成都地区乙型肝炎病毒感染者病毒基因型和亚型分布及其临床意义

廖乾秀

成都市第一人民医院检验科(四川 成都 610000)



成都地区乙型肝炎病毒感染者病毒基因型和亚型分布及其临床意义

廖乾秀

成都市第一人民医院检验科(四川 成都 610000)

目的探讨成都地区乙型肝炎病毒(HBV)感染者病毒基因型和亚型分布及其临床意义。方法采用PCR检测法对成都地区随机选取的216例HBV感染患者的病毒基因型以及亚型的分布情况进行研究，分析成都地区乙型肝炎病毒感染者病毒基因型和亚型分布情况及不同类型HBV感染者基因型频率有无差异。结果216例HBV感染患者的血清检测结果显示，70例为B基因型(32.4%)，105例为C基因型(48.6%)，B+C混合感染型41例(19.0%)，混合型显著低于B型和C型(P<0.05)。无症状携带者以B型感染为主，慢性乙型肝炎以B型和C型为主，肝硬化及肝癌以C型为主，不同类型HBV感染者基因型分布频率存在统计学差异(P<0.05)。结论成都地区乙型肝炎病毒感染以B型和C型为主，C型感染可能是本地区HBV感染者肝硬化及肝癌的高危因素。

成都地区；乙型肝炎；基因型；亚型；临床意义

目前，我国乙型肝炎病毒(HBV)感染者占据世界HBV感染者的3/4以上，是HBV患者较多的国家之一[1]。HBV属于嗜肝DNA病毒，在进行逆转录的过程中没有校对酶的作用，经常使核苷酸的配对发生错误，因此，HBV基因的变异性较强，按照基因序列的差异将其分为A～H总共8个基因型[2]。感染HBV后的人群最终可导致肝硬化(LC)、无症状携带者(ASC)、肝癌(HCC)、重型肝炎(SH)、慢性乙型肝炎(CHB)。而且不同区域患者的基因型以及亚型有一定的差别，本文对成都地区随机选取的216例HBV感染患者进行研究，现报道如下。

1　资料与方法

1.1一般资料选择成都地区2012年3月—2014年3月216例HBV感染患者作为研究对象，取患者的血清保存在-20℃备用。其中男性134例，女性82例，年龄18～78岁，平均年龄(48.6±12.7)岁。其中ASC患者26例，CHB患者 157例，LC患者23例，HCC患者10例。所有患者均符合乙型肝炎的诊断标准[3]，且临床确诊HBVDNA阳性。

1.2方法

1.2.1血清HBVDNA浓度测定在60μL的裂解液中加入待检血清50μL，彻底混匀后调整水浴温度至37℃，水浴时间10min，然后加入Tris饱和酚以及氯仿各30μL，按照49∶1的比例加入异戊醇，混合均匀后，转速140 000r/min，离心10min，取出上清液，加入等体积的异丙醇和10μL的醋酸钠溶液，放置在-20℃下沉淀2h，离心操作同上，将上清液倒出后，在剩下的物质中加入500μL, 75%的预冷乙醇，离心操作同上，同样去掉上清液，将剩余物质沉淀后在50℃下进行干燥，最后在20μL的焦碳酸二乙酯(DEPC)中进行溶解，保存在-20℃备用，作为PCR反应的模板。

1.2.2HBV基因型测定第一轮PCR反应体系是40μL，然后将其按照95℃ 10min，94℃ 20s，55℃ 20s，72℃ 1min进行扩增，总共扩增40个循环，72℃时的时间增加7min。第二轮PCR的反应体系分为A、B两组，A组反应体系是40μL，第一轮PCR得到的产物是第二轮的模板，扩增的基因有A、B、C三种基因型；B组反应体系是40μL，第一轮得到的产物是第二轮的模板，扩增的基因有D、E、F三种基因型，两组均按照95℃ 10min，94℃ 20s，65℃ 20s，72℃ 30s进行扩增，总共扩增40个循环，72℃时时间增加7min。然后将第二轮的产物取出10μL，采用2%的琼脂糖在100V的电压下电泳20min，观察其结果。B、E、C、D、F、A基因型的PCR产物分别是283bp、168bp、121bp、117bp、96bp、67bp。

1.2.3HBV基因亚型的测定①B1基因亚型的检测：扩增的是前C区和C区,第一轮PCR反应体系是40μL，然后将其按照96℃ 2min，94℃ 15s，55℃ 45s，72℃ 45s进行扩增，总共扩增40个循环，72℃时时间增加7min。第二轮同第一轮，只是72℃的45s改为30s进行扩增，其PCR产物是110bp。②B2基因亚型的检测方法同B1。③C1、C2基因亚型的检测：扩增的是P区，PCR反应体系是同B1基因亚型检测的第二轮。C1、C2基因亚型的PCR产物是340bp、240bp。

1.3统计学处理采用SPSS19.0统计学软件，率用百分比(%)表示，计数资料采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1HBV基因型分布216例HBV感染患者的血清检测结显示，70例为B基因型(32.4%)，105例为C基因型(48.6%)，B+C混合感染型41例(19.0%)，混合型显著低于B型(χ2=11.95,P<0.05)和C型(χ2=46.35,P<0.05)。

2.2不同类型HBV感染者基因型分布ASC者以B型感染为主，CHB以B型和C型为主，LC和HCC以C型为主，不同类型HBV感染者基因型分布频率存在统计学差异(χ2=12.36,P<0.05)，见表1。

表1　不同类型HBV感染者基因型分布[n(%)]

3　讨论

HBV是目前发现的最为普遍的DNA病毒，是一种嗜肝病毒，在我国的感染率较高，占70%以上，这与我国人口众多且密集有关[4]。HBV的形状多种多样，有大球形、小球性以及管形等。HBV的感染主要通过病毒DNA的复制完成，当病毒侵入人体的肝细胞后，DNA会进入肝细胞核，然后以负链为模板进行完整的修补，形成的DNA会在RNA多聚酶的作用下进行转录，形成长短不一的RNA[5-7]。然后继续将长短不一的RNA作为模板进行复制，形成双链DNA，HBV也就诞生了。最后通过肝细胞浆释放到肝细胞外进行进一步的感染和发展[6]。目前乙肝病毒发现的种类有A～H8种基因型，根据全球不同的地理特征进行分布，其中北欧和非洲大陆主要以A基因型为主，东亚地区则以B、C两种基因型为主，中东以及北美地区以D基因型为主，南美和非洲地区主要以E、F两种基因型为主，法国以及美国常见G基因型，而H基因型则主要在美国、墨西哥以及尼加拉瓜地区[8-10]。我国南北差异较大，成都地处南北交界处，主要以B、C两种基因型常见。本研究结果发现216例HBV感染患者的血清检测中70例为B基因型(32.4%)，105例为C基因型(48.6%)，B+C混合感染型41例(19.0%)，混合型显著低于B型和C型(P<0.05)。ASC患者以B型感染为主，CHB患者以B型和C型为主，LC及HCC以C型为主，不同类型HBV感染者基因型分布频率存在统计学差异(P<0.05)。研究提示，成都地区乙型肝炎病毒感染以B型和C型为主，C型感染可能是本地区HBV感染者LC及HCC的高危因素。因此对于HBVC型感染患者应引起医务人员的重视，此类感染人群更易发展为LC及HCC。

同时，对于HBV患者要及时进行诊断和治疗，减少传染率，降低其他并发症的发生，提高人们的生活质量。我国已有了乙肝病毒的疫苗，需要患者及时注射，避免发生传染。同时注意休息、饮食，可采用中药、抗生素等药物进行治疗，注意营养物质的充足，减少高热量物质的摄入量。

综上所述，成都地区HBV感染以B型和C型为主，C型感染可能是本地区HBV感染者LC及HCC的高危因素。

[1]YinW,ZhaoY,JiYJ,etal.Serum/plasmamicroRNAsasbiomarkersforHBV-relatedhepatocellularcarcinomainChina[J].BiomedResInt,2015,21(6):965 185.

[2]MarcianoS,GaldameOA,GadanoAC.HBVgenotypeF:naturalhistoryandtreatment[J].AntivirTher,2013,18(3):485-488.

[3]王贵强,王福生,成军,等.慢性乙型肝炎防治指南(2015年版)[J].中华实验和临床感染病杂志(电子版),2015,22(5):570-589.

[4]MaepaMB,RoelofseI,ElyA,etal.ProgressandProspectsofAnti-HBVGeneTherapyDevelopment[J].IntJMolSci,2015,16(8):17 589-17 610.

[5]CassidyA,MossmanS,OlivieriA,etal.HepatitisBvaccineeffectivenessinthefaceofglobalHBVgenotypediversity[J].ExpertRevVaccines,2011,10(12):1 709-1 715.

[6]VisvanathanK,DusheikoG,GilesM,etal.ManagingHBVinpregnancyPrevention,prophylaxis,treatmentandfollow-up:positionpaperproducedbyAustralian,UKandNewZealandkeyopinionleaders[J].Gut,2016,65(2):340-350.

[7]StasiC,SilvestriC,VollerF,etal.TheepidemiologicalchangesofHCVandHBVinfectionsintheeraofnewantiviraltherapiesandtheanti-HBVvaccine[J].JInfectPublicHealth,2016,9(4):389-395.

[8]HeT,JiaJ.ChronicHBV:whichpregnantwomenshouldbetreated[J].Liverinternational,2016,36(1):105-108.

[9]OzarasR,InancBI,YemisenM,etal.EpidemiologyofHBVsubgenotypesD[J].ClinResHepatolGastroenterol,2015,39(1):28-37.

[10]CarobeneM,BolcicF,FariasMS,etal.HIV,HBVandHCVmolecularepidemiologyamongtrans(transvestites,transsexuals,andtransgender)sexworkersinArgentina[J].JMedVirol,2014,86(1):64-70.

责任编辑：艾茜

DistributionandClinicalSignificanceofHBVGenotypesandSubtypesinChengduArea

LiaoQianxiu

(Department of Clinical Laboratory,the Chengdu First People′s Hospital，Chengdu 61000，China)

ObjectiveToexplorethedistributionandclinicalsignificanceofHBVgenotypesandsubtypesinChengduarea.Methods216caseswithHBVwerecollectedfromChenduandthegenotypeandsubtypesofHBVpatientsweretestedbyPCRmethod.ThedistributionofHBVgenotypesandsubtypesandthedifferenceofgenotypefrequenciesfordifferenttypesofHBVwereanalyzed.ResultsTheserumdetectionresultsof216HBVcasesshowedthat70casesweregenotypeB(32.4%),105casesweregenotypeC(48.6%)and41caseswereB+Cmixedtype(19.0%).ThemixedtypewassignificantlylowerthangenotypeBandC(P<0.05).TheasymptomaticcarriersweremainlygenotypeB,chronichepatitispatientsweregenotypeBandCandlivercirrhosisandlivercancerpatientsweregenotypeC.TherewasastatisticaldifferenceamonggenotypefrequenciesfordifferenttypesofHBV(P<0.05).ConclusionTheHBVinfectioninChengduwasmainlybasedongenotypeBandC.ThegenotypeCmaybeahighriskfactorforlivercirrhosisandlivercancerforHBVpatientsinthearea.

chengdu;HBV;genotype;subtype;clinicalsignificance

廖乾秀(1983- )，女，四川德阳人，技师，研究方向：临床医学检验。

R512.62

A

1008-8164(2016)03-0043-03

2016-07-08