MP1全自动干式生化分析仪总胆汁酸检测性能的评价

2016-10-19李亚丽沃燕波赵春燕

国际检验医学杂志 2016年18期

关键词：干式胆汁酸精密度

李亚丽，沃燕波，赵春燕

(1.甘肃省金昌市疾病预防控制中心　737100；2.宁波美康生物科技股份有限公司，浙江宁波 315100；3.宁波美康保生生物医学工程有限公司，浙江宁波 315100)

·临床研究·

MP1全自动干式生化分析仪总胆汁酸检测性能的评价

李亚丽1，沃燕波2，赵春燕3

(1.甘肃省金昌市疾病预防控制中心737100；2.宁波美康生物科技股份有限公司，浙江宁波 315100；3.宁波美康保生生物医学工程有限公司，浙江宁波 315100)

目的应用EP10-A2文件对MP1全自动干式生化分析仪总胆汁酸(TBA)检测性能进行评价。方法按照美国国家临床实验室标准化委员会(CLSI)颁布的EP10-A2文件，按特定顺序测定高、中、低浓度的TBA样本，连续5 d，计算测定结果的偏差、总不精密度，对截距、斜率、非线性、携带污染和漂移进行多元回归分析。结果低、中、高浓度TBA样本偏差分别为-0.2、-0.2和-0.3 mol/L；总不精密度分别为1.8%、1.3%和1.2%；截距、斜率、非线性、携带污染、漂移分别为-0.051、0.995、0.641、0.000和0.031，其t值分别为-0.255、-1.076、0.340、-1.785和0.642，差异均无统计学意义(P>0.01)。结论MP1全自动干式生化分析仪TBA检测准确度、精密度良好，线性良好，携带污染率较低，稳定性好，能初步满足临床检测的应用要求。

总胆汁酸；EP 10-A2；评价

健康者肝脏合成的胆汁酸有胆酸、鹅脱氧胆酸和代谢中产生的脱氧胆酸，还有少量石胆酸和微量熊脱氧胆酸，合称为总胆汁酸(TBA)。健康者的周围血液中TBA含量极微，当肝细胞受到损害或肝内、外阻塞时，胆汁酸代谢就会出现异常，TBA就会升高[1-2]。因此，TBA测定是1项比较敏感和有效的肝功能检测项目。目前在生化分析仪上主要采用循环酶法检测样本中的TBA水平[3]。近年来，基于微流控芯片的便携式即时检测(POCT)已经成为国内外研究的热点[4-5]。本文参照美国临床实验室标准化协会(CLSI)颁布的《定量临床检验方法的初步评价：批准指南EP10-A2》文件，对宁波美康保生生物医学工程有限公司结合微流控芯片技术开发的MP1全自动干式生化分析仪检测TBA的偏差、总不精密度、截距、斜率、非线性、携带污染和漂移进行分析，对其临床适用性进行了初步评估[6-7]。

1　材料与方法

1.1样本分析样本为购自Randox公司的定植质控，低值样本(批号：942UN)，靶值为26.7 mol/L；高值样本(批号：680UE)，靶值为47.9 mol/L。将上述高、低值样本以1∶1比例混合，得到中值样本，靶值为 37.3 mol/L。

1.2样本测定按照EP10-A2文件要求，每天按中、高、低、中、中、低、低、高、高、中的顺序测定各浓度样本，连续5 d。其中第1个中值作为测定起始用，不纳入统计，其余9个数据若有1个不合格，则需弃掉该批数据重新进行测定。

1.3绘图及数据处理以质控的靶值(X)作横坐标、实测值与靶值的差值(Y-X)作纵坐标作偏倚图；以质控的靶值(X)作横坐标、实测值(Y)作纵坐标作散点图；观察有无离群点及其线性情况。偏差允许范围设定为靶值±5%，总不精密度的允许范围设定为5%。

1.4统计学处理采用Microsoft Excel2003统计软件进行数据处理，计算偏差、总不精密度，对截距、斜率、非线性、携带污染、漂移作回归分析。其校正回归值作t检验，当t>4.6或t<-4.6时，P<0.01，差异有统计学意义。

2　结　　果

2.1绘图、目测观察离群点和线性MP1全自动干式生化分析仪TBA检测结果的偏倚图和散点图见图1、2，目测各浓度样本测定结果无离群点，精密度良好，实测值与靶值间线性良好。

图1　MP1全自动干式生化分析仪TBA检测实测值与靶值偏倚图

图2　MP1全自动干式生化分析仪TBA检测实测值与靶值散点图

2.2数据分析依照EP10-A2文件所设计的数据处理表格进行计算，得出最后统计结果。

2.2.1偏差评估以各浓度5 d测定结果的均值与其相对应的靶值之差计算偏差，试验结果显示，TBA各浓度的偏差均未超过设定的±5%范围，临床均可接受。结果见表1。

2.2.2总不精密度分析按EP10-A2文件提供的方法，计算总不精密度。结果显示TBA各浓度的总精密度均未超过允许不精密度，临床均可接受。结果见表2。

2.2.3测定结果多重回归分析对每天结果进行回归分析，计算每天TBA测定结果的截距、斜率、非线性、携带污染和漂移，结果见表3。结果显示，MP1全自动干式生化分析仪TBA检测结果的截距、斜率、非线性、携带污染和漂移差异均无统计学意义(-4.60.01)。

表1　　MP1全自动干式生化分析仪TBA检测结果偏差分析

表2　　MP1全自动干式生化分析仪TBA检测结果不精密度分析

表3　　MP1全自动干式生化分析仪TBA检测结果多元回归分析

注：当t>4.6或t<-4.6时，P<0.01，差异有统计学意义。

3　讨　　论

胆汁酸是内源性胆固醇在肝脏内的主要代谢产物，是胆汁中存在的一类胆烷酸的总称，以钠盐或钾盐的形式存在，目前认为血清TBA水平是唯一可同时反映肝脏分泌、肝脏合成与代谢以及肝细胞损伤三方面的血清学指标[1-2]。临床发现，TBA的测定与谷氨酸氨基转移酶等生化检查项目有同等的诊断效率，且体内TBA在反映肝功能改变上早于其他生化指标的变化，更具有特异性和灵敏性[8-9]。

目前检测TBA的方法有气相色谱、高效液相色谱、毛细管电泳(CE)和酶循环法[10]。不管是气相或液相色谱法测定TBA都需要衍生和水解，较为繁琐，不适合临床检测。而CE检测大都采用紫外检测，灵敏度较低。临床使用的酶循环法普遍采用各种大型全自动生化分析仪检测，由于大型全自动生化分析仪价格高，操作复杂，操作人员需要相关的专业知识和接受相应的培训，并且其使用配套条件要求高，需配备稳压电源、纯水机，占地面积大，维护费用高，需要专业人员定期保养，因此基层医疗机构或家庭个人都没有条件购买和使用。同时，大型医院患者多，检测手续繁琐、流程长、等待时间长，这也给患者带来了巨大的时间负担。

POCT是1项新兴的技术领域，主要特点是快速得出结果，操作简便，容易使用和小型化。随着诊断和辅助技术的进步，以及人们对疾病的认识及治疗水平提高的要求，POCT逐渐受到关注[4-5]。微流控芯片技术是21世纪最为重要的前沿技术之一，它把生物和化学等领域中所涉及的样品制备、反应、分离、检测及细胞培养、分选、裂解等基本操作单元集成到一块几十平方厘米(甚至更小)的芯片上，由微通道形成网络，以可控流体贯穿整个系统，是用以取代常规生物或化学实验室的各种功能的1种技术[4-5]。微流控芯片系统微型化、集成化和自动化的特点使得它很适合应用于现场和个体分析[11]。宁波美康保生生物医学工程有限公司开发的MP1全自动干式生化分析仪，结合了微流控芯片技术，可使以往实验室繁复的全血定量、血细胞血清分离、血清稀释等步骤在芯片上在线自动化完成，具有自动化程度高，灵敏度高，特异性好，标本采集后无需经过前处理、即时获得检验结果的特点。

笔者参照EP10-A2文件对该仪器TBA检测性能进行了初步评价，偏差评价结果显示，低、中、高浓度的绝对偏差均在允许偏差范围之内，故其偏差可接受，并且多元回归分析结果亦显示其斜率、截距的t值均在-4.6～4.6之间，其差异无统计学意义(P>0.05)，说明MP1全自动干式生化分析仪TBA检测的准确度较好。对精密度分析结果显示，低、中、高浓度的总不精密度均小于允许总不精密度，说明其精密度也符合临床应用要求。多元回归分析结果显示，携带污染、非线性的差异均无统计学意义，说明其线性能力良好，携带污染率低。因此，从评估结果可见MP1全自动干式生化分析仪TBA检测准确度、精密度良好，线性良好，携带污染率较低，稳定性好，能初步满足TBA检测的应用要求。由于EP10-A2文件的评价方法建立于初步评价的基础之上，忽略了很多影响因素，因此该仪器TBA检测的性能还有待于应用CLSI的其他文件进行进一步评价[12-13]。

随着“十一五”计划针对三级及二级医院基础设备的购置与加强，目前中级以上医院已具备良好的软硬件设施，但是基层医疗机构特别是卫生院、卫生所等单位全自动生化检验仪器设施普遍不足，也没有足够数目的检验专业人员。与传统的全自动生化分析仪TBA检测比较，MP1全自动干式生化分析仪定量测定TBA的方法不仅操作简便，各项性能良好，并且由于测定所用的试剂盘片采用了真空冷冻干燥技术和微流控芯片技术，检测试剂以冻干小球的形式存放于盘片中，携带方便，因此非常适用于在基层医疗机构推广使用。

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