CDK2AP1在口腔白斑中的表达水平研究

陈　俊，张国富

1.崇阳县人民医院口腔科(湖北 咸宁 437500) 2.湖北三峡职业技术学院附属医院口腔科(湖北 宜昌 443000)



CDK2AP1在口腔白斑中的表达水平研究

陈俊1，张国富2*

1.崇阳县人民医院口腔科(湖北 咸宁 437500) 2.湖北三峡职业技术学院附属医院口腔科(湖北 宜昌 443000)

目的研究细胞周期蛋白依赖性激酶2关联蛋白1(CDK2AP1)在口腔白斑中的表达。方法采用免疫组化二步法(S-P)检测10例人正常口腔粘膜，22例口腔白斑组织中CDK2AP1蛋白的表达，收集数据并进行统计分析。结果CDK2AP1蛋白在口腔白斑组织的阳性率(23.71%±7.93%)明显低于正常口腔粘膜组织(63.88%±11.72%)，差异有统计学意义(P<0.05)。结论CDK2AP1在口腔粘膜中的表达水平随着口腔病变恶性程度增高而降低，本指标对口腔病变恶性程度的研究有一定临床意义。

CDK2AP1；口腔白斑； 免疫组化二步法

近年来，随着生活环境、生活习惯和饮食结构等的变化，口腔白斑呈年轻化趋势，发病率明显上升。口腔白斑是口腔粘膜中最常见的癌前病变[1]，研究表明4%～6%[2]的口腔白斑可恶变为口腔鳞状细胞癌。由于口腔癌前病变病因复杂，其发生与多种癌基因有关。本研究拟通过对口腔白斑的检测，探讨细胞周期蛋白依赖性激酶2关联蛋白1(cyclin-dependent kinase 2-associ-atedprotein 1,CDK2AP1)蛋白在口腔白斑中的表达，为临床的早期诊断提供理论依据，现报道如下。

1　材料与方法

1.1标本选择选取湖北三峡职业技术学院附属医院口腔科2015年9月—2016年3月临床和病理资料齐全的22例口腔粘膜白斑组织标本，所有患者术前均未接受任何治疗，术后均由病理科确诊。另选取10例正常口腔粘膜组织作为对照组。

1.2主要试剂鼠抗人抗体CDK2AP1购自上海博英生物有限公司；免疫组化二步法(S-P)检测试剂盒、即用型SABC试剂盒、酶底物DAB显色剂均购自于北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3方法新鲜组织标本用4%多聚甲醛固定，石蜡包埋，制成5 μm切片，行免疫组化染色：①载玻片浸泡于浓硫酸重铬酸钾洗液24 h去污后多聚赖氨酸稀释液浸泡24 h，行防脱片处理，干燥箱烘烤50 min;②烤片机60℃烤4 h;③二甲苯100%，95%，80%的酒精常规脱蜡，水化;④3%双氧水中浸泡10 min,PBS缓冲液冲洗3次，每次3 min;⑤抗原热修复：放入盛有柠檬酸盐缓冲液的高压锅中加热至沸腾2 min，室温下放置至冷却;⑥增加一抗(Bcl-2与p53为工作液),4℃冰箱孵育过夜,PBS缓冲液冲洗3次，每次5 min;⑦滴加试剂1，室温孵育20 min，PBS缓冲液冲洗3次，每次3 min;⑧滴加试剂2，室温孵育30 min，PBS缓冲液冲洗3次，每次3 min;⑨DAB显色：室温反应，镜下控制反应时间，自来水冲洗终止反应;⑩苏木素复染，使胞核着色，脱水、透明、中性树脂封片。

1.4判定标准CDK2AP1蛋白呈棕黄色颗粒大部分表达在细胞浆内。结果评估在高倍镜下进行，方法参照Campo等[3]标准综合计分。0分为基本不着色，弱着色记1分，中度着色记2分，强着色记3分；阳性细胞数所占比例为4个等级：0%～5%为0分，6%～25%为1分，25%～50%为2分，50%以上为3分。最后以阳性细胞的百分比和染色强度计分之和所得的总分进行结果判定：0分为(-)；1、2分为弱阳性(+)；3、4分为中等阳性(++)；5分以上为强阳性(+++)。

2　结果

CDK2AP1蛋白阳性物质为棕黄色颗粒定位在细胞膜和细胞浆内。CDK2AP1蛋白在人正常口腔粘膜组织中阳性细胞数分散在上皮基底层；在口腔粘膜白斑组织中随着上皮异常增生程度增加而减少(见图1)。正常口腔粘膜组织中CDK2AP1平均阳性率为(63.88%±11.72%)，口腔白斑上皮细胞平均阳性率(23.71%±7.93%)，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

3　讨论

CDK2AP1是在仓鼠口腔癌模型研究中最先被Todd等发现[4]。在人类基因组中CDK2AP1位于12q24，全长1.6 kb,编码115个氨基酸序列[5-6]。CDK2AP1在细胞各周期的调控过程中起到很大作用，可以让各种信号在细胞内外进行传递，通过整合汇集到细胞核，进而调控细胞增殖。在细胞增殖过程中，依赖性激酶CDK4C能和Gi/S期转换的调控因子CDK2AP1发生特异性结合，进一步让S期相关基因的转录启动，从而加剧G期细胞进入S期，最终让细胞增殖失去控制[7-8]。由此可见口腔黏膜组织的病变发生与细胞周期调控机制紊乱关系密切，细胞周期的调控因子发生异常变化可以导致细胞出现失控性生长，而促进肿瘤细胞的增殖[9-10]。

A:正常口腔粘膜;B:口腔粘膜白斑组织。 图1　CDK2AP1蛋白的表达(S-P二步法，×400)

样本编号口腔正常粘膜口腔白斑样本编号口腔正常粘膜口腔白斑176.5324.3412-24.22269.6622.3113-22.12388.2132.2314-32.23459.2314.5615-13.56563.2234.3316-32.33658.019.3517-8.25762.9922.2718-21.37861.0126.6419-27.54950.1232.1520-23.151049.8830.0921-20.0911-34.1922-14.34

本实验运用S-P二步法检测CDK2AP1蛋白在正常口腔粘膜组织、口腔白斑中的表达情况，结果显示正常口腔粘膜上皮中细胞平均阳性率明显高于白斑组(P<0.05)，说明CDK2AP1在口腔粘膜组织恶变的初始阶段就已经参与并起到一定的作用。在以后的研究中，可进一步研究在口腔白斑到口腔癌的发生发展中CDK2AP1的表达水平的变化及相互关系，判断CDK2AP1蛋白与口腔的恶变程度的相关性。

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责任编辑：艾茜

Study on the Expressions of CDK2AP1 in Oral Leukoplakia

Chen Jun1,Zhang Guofu2*

(1.DepartmentofStomatology,thePeople′sHospitalofChongyang,Xianning437500,China;2.DepartmentofStomatology,theAffiliatedHospitalofHubeiThreeGorgesVocationalandTechnicalCollege,Yichang443000,China)

Objective To explore the expressions of cyclin-dependent kinase 2-associated protein 1 (CDK2AP1) in oral leukoplakia.Methods The immunohistochemical two-step (S-P) technique was used to detect the expressions of CDK2AP1 protein in 10 cases of normal oral mucosa and 22 cases of oral leukoplakia tissue.Results The positive rate of CDK2AP1 protein in oral leukoplakia and normal oral mucosa were 23.71%±7.93% and 63.88%±11.72%.There was statistical difference (P<0.05).Conclusion The expression level of CDK2AP1 in the oral mucosa was decreased with the increase of the malignant degree of the oral cavity, which has a certain clinical significance in the study of the malignant degree of oral lesions.

CDK2AP1;oral leukoplakia;lmmunohistochemical two-step

陈俊(1979- ) ，男，湖北咸宁人，主治医师 ，研究方向：口腔颌面部肿瘤手术治疗;*

张国富，男，硕士研究生，讲师，主治医师，主要从事抗凋亡基因和抑癌基因致癌机制等方面的研究。

R781.59

A

1008-8164(2016)03-0011-02

2016-05-19