紫杉醇联合洛铂治疗晚期卵巢癌的效果及其对ERCC1、β—catenin、β—tubulin Ⅲ表达的影响

宋倪媛 陈徐 李霞 何晓红 张妍

[摘要] 目的 探討紫杉醇联合洛铂治疗晚期卵巢癌的疗效及其对核苷酸切除修复交错互补基因1（ERCC1）、β-链蛋白（β-catenin）和β3-微管蛋白（β-tubulin Ⅲ）表达的影响。 方法 选取2008年1月～2013年5月崇州市人民医院诊治的60例卵巢癌患者为研究对象，根据术后化疗方案的不同将患者分为紫杉醇+卡铂组（PC组）和紫杉醇+洛铂组（PL组），每组各30例。观察并比较两组患者化疗后近远期临床疗效；采用荧光定量PCR和酶联免疫吸附试验分别检测血液ERCC1、β-catenin和β-tubulin Ⅲ的表达水平。 结果 PC组和PL组的总体有效率分别为76.66%和83.33%，疾病控制率为93.33%和96.67%；PL组的治疗有效率和疾病控制率均略高于PC组，但差异无统计学意义（P > 0.05）；PL组的不良反应发生率（16.67%）明显低于PC组（40.00%），差异有统计学意义（P < 0.05）；随访结果显示，两组1年、2年生存率、局部复发与转移率、平均生存时间比较差异均无统计学意义（P > 0.05）；PL组患者的ERCC1和β-tubulin Ⅲ的mRNA表达和蛋白含量均显著低于PC组，差异有高度统计学意义（P < 0.01）；但两组患者β-catenin的mRNA表达和蛋白含量比较差异无统计学意义（P > 0.05）。 结论 紫杉醇联合洛铂对晚期卵巢癌具有较好的临床疗效且不良反应少，ERCC1和β-tubulin Ⅲ表达水平的降低可能是其潜在的作用机制。

[关键词] 紫杉醇；洛铂；卵巢癌；核苷酸切除修复交错互补基因1；β-链蛋白；β3-微管蛋白

[中图分类号] R737.31 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2016）02（c）-0115-04

Efficacy of Paclitaxel combined with Lobaplatin in the treatment of the advanced ovarian cancer and its influence on the expression of ERCC1， β-catenin and β-tubulin Ⅲ

SONG Niyuan CHEN Xu LI Xia HE Xiaohong ZHANG Yan

Department of Obstetrics， the People's Hospital of Chongzhou City， Sichuan Province， Chongzhou 611230， China

[Abstract] Objective To explore the efficacy of Paclitaxel combined with Lobaplatin in the treatment of advanced ovarian cancer and its influence on the expression of nucleotide excision repair cross complementing gene 1 （ERCC1）， β-catenin and β-tubulin Ⅲ. Methods Sixty patients with advanced ovarian cancer from January 2008 to May 2013 in the People's Hospital of Chongzhou City were selected as the research objects， and divided into Paclitaxel plus Carboplatin group （PC group） and Paclitaxel plus Lobaplatin group （PL group） according to the different treatment， each group had 30 cases. After treatment， the short and long term clinical curative effects were observed and compared between the two groups. The expressions of β-tubulin Ⅲ， β-catenin and ERCC1 of the blood samples were detected by fluorescence quantitative PCR and ELISA assay. Results The overall efficiency rate of PC group and PL group were 76.66% and 83.33% respectively， and the disease control rate were 93.33% and 96.67% respectively. The overall efficiency rate of PL group was slightly higher than the PC group， no statistically significant difference was observed between two groups （P > 0.05）； the incidence of adverse reactions in the PL group （16.67%） was significantly lower than that in the PC group （40.00%）， the difference was statistically significant （P < 0.05）； the follow-up results showed that， the 1 year and 2 year survival rate， rate of local recurrence and metastasis and average survival time of two groups had no statistically significant difference （P > 0.05）； the mRNA expressions and protein contents of ERCC1 and β-tubulin Ⅲ of the PL group were significantly lower than those of the PC group， the differences were statistically significant （P < 0.01）， but no significant difference was found in the expression of β-catenin （P > 0.05）. Conclusion Paclitaxel combined with Lobaplatin has good clinical efficacy and less adverse reactions in the treatment of advanced ovarian cancer， and the reduced expression of ERCC1 and β-tubulin Ⅲ may be the potential mechanism.

[Key words] Paclitaxel； Lobaplatin； Ovarian cancer； ERCC1； β-catenin； β-tubulin Ⅲ

卵巢癌是临床上常见的妇科恶性肿瘤之一，病死率高居各类妇科肿瘤的首位[1]，治疗上以肿瘤细胞减灭术联合铂类药物化疗为主[2]。紫杉醇是红豆杉属植物中复杂的次生代谢物，对多种肿瘤均具有良好疗效[3]，洛铂则是一种稳定的水溶性铂类烷化剂，属于第3代铂类抗肿瘤药物[4]，本研究拟探讨紫杉醇与洛铂联合化疗策略的临床疗效和安全性及核苷酸切除修复交错互补基因1（excision repair cross complementing，ERCC1）、β-链蛋白（β-catenin）和β3-微管蛋白（β-tubulin Ⅲ）的表达水平变化。现总结报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2008年1月～2013年5月四川省崇州市人民医院（以下简称“我院”）诊治的60例卵巢癌患者为研究对象，年龄32～71岁，平均（40.54±7.36）岁；国际妇产科联盟分期[5]Ⅲ期42例，Ⅳ期18例；Karnofsky评分70～85分，平均（75.86±6.04）分；浆液型29例，黏液型21例，混合性浆液黏液型8例，透明细胞癌2例；低分化45例，中分化12例，高分化3例。纳入标准：①经组织病理学检查确诊卵巢癌，且CT或MRI检测均未发现明显的淋巴结转移；②肝肾功能、心电图检查及骨髓功能检查无明显异常；③未接受任何放疗或化疗，且无腹部或盆腔手术史；④Karnofsky评分均≥70分，可耐受全程的治疗；⑤预计生存时间>6个月。本研究经我院医学伦理委员会批准，所有患者及家属均知情同意并签署知情同意书。所有患者均经肿瘤细胞减灭术治疗，并根据术后化疗方案的不同将患者分为紫杉醇+卡铂组（PC组）和紫杉醇+洛铂组（PL组），每组各30例，两组患者一般资料比较，差异无统计学意义（P > 0.05），具有可比性。

1.2 治疗方案

PL组患者给予静脉滴注紫杉醇（辰欣药业股份有限公司，批准文号H20057404）135～175 mg/m2，静脉滴注洛铂（海南长安国际制药有限公司，批准文号H20080359）50 mg/m2，每21天为1个疗程；PC组患者则予以135～175 mg/m2紫杉醇静脉滴注；卡铂（齐鲁制药有限公司生产，批准文号H20020181）血药浓度-时间曲线下面积（area under the curve，AUC） = 5.0静脉滴注，每21天为1个疗程。治疗过程中详细观察患者不良反应发生的情况，计算不良反应发生率[6]。

1.3 实时荧光定量PCR法测定ERCC1、β-tubulin Ⅲ和β-catenin表达

分别采集化疗前后患者的血液，离心后提取RNA，行荧光定量PCR检测。PCR引物的合成均由上海Invitrogen公司承担完成，引物序列参考文献[7-8]。ERCC1：上游5'-TTGGCGACGTAATTCCCGA-3'，下游5'-CAGGTTGTGGTAGCGGAGG-3'；β-tubulin Ⅲ：上游5'-GTTCTGGGAA GTCATCAGTGATGA-3'，下游5'-GTCCGAGTCGCCCACGTA-3'；β-catenin：上游5'-GCCACAGGATTACAAGAAGC-3'，下游5'-CCACCAGAGTGAAAAGAACG-3'；GAPDH：上游5'-CCTCAAGATCATCAGCAAT-3'，下游5'-CCATCCACAG TCTTCTGGGT-3'。SYBR Green荧光PCR反应参数条件均为95℃，预变性5 min，1个循环；95℃变性10 s、退火延伸（ERCC1和β-tubulin Ⅲ，60℃；β-catenin，58℃）15 s，72℃ 20 s，持续40个循环；以2-ΔΔCt方法分别计算各样本各个基因的Ct值，并用GAPDH的Ct值进行校正。

1.4 酶联免疫吸附试验检测ERCC1、β-tubulin Ⅲ和β-catenin表达

分别采集化疗前后患者血液，采用酶联免疫吸附试验测定ERCC1、β-tubulin Ⅲ和β-catenin表达水平。其中，ERCC1、β-tubulin Ⅲ检测试剂盒购于上海朗顿生物科技有限公司；β-catenin检测试剂盒由上海拜力生物科技有限公司提供。检测步骤严格按照试剂盒说明书执行。

1.5 近期临床疗效评价

依据实体瘤疗效评价标准[9]评估临床疗效：①完全缓解（CR）：肿瘤完全消失且无新病灶出现，持续大于1个月；②部分缓解（PR）：肿瘤最大直径和最大垂直直径乘积缩小≥50%并持续1个月以上，其他病变无明显进行性加重；③稳定（SD）：肿瘤最大直径和最大垂直直徑乘积缩小<50%且增大≤25%；④进展（PD）：肿瘤最大直径和最大垂直直径乘积增大>25%。总体治疗有效率 = （CR+PR）/总例数×100%；疾病控制率=（CR+PR+SD）/总例数×100%。

1.6 远期随访观察

追踪随访观察2年，分别计算两组患者的平均生存时间、1、2年生存率及肿瘤复发或转移的发生率。

1.7 统计学方法

采用SPSS 19.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，两组间比较采用独立样本的Student-t检验；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验；应用Kaplan-Meier法计算两组患者的总体生存时间，Log-rank检验分析两组间生存时间的差异；以P < 0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者近期临床疗效比较

PL组的治疗总体有效率和疾病控制率均略高于PC组，两组比较差异均无统计学意义（χ2 = 0.417、0.351，均P > 0.05）。见表1。

表1 两组患者总体有效率和疾病控制率比较（例）

注：CR：完全缓解；PR：部分缓解；SD：进展；PD：进展

2.2 两组患者不良反应发生情况比较

PL组患者的总不良反应发生率明显低于PC组，差异有统计学意义（χ2 = 4.022，P < 0.05）。见表2。

表2 两组患者不良反应发生状况比较（例）

注：与PC组比较，*P < 0.05

2.3 两组患者远期临床疗效比较

两组患者1年生存率、2年生存率、局部复发与转移率和平均生存时间比较，差异均无统计学意义（P > 0.05）。见表3、图1。

表3 两组患者随访生存分析结果比较

图1 两组患者生存时间比较

2.4 两组患者ERCC1、β-catenin和β-tubulin Ⅲ的表达水平比较

PL组患者的ERCC1和β-tubulin Ⅲ的mRNA表达和蛋白含量均显著低于PC组，差异有高度统计学意义（P < 0.01）；但两组患者β-catenin的mRNA表达和蛋白含量比较差异无统计学意义（P > 0.05）。见表4。

3 讨论

紫杉醇联合卡铂的治疗方案是晚期卵巢癌术后化疗的标准方案，但有高达50%左右的患者在治疗结束后出现疾病的复发或对药物产生严重的耐受性，导致治疗失败[10-12]。而且，紫杉醇与卡铂的联合化疗方案也极易诱发外周神经毒性、骨髓抑制、消化道反应等诸多副作用[13-14]。本研究采用紫杉醇配合洛铂静脉滴注的方式治疗晚期卵巢癌患者，结果显示PL的总体治疗有效率、1年和2年生存率、平均生存时间均略高于PC组，但两组比较差异无统计学意义；PL组患者的不良反应发生率显著低于PC组，表明紫杉醇联合洛铂对患者机体的损伤较小，治疗效果相对更优，且在一定程度上可延长患者的生存时间。

研究显示，ERCC1的表达水平不仅与肿瘤细胞DNA损伤修复密切相关，还是导致铂类抗肿瘤药物耐药的关键基因[15-17]。本研究结果发现，PL组患者的ERCC1表达水平显著低于PC组，提示了紫杉醇联合洛铂对卵巢癌患者高表达的ERCC1水平有更为显著的抑制作用。β-tubulin Ⅲ即3型β微管蛋白，是抗微管药物作用的主要靶点，高表达的β-tubulin Ⅲ同样可以导致抗微管化疗药物的耐药[18-19]。本研究结果显示，PL组患者β-tubulin Ⅲ表达水平明显低于PC组，该结果充分表明紫杉醇配合洛铂的应用可显著增强抗微管药物紫杉醇对肿瘤细胞的杀伤效果。β-catenin是一种介导细胞黏附、增殖与凋亡的多功能蛋白，也是铂类药物耐药的关键因子[20-23]，但本研究结果发现，两组患者β-catenin的表达水平无明显差别，提示PL和PC用药策略对β-catenin的影响无明显差别，但β-catenin是否可作为卵巢癌疗效判定的指标尚需要大样本临床试验加以证实。

[参考文献]

[1] 杨念念，严亚琼，郑荣寿，等.中国2009年卵巢癌发病与死亡分析[J].中国肿瘤，2013，22（8）：617-621.

[2] 张爱臣，佟玲玲.卵巢癌的诊治进展[J].中国计划生育和妇产科，2013，5（1）：5-8.

[3] 陈霄红.紫杉醇联合卡铂治疗卵巢癌的临床研究[J].中国临床研究，2014，27（3）：327-329.

[4] Hoff PM，Saad ED，Costa F，et al. Literature review and practical aspects on the management of Lobaplatin-associated toxicity [J]. Clin Colorectal Cancer，2012，11（2）：93-100.

[5] 林仲秋，謝玲玲，李晶.FIGO2013卵巢癌，输卵管癌，腹膜癌新分期解读[J].中国实用妇科与产科杂志，2013，29（12）：921-923.

[6] Edwards IR，Aronson JK. Adverse drug reactions：definitions，diagnosis，and management [J]. The Lancet，2000，356（9237）：1255-1259.

[7] 陈可心，李琛，秦誉，等.ERCC1，TUBB3在上皮性卵巢癌中表达及其临床病理特征和相关性的研究[J].实用肿瘤学杂志，2014，28（4）：294-298.

[8] 张根豪，刘俊文，苏利沙，等.阿司匹林对人卵巢癌组织和SKOV3细胞SOX7表达和Wnt/β-catenin信号通路的影响[J].郑州大学学报：医学版，2015，10（2）：240-243.

[9] Edeline J，Boucher E，Rolland Y，et al. Comparison of tumor response by response evaluation criteria in solid tumors （RECIST） and modified RECIST in patients treated with sorafenib for hepatocellular carcinoma [J]. Cancer，2012，118（1）：147-156.

[10] Pignata S，Scambia G，Katsaros D，et al. Carboplatin plus Paclitaxel once a week versus every 3 weeks in patients with advanced ovarian cancer （MITO-7）：a randomised，multicentre，open-label，phase 3 trial [J]. Lancet Oncol，2014，15（4）：396-405.

[11] 賀凌云，朱炜，罗君玲.单周与3周紫杉醇联合卡铂方案治疗卵巢癌临床疗效分析[J].中国现代医药杂志，2015， 17（9）：12-15.

[12] 于俊丽.紫杉醇联合卡铂不同给药途径治疗卵巢癌52例疗效分析[J].中国现代药物应用，2015，9（3）：134-135.

[13] Pignata S，Scambia G，Ferrandina G，et al. Carboplatin plus Paclitaxel versus Carboplatin plus pegylated liposomal doxorubicin as first-line treatment for patients with ovarian cancer：the MITO-2 randomized phase Ⅲ trial [J]. J Clin Oncol，2011，29（27）：3628-3635.

[14] Dalton HJ，Yu X，Hu L，et al. An economic analysis of dose dense weekly Paclitaxel plus Carboplatin versus every-3-week Paclitaxel plus Carboplatin in the treatment of advanced ovarian cancer [J]. Gynecol Oncol，2012，124（2）：199-204.

[15] Steffensen KD，Waldstrom M，Jakobsen A. The relationship of platinum resistance and ERCC1 protein expression in epithelial ovarian cancer [J]. Int J Gynecol Cancer，2009，19（5）：820-825.

[16] 张自森，李灿宇，巴楠，等.晚期卵巢癌患者外周血与腹腔积液中ERCC1基因表达研究[J].中国妇幼保健，2013， 28（20）：3342-3344.

[17] 于艳丽，熊艳杰，田志华，等.上皮性卵巢癌DNA-PKcs和ERCC1表达与预后相关因素分析[J].中国临床新医学，2013，6（6）：519-523.

[18] 王秋芳，朱士娜，刘晖，等.卵巢上皮癌组织MyD88和β-Ⅲ微管蛋白表达[J].中华肿瘤防治杂志，2013，20（14）：1086-1089.

[19] 杜培，张晓薇，陈礼全，等.原发性上皮性卵巢癌患者中β-tubulinⅢ表达与紫杉醇化疗耐药的相关性研究[J].实用医学杂志，2014，30（7）：1107-1109.

[20] 胡雪梅，张继学，王瑞军，等.Ezrin、E-cadherin和β-catenin在卵巢癌组织中的表达及临床意义[J].兰州大学学报：医学版，2010，36（1）：31-34.

[21] 陈兰花，李荣岗，孙丽霞，等.β-catenin、P53和E-cadherin在食管鳞癌组织中的表达及临床病理研究[J].中国当代医药，2015，22（17）：61-63，66.

[22] 薛令军，李培梅，汤祎，等.β-连环素和P65在喉癌侵袭转移过程中的关系研究[J].中国当代医药，2013，20（6）：4-5，8.

[23] 张巧玲，杨永强.髓系白血病患者骨髓单个核细胞β-连环蛋白mRNA的表达[J].中国当代医药，2014，21（20）：4-7.

（收稿日期：2015-11-20 本文编辑：任 念）