银杏达莫注射液对骨科止血带所致术后氧化应激损伤的影响

谢玉惠　赵盛惠　冉茂婷

1.重庆市沙坪坝区陈家桥医院药剂科，重庆401331；2.重庆市沙坪坝区陈家桥医院中医科，重庆401331

银杏达莫注射液对骨科止血带所致术后氧化应激损伤的影响

谢玉惠1赵盛惠2冉茂婷1

1.重庆市沙坪坝区陈家桥医院药剂科，重庆401331；2.重庆市沙坪坝区陈家桥医院中医科，重庆401331

目的研究银杏达莫注射液（GDI）对骨科止血带所致缺血再灌注诱发术后氧化应激损伤的影响。方法选取重庆市沙坪坝区陈家桥医院2014年8月～2015年10月收治的82例拟行骨科下肢手术的患者，所有患者均在神经刺激仪定位下行腰丛-坐骨神经联合阻滞麻醉后手术，将其随机分为对照组和GDI组，GDI组静脉滴注GDI，对照组给予生理盐水，共5 d。分别测定并比较上止血带前（T0）、松止血带后10 min（T1）、松止血带后第2天（T2）、松止血带后第5天（T3）4个时间点两组患者血清丙二醛（MDA）、乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）的水平。结果与T0时间点比较，两组患者T1、T2、T3时间点血清MDA、LDH含量显著升高，SOD含量显著降低，差异均有统计学意义（P<0.05）。两组患者T0时间点血清MDA、LDH和SOD含量比较差异均无统计学意义（P>0.05）；GDI组患者在T1、T2、T3时间点的血清MDA和LDH含量显著低于对照组，SOD含量显著高于对照组，差异均有统计学意义（P<0.05）。结论GDI对骨科止血带所致肢体缺血再灌注诱发的氧化应激损伤具有一定的保护作用，可能是通过上调SOD水平、减少MDA和LDH分泌实现的。

银杏达莫注射液；止血带；缺血再灌注；氧化应激

［Abstract］Objective To study the effects of Ginkgo Leaf Extract and Dipyridamole Injection（GDI）on the ischemia reperfusion-induced postoperative oxidative stress injury caused by orthopedic tourniquet.Methods Eighty-two patients scheduled for lower limb operation in Chenjiaqiao Hospital of Shapingba District of Chongqing City from August 2014 to October 2015 were selected.Lumbar plexus combined with sciatic nerve block was performed guided by a nerve stimulator in all patients.All patients were randomly divided into control group and GDI group.GDI group received GDI，whereas the control group received an equivalent volume of 0.9%saline.The duration time was 5 days. The levels of serum malondialdehyde（MDA），lactate dehydrogenase（LDH）and superoxide dismutase（SOD）in the two groups at 10 min before tourniquet inflation（T0），10 min（T1），2 d（T2）and 5 d（T3）after tourniquet release were measured.Results Compared with T0，the levels of serum MDA and LDH at T1，T2and T3in both groups were significantly increased and the levels of serum SOD were significantly decreased，the differences were all statistically significant（P<0.05）.There were no statistically significant differences of the levels of serum MDA，LDH and SOD at T0between the two groups（P>0.05）.The levels of serum MDA and LDH at T1，T2and T3in the GDI group were significantly lower than those of control group，and the levels of serum SOD were significantly higher than those of control group，the differences were all statistically significant（P<0.05）.Conclusion GDI can attenuate the ischemia reperfusion-induced postoperative oxidative stress injury caused by orthopedic tourniquet，which may be related to up-regulation of serum SOD level，and down-regulation of serum MDA，LDH levels.

［Key words］Ginkgo Leaf Extract and Dipyridamole Injection；Tourniquet；Ischemia-reperfusion；Oxidative stress

骨科手术使用止血带会造成组织和器官缺血/再灌注损伤，肢体缺血/再灌注还可导致远隔器官如心、肺等的损伤，机制与缺血/再灌注诱发的氧化应激和炎性损伤有关［1-2］。研究表明，银杏达莫注射液（GDI）可抵抗缺血/再灌注诱导的机体损伤［3］，临床主要应用于治疗急性脑梗死、冠心病等血栓性疾病，机制与抑制氧化应激、炎性因子水平有关［4-6］。有研究报道，GDI可预防骨折患者术后下肢深静脉血栓的形成［7］，但鲜见其应用于抵抗骨科止血带诱发氧化应激损伤的相关研究。本研究拟探讨GDI对骨科止血带所致缺血再灌注诱发术后氧化应激损伤的影响，为减轻骨科手术术后氧化应激损伤提供一定的依据。

1　资料与方法

1.1一般资料

选取重庆市沙坪坝区陈家桥医院2014年8月～2015年10月择期行下肢手术需要上止血带的患者82例，美国麻醉师协会（ASA）分级Ⅰ～Ⅱ级；男48例，女34例；年龄（43.2±9.1）岁；体重指数（22.8± 1.9）kg/m2。采用随机数字表法将其分为对照组和GDI组，各41例。对照组男24例，女17例；年龄（43.5±8.7）岁；体重指数（22.6±2.2）kg/m2。GDI组男24例，女17例；年龄（42.9±9.8）岁；体重指数（23.0± 1.7）kg/m2。两组患者性别、年龄、体重指数等一般资料比较差异均无统计学意义（均P>0.05），具有可比性。排除存在心脑肺等严重并发症、术中失血血红蛋白<7 g/dL、糖尿病、房室传导阻滞或窦性心动过缓、有感染症状及术前服用糖皮质激素或非甾体类抗炎药物的患者。本研究经医院伦理委员会批准，患者及家属均签署知情同意书。

1.2麻醉方法

患者进入手术室常规监测心电图、脉搏血氧饱和度及血压等，并静脉输注6～8 mL/kg乳酸林格液。纳入研究患者都在神经刺激仪（负极连接0.8 mm×100.0 mm神经刺激针，正极连接患侧下肢皮肤的一个电极，刺激频率2 Hz，刺激起始电流1 mA，脉冲0.1 ms）引导下接受腰丛-坐骨神经阻滞麻醉。患者取手术侧屈膝曲臀，非手术侧在下侧卧并充分展伸。腰丛阻滞定位和坐骨神经阻滞定位具体操作参照于健等［8］研究使用的麻醉方法。麻醉过程中若出现相应诱发反应，可调低电流刺激强度至0.3～0.4 mA，电流减小后若还存在适宜的运动反应，可采取以下方式处理：坐骨神经阻滞注射0.5%罗哌卡因10 mL+1%利多卡因10 mL；腰丛阻滞注射0.5%罗哌卡因20 mL+1%利多卡因10 mL。麻醉操作完成后，患侧通过留置针穿刺开放股动脉、股静脉通路，肝素封管留针备用。

1.3止血带应用

在患肢大腿中上1/3处上止血带，驱血加压设置为术前收缩压加100 mmHg（1 mmHg=0.133 kPa），止血带维持60 min后放松10 min，设定总时间为60～120 min。术中如发生低血压（较基础值下降30%以下），静脉推注麻黄碱5～10 mg；如发生高血压（较基础值升高30%以上），静脉推注尼卡地平2 mg；如发生窦性心动过缓（心率<50次/min），静脉注射阿托品0.2 mg。

1.4GDI给药

于手术上止血带之前12 h第1次给药，GDI组患者给予GDI（通化谷红制药有限公司生产，国药准字H22026139）20 mL加入0.9%氯化钠溶液250 mL静脉滴注，术后当天开始注射至术后第4天，每天1次，共给药6次；对照组患者给予相同速度和容量的0.9%氯化钠溶液。

1.5观察指标

分别于上止血带前（T0）、松止血带后10 min（T1）、松止血带后第2天（T2）、松止血带后第5天（T3）共4个时间点抽取手术侧股静脉血5 mL，用移液管吸取上层血清装于灭菌的Eppendorf管中盖紧封口，-20℃低温保存。乳酸脱氢酶（LDH）检测使用比色法，试剂盒购自南京建成生物技术公司，使用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的含量，试剂盒购自武汉华美生物工程公司，具体操作步骤按照试剂盒说明书进行。

1.6统计学方法

使用SPSS 20.0分析数据，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，采用配对t检验，重复测量的计量资料采用方差分析，两两比较采用q检验；计数资料比较采用χ2检验；以P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

两组患者术中均未使用麻黄碱和硫酸阿托品，亦无患者需行面罩辅助通气。GDI组患者止血带所用时间［（84.5±14.7）min］与对照组［（82.9±13.2）min］比较，差异无统计学意义（t=0.675，P>0.05）。

两组患者T0时间点血清MDA、LDH和SOD含量比较，差异均无统计学意义（均P>0.05）。骨科止血带处理后，与T0时间点比较，两组患者T1、T2、T3时间点血清MDA、LDH含量显著升高，SOD含量显著降低，差异均有统计学意义（均P<0.05）；与对照组比较，GDI组患者在T1、T2、T3时间点的血清MDA、LDH含量显著降低，SOD含量显著升高，差异均有统计学意义（均P<0.05）。见表1。

表1　两组血清MDA、LDH和SOD含量比较（）

表1　两组血清MDA、LDH和SOD含量比较（）

注：与同组T0比较，*P＜0.05；与对照组同期比较，#P＜0.05；MDA：丙二醛；LDH：乳酸脱氢酶；SOD：超氧化物歧化酶；GDI：银杏达莫注射液

组别例数MDA（μmol/L）LDH（U/L）SOD（U/mL）对照组41 T0T1T2T3 4.5±0.7 6.9±0.5*5.8±0.6*5.3±0.5*162.2±57.4 224.2±58.1*201.5±47.2*187.6±51.3*179.5±18.1 153.1±14.8*123.6±20.5*114.0±16.2*GDI组41 T0T1T2T3 4.4±0.5 5.7±0.6*#5.0±0.4*#4.8±0.6*#159.7±71.8 183.6±49.6*#172.6±34.3*#164.2±64.3*#184.2±17.4 174.6±16.9*#154.2±24.3*#145.6±18.3*#

3　讨论

骨科手术应用止血带是为了给术者一个清晰的视野，但使用止血带会造成机体组织缺血/再灌注损伤，这成为骨科医师当前亟待解决的问题［1，9］。肢体缺血/再灌注后引起远隔脏器如心、肺、肝、肾等器官功能障碍，因此，预防肢体缺血/再灌注致远隔器官损伤的研究具有重要意义［2，8］。多项研究表明，药物预处理可以提前启动内源性保护机制，不仅减轻缺血器官损害，对远隔器官也有保护作用［10-12］，如王宇等［13］研究指出氟醚和异丙酚均可减轻膝关节韧带修复术患者骨科止血带诱发的下肢缺血再灌注损伤，血清MDA和肿瘤坏死因子-α浓度及其增长率较对照组显著降低；还有研究表明右美托咪定应用于下肢手术老年患者，可有效减少由于使用止血带所导致的氧化应激及炎性反应，显著提高SOD含量，使MDA、C反应蛋白、白细胞介素-8及人肿瘤坏死因子-α水平均明显降低［14］。中药丹参注射液通过抑制血清MDA及促炎症因子白细胞介素-6、白细胞介素-10的表达，提高SOD水平，从而降低骨科止血带所致下肢手术患者的缺血/再灌注损伤［15］。但鲜见GDI在骨科止血带损伤中的相关研究。

GDI主要有效成分包括银杏黄酮苷、银杏苦内酯、白果内酯和双嘧达莫。银杏叶提取物可清除氧自由基，抑制细胞凋亡；特异性拮抗N-二甲基亚硝胺受体，对抗兴奋性氨基酸的毒性作用；改善微循环，增加红细胞变形能力［16-17］。银杏内酯与血小板活化因子结构相似，能竞争性损坏血小板活化因子在体内的不良作用，减少血小板的活化与聚集，降低血黏度，抑制毛细血管高通透性、炎症与过敏反应，从而保护组织；银杏黄酮苷是氧自由基的捕捉剂和清除剂，参与清除超氧阴离子，抑制脂质过氧化反应，保护细胞［18-19］。王静等［3］研究GDI预处理对大鼠离体心脏缺血/再灌注损伤的影响，结果发现实验组动物心肌乳酸脱氢酶和肌酸激酶的释放量降低，活性减弱，线粒体内Ca2+超载减少，且线粒体内酮戊二酸脱氢酶含量升高，说明银杏达莫可能通过抑制钙超载、增强线粒体酶活性以稳定线粒体能量代谢，起到缓解缺血/再灌注诱导心肌细胞损伤的作用。

GDI还可用于临床骨科，骨科医生主要应用GDI来预防骨科术后肢体深静脉血栓的形成。王照平等［7］研究指出GDI联合低分子肝素钙使骨科术后下肢深静脉血栓的发生率显著减小，对照组发生率为9.8%，治疗组仅为2.7%，两组比较差异有统计学意义；何嘉等［20］探讨GDI对38例行髋、膝关节置换术患者术后深静脉血栓形成的预防效果，结果发现研究组术后深静脉血栓发生率为2.63%，显著低于对照组的10.53%；另有李江伟等［21］研究提示GDI联合低分子肝素钠不仅能降低63例行髋、膝关节置换术患者术后下肢深静脉血栓的发生率，还能改善血液高凝状态，延长部分凝血活酶时间及凝血酶原时间。GDI与氧化应激关系密切。银杏达莫针剂可通过降低MDA和升高SOD减轻油酸所致家兔急性肺损伤的氧化应激作用［22］。多项临床研究表明，GDI可通过抑制血清MDA等水平，上调SOD表达，改善糖尿病肾病患者氧化应激状态［23-24］；如时黛等［23］使用GDI治疗43例早期糖尿病肾病患者，治疗2周后可使血清MDA水平较对照组显著降低，SOD浓度则明显升高。

周学才等［25］研究GDI治疗有助于缓解急性心肌梗死行急诊介入治疗后缺血/再灌注损伤，观察组患者血浆肌酸激酶同工酶、心肌肌钙蛋白含量低于对照组；血浆炎性因子基质金属蛋白酶2、基质金属蛋白酶9含量低于对照组，基质金属蛋白酶抑制剂1含量高于对照组；同时观察组患者血浆MDA含量低于对照组，而谷胱甘肽、SOD含量则高于对照组，说明GDI该作用可能是通过缓解炎性反应和氧化应激反应来实现的，与本研究中部分结果一致。本研究结果指出，骨科止血带诱发肢体缺血/再灌注后，对照组患者氧化应激指标MDA和LDH含量显著增高，SOD含量显著下降。GDI组患者缺血/再灌注后MDA和LDH含量与对照组比较显著降低，SOD含量显著上升，提示GDI处理可缓解机体氧化应激反应，起到抵抗止血带所致缺血/再灌注诱发骨科术后氧化应激损伤的作用，与毕国庆等［15］研究丹参注射液缓解缺血/再灌注损伤的结果相一致。

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Effects of Ginkgo Leaf Extract and Dipyridamole Injection on the postoperative oxidative stress injury caused by orthopedic tourniquet

XIE Yuhui1ZHAO Shenghui2RAN Maoting1
1.Department of Pharmacy，Chenjiaqiao Hospital of Shapingba District of Chongqing City，Chongqing401331，China；2.Department of Traditional Chinese Medicine，Chenjiaqiao Hospital of Shapingba District of Chongqing City，Chongqing401331，China

R68

A

1674-4721（2016）09（c）-0151-04

2016-06-08本文编辑：张瑜杰）

国家科技支撑计划项目（2008BAI65B05）；重庆沙坪坝区社会发展领域科技项目（201318）。

谢玉惠（1965-），女，副主任中药师；研究方向：临床药学。