神经纤毛蛋白1和C-MET在不同临床病理特征的非小细胞肺癌中的表达特点及其对肿瘤血管生长的关系

杨丽

(宜宾市第一人民医院血液肿瘤科，四川 宜宾　644000)



神经纤毛蛋白1和C-MET在不同临床病理特征的非小细胞肺癌中的表达特点及其对肿瘤血管生长的关系

杨丽

(宜宾市第一人民医院血液肿瘤科，四川 宜宾644000)

目的探讨神经纤毛蛋白1(NRP1)和C-MET在不同临床病理特征的非小细胞肺癌中的表达特点及其对肿瘤血管生长的关系。方法选取107例肺癌患者和79例正常患者的蜡块组织，分为观察组和对照组，通过免疫组化技术检测所有组织中的NRP1、C-MET的阳性表达率和MVD值，采用统计学方法对两组值进行对比并比较观察组的不同临床症状与的NRP1、C-MET的阳性表达率和MVD值的相关性。结果观察组的NRP1、C-MET的表达和MVD值明显高于对照组(P<0.05)。NPR1、C-MET阳性率，MVD值与肿瘤的分化程度、淋巴结转移、胸膜侵犯、Ki67表达、脉管浸润有明显相关性(P<0.05)。NRP1的阳性率与C-MET的阳性率存在正相关性(r=0.485，P<0.001),NRP1的阳性率与MVD值存在正相关性(r=0.447，P<0.001),C-MET的阳性率与MVD值存在正相关性(r=0.493，P<0.001)。结论NRP1和C-MET在非小细胞肺癌中存在高表达，二者均可促进肿瘤血管的生成，同时还存在一定的正向协同作用。

癌,非小细胞肺;神经纤毛蛋白质1;蛋白酪氨酸激酶类;新生血管化,病理性

肺癌是一种临床常见的恶性肿瘤，起源于支气管粘膜或腺体，在我国的发病率呈逐年增长的趋势[1]。而其中的非小细胞肺癌(NSCLC)因其占肺癌总数的80%[2]，成为临床上最常见的肿瘤。非小细胞肺癌有进展迅速，易发生脉管转移的特点，而这些特点与肿瘤血管生成的关系十分密切。神经纤毛蛋白1(NRP1)是一种与血管内皮细胞新生有关的受体，位于内皮细胞表面，能够与血管内皮生长因子结合[3-4]。C-MET相关蛋白产物可以与肝细胞生长因子(HGF)结合而发挥一系列生物学作用，促进肿瘤细胞的存活、增殖、侵袭和转移[5-6]。CD34对血管标记的敏感性和特异性非常强，而且具有能够标记肿瘤中的新生血管的特性，使其成为了常用的血管标志物。本研究通过免疫组化技术，通过检测非小细胞肺癌肿瘤组织中的NRPI和C-MET的表达情况，探讨二者的表达特点和与肿瘤血管新生的关系。

1　资料及方法

1.1临床资料选取107例从2015年4月至2015年11月于宜宾市第一人民医院就诊后经病理诊断确诊为非小细胞肺癌并符合非小细胞肺癌世界卫生组织(WTO)中的诊断标准的患者，对这些患者不进行任何放、化疗，直接进行手术切除，并留取蜡块组织作为观察组，选取79例在同一时间于我院就诊的且经病理诊断为正常的患者的肺部蜡块组织作为对照组。其中观察组共107例，男58例，女49例，年龄50～78岁，平均62.34岁，其中鳞状细胞癌56例，腺癌51例。对照组共79例，男44例，女35例，年龄49～79岁，平均61.93岁。两组患者的一般资料差异无统计学意义(P>0.05)。本研究患者均知情同意，并经医院伦理学委员会批准。

1.2检测方法对所有的实验标本经甲醛固定后，进行石蜡包埋切片。在正式实验前先进行预实验，先稀释不同的比例取得结果，再选择染色效果最佳的稀释比例进行正式实验。染色剂使用DAB，采用免疫组化SP法对CD34、NRP1和C-MET进行检测。同时设立阴性对照和阳性对照。所有的操作均有同一个人完成，所有试剂统一购买，为同一厂家同一批次，以减少误差。

1.3观察指标判定血管密度时采用微血管密度(MVD)，具体方法：当发现CD34染色阳性的连续细胞分枝或细胞丛时，则可认为是血管或新生血管。在10×10倍数的显微镜下找到10个血管密度最高的区域，改为40×10倍镜，计数每一个视野中血管的数量，求得每个视野中血管的平均数量即为MVD值。NRP1或C-MET蛋白表达阳性的细胞在染色后为棕黄色颗粒，在10×10倍数显微镜下找到肿瘤最密集的区域，改为40×10倍镜，计数整个视野中所有的肿瘤数和染色阳性的肿瘤数，并计算该视野下的阳性率，计算10个视野后取平均值。阳性率≥25%时记为阳性，阳性率<25%则记为阴性。

1.4统计学方法采用SPSS20.0软件对采集的数据进行分析处理，计量资料采用t检验，计数资料采用χ2检验，比较相关性采用线性相关分析，当P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1两组患者NRP1、C-MET阳性表达率和MVD值比较见表1，观察组NPE1表达阳性者共65例，对照组NPR1表达阳性者共17例，观察组的NPR1阳性表达率明显高于对照组(P<0.05)；观察组C-MET表达阳性者共82例，对照组C-MET表达阳性者共11例，观察组的C-MET阳性表达率明显高于对照组(P<0.05)；观察组MVD值为40.29±8.68，对照组MVD值为24.53±4.32，观察组的MVD值明显高于对照组(P<0.05)。2.2观察组患者不同临床症状下NPR1、C-MET阳性率、MVD值比较见表2，NPR1阳性率、C-MET阳性率、MVD值与肿瘤的分化程度、淋巴结转移、胸膜侵犯、Ki67表达、脉管浸润有明显相关性(P<0.05)。随着肿瘤细胞分化程度的降低、淋巴结转移的发生、胸膜侵犯的发生、Ki67表达的增加、脉管浸润的发生，NPR1、C-MET阳性率升高，MVD值增加。

表1　两组患者NEP1和C-MET阳性表达率比较和MVD值的比较

2.3观察组中NPR1、C-MET阳性率与MVD值的相关性分析NRP1的阳性率与C-MET的阳性率存在正相关性(r=0.485，P<0.001),NRP1的阳性率与MVD值存在正相关性(r=0.447，P<0.001),C-MET的阳性率与MVD值存在正相关性(r=0.493，P<0.001)。

3　讨论

近年来，人们对于提高肺癌治疗后患者的生存率并未取得重大进展。在非小细胞肺癌的进程中极易出现肿瘤细胞的明显浸润、生长和转移[7]。有学者认为NRP1是一种潜在的血管生成促进因子，将它称为新型VEGF受体。NEP1与血管关系密切，是从乳腺癌细胞系中纯化得到[8-9]。也有研究显示NRP1与肿瘤细胞的迁移密切相关[10]。C-MET是一种原癌基因编码的拥有自主磷酸化活性的HGF受体，主要在各种上皮细胞中表达，可以调控肿瘤的侵袭性生长，是酪氨酸蛋白激酶家族成员[11]。C-MET还可以通过将蛋白激酶结构域中PTK激活引起丝裂原的活化，从而引起蛋白激酶的羧基端酪氨酸残端的磷酸化，上调u-PA，最终调节一系列的生物反应，并可引起基底膜的破坏和细胞外基质的降解，导致肿瘤细胞的转移[12-13]。C-MET还有刺激血管内皮细胞的增生，通过自分泌和旁分泌促进血管的生成[14]。也有研究称C-MET通过激活STAT(信号转导及转录激活因子)途径与PI-3K(磷脂酰肌醇 3-激酶)途径，引起细胞表达出血管内皮生长因子，促进肿瘤细胞的浸润、生长和血管生成[15-16]。本实验主要探讨NRP1与C-MET在不同临床症状下的表达特点及其与血管生长的相关关系，故选择了特异性和敏感性明显高于同类其他标记物(如CD31、F8因子等)且能够特异性标记肿瘤的新生血管的CD34作为标记物。

本实验结果显示NRP1与C-MET阳性率均随着肿瘤中血管的增加而提高，故推断NRP1与C-MET均在肿瘤的生长过程中发挥重要作用。同时NRP1和C-MET在肿瘤细胞中的表达存在相关性，故推断NRP1和C-MET在促进肿瘤细胞生长上存在一定的协同作用，其原因可能与NRP1和C-MET均能促进肿瘤细胞的增殖、提高肿瘤细胞的突变率有关，也可能与NRP1和C-MET均促进血管内皮生长因子的产生从而相互促进有关。由本实验结果得知当肿瘤的分化程度较低时，NRP1和C-MET的表达均处于较高水平，故推测NRP1和C-MET可能与肿瘤细胞的分化有一定相关性，当NRP1与C-MET表达升高时肿瘤细胞有向低分化发展的趋势，此时肿瘤的治疗较困难且预后较差。实验结果中存在脉管浸润和淋巴结转移的肿瘤细胞中NRP1和C-MET的表达均升高，故推断NRP1和C-MET均可促进肿瘤细胞的脉管累犯和淋巴转移，而NRP1和C-MET的促进血管生成作用发挥了一定作用，肿瘤血管的生成为肿瘤的生长提供了条件，而密集的血管有利于肿瘤细胞进入脉管和淋巴。当Ki67的表达升高时，NRP1和C-MET的表达也随之升高，这种相关性更好的证明了NRP1和C-MET拥有重要的促进肿瘤生长的作用。生成肿瘤血管有多种方法，可以是内皮依赖性血管(由内皮细胞前体细胞分化而成)，也可以是由肿瘤周围的正常组织中的血管延伸到肿瘤组织中形成，而这些血管的生成均可以通过NRP1和C-MET的表达从而促进多种血管生成相关信号的分泌而完成，从而促进肿瘤内血管生长，加快肿瘤的生长。总之，NRP1和C-MET在非小细胞肺癌中存在高表达，二者均可促进肿瘤血管的生成，同时还存在一定的正向协同作用。

表2　观察组患者不同临床症状下NPR1、C-MET阳性率，MVD值比较

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Express characteristics of NRP1 and C-MET in non-small cell lung cancer with different clinical pathological features and relationship between with the tumor blood vessel growth

YANG Li

(Hematology-OncologyDepartmentofTheNo.1People'sHospitalofYibin,Yibin,Sichuan644000,China)

ObjectiveTo analyze express characteristics of NRP1 and C-MET in non-small cell lung cancer with different clinical pathological features and relationship between with the tumor blood vessel growth.MethodWe selected 107 paraffin embedded tissues from patients with lung cancer and another 79 from patients without lung cancer.Detect the positive expression rate of NRP1and C-MET and the value of MVD，then divided them into the observation group and the control group.Compare the positive expression rate of NRP1 and C-MET and the value of MVD in different groups and the correlation between different clinical symptoms and the positive expression rate of NRP1and C-MET and the value of MVD in observation group.ResultsCompared with the control group,observation group have significant differences in the expression rate of NRP1and C-MET and the value of MVD (P<0.05).There are significant correlation between different clinical symptoms and the positive expression rate of NRP1and C-MET and the value of MVD in observation group (P<0.05).There are positive correlations between the expression rate of NRP1and C-MET (P<0.05).There are positive correlations between the expression rate of NRP1and the value of MVD (P<0.05).There are positive correlations between the expression rate of C-MET and the value of MVD (P<0.05).ConclusionThere are high expressions of NRP1and C-MET in non-small cell lung cancer,both of them can promote the growth of blood vessels and have some certain positive synergy .

Carcinoma,non-small-cell lung;Neuropilin-1;Protein-tyrosine kinases;Neovascularization,pathologic

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.09.033

2016-04-21，

2016-07-18)