈鳞癌组织中表达，MMP-9在宫颈鳞癌组织中表达明显高于正常宫颈组织(P<0.01)。进一步研究发现,宫颈鳞癌组织分化越差，RECK表达也越低，在无淋巴结转移组RECK明显高于有淋巴结转移组。上述提示RECK表达降低或缺失可能促进宫颈鳞癌的发展、浸润,与以往研究[6-9]一致。

表1宫颈鳞癌及正常宫颈组织中RECK、MMP-9阳性表达率比较

表2宫颈鳞癌患者不同临床病理特征间RECK表达情况比较(n)

率的两两比较：与高分化比较*P<0.05

MMP-9属于锌离子依赖的基质金属蛋白酶家族能够降解基膜及细胞基Ⅳ型胶原和明胶，导致基膜破坏，促使肿瘤细胞浸润和转移。MMP-9表达异常升高可导致肿瘤细胞浸润、转移。本研究结果显示，MMP-9在宫颈鳞癌中较宫颈正常组织中明显升高。MMP-9在淋巴结转移组中阳性率较无淋巴结转移组明显升高，且不同组织学分化程度间阳性率差异亦有统计学意义(P<0.01)。提示MMP-9异常升高是宫颈鳞癌预后不良关键因素，与其他学者[6-9]报道一致。

通过相关分析发现,宫颈鳞癌鳞状组织中RECK和MMP-9的表达呈明显负相关，即随着RECK阳性率降低，MMP-9阳性率显著升高,从而促进宫颈鳞癌的侵袭与转移。本实验使用免疫组化技术检测RECK、MMP-9在正常宫颈、宫颈鳞癌组织中的表达情况，提示RECK、MMP-9有可能成为判断宫颈鳞癌侵袭转移及预后的一项重要的参考指标；但是RECK和MMP-9在宫颈鳞癌患者的临床分期中的表达差异无统计学意义，考虑样本选择主要是宫颈鳞癌Ⅰ、Ⅱa期，引起差异不明显，导致与其他研究不同。

表3宫颈鳞癌患者不同临床病理特征间MMP-9表达情况比较(n)

(衷心感谢蚌埠医学院第一附属医院病理科承泽农老师及冯振中老师在本次实验中给予的帮助！)

[1]周晖,卢淮武,彭永排,等.《2015年 NCCN 宫颈癌临床实践指南》解读[J].中国实用妇科与产科杂志,2015，31(3):185.

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(本文编辑刘璐)

Expression and significance of RECK and MMP-9 in cervical squamous cell carcinoma

ZHANG Yun-cai1,ZHAO Jin1,LI Sheng-ze2

(1.DepartmentofGynecologyandObstetrics,TheFirstPeople′sHospitalofBengbu,BengbuAnhui233000；2.DepartmentofGynecologicalTumor,TheFirstAffiliatedHospitalofBengbuMedicalCollege,BengbuAnhui233004,China)

Objective:To investigate the expressions and significance of RECK and matrixmetalloproteinase-9(MMP-9)in the cervical squamous cell carcinoma.Methods:The expressions of RECK and MMP-9 in 20 cases of normal cervical tissue and 70 cases of cervical squamous cell carcinoma were detected using immune histochemical staining method.Results:The positive rates of RECK protein expression in normal cervical tissue and cervical squamous cell carcinoma tissue were 95.00% and 31.43%,respectively,the difference of which was statistically significant(P<0.01).Compared with the cervical squamous cell carcinoma patients without lymph node metastasis,the positive rate of RECK in patients with lymph node metastasis significantly decreased(P<0.01).The positive rates of MMP-9 protein expression in normal cervical tissue and cervical squamous cell carcinoma tissue were 25.00% and 80.00%,respectively,the difference of which was statistically significant(P<0.01).Compared with the cervical squamous cell carcinoma patients without lymph node metastasis,the positive rate of MMP-9 in patients with lymph node metastasis significantly increased(P<0.01).The expression of RECK in cervical squamous carcinoma was negative correlation with the expression of MMP-9(P<0.01).Conclusions:The decreasing or absent of the RECK expression in cervical squamous carcinoma maybe though upregulate the expression of MMP-9 to promote the infiltration and metastasis of cervical squamous carcinoma.The RECK and MMP-9 are closely related to the infiltration and metastasis.

cervical neoplasms;reversion-inducing-cyste-ine-rich protein with kazal motifs;matrixmetalloproteinase-9

2015-10-31

单位] 1.安徽省蚌埠市第一人民医院 妇产科，233000；2.蚌埠医学院第一附属医院 肿瘤妇科，安徽 蚌埠 233004

[作者简介] 张运彩(1974-)，女，硕士，主治医师.

1000-2200(2016)09-1201-04

R 737.33

ADOI:10.13898/j.cnki.issn.1000-2200.2016.09.026