四种产地蛇床子药材质量分析比较

乔　燕, 杨希凤 ，武　培，徐　崇，王　宁，荣祥宇，孙静波,张新勇

( 安徽科技学院　食品药品学院，安徽　凤阳　233100)



四种产地蛇床子药材质量分析比较

乔燕, 杨希凤 ，武培，徐崇，王宁，荣祥宇，孙静波,张新勇*

( 安徽科技学院食品药品学院，安徽凤阳233100)

目的：通过不同实验方法，对湖北、安徽、浙江、山东四种产地蛇床子药材,进行品种和质量的实验分析，确定品质较优的蛇床子产地。方法：将四种产地蛇床子药材用95%乙醇回流提取，再经浓缩、离心、吸附获得供试品。以蛇床子中总香豆素为研究指标，采用性状分析、紫外分光光度法和薄层分析法测定四种产地蛇床子的总香豆素含量，综合分析进行比较。结果：紫外分光光度法测得山东、湖北、浙江、安徽四个产地的蛇床子，同一水平下的提取物在标准曲线上对应的浓度分别是0.1033 mg/mL、0.0181 mg/mL、0.0976 mg/mL、0.1096 mg/mL。薄层分析与标准品的对照显示中，四种产地的蛇床子以安徽的荧光点最大，山东次之，浙江产地的荧光点比湖北产地明显。结论：以香豆素为指标，四个产地中蛇床子的质量优质顺序为安徽>山东>浙江>湖北。

蛇床子；总香豆素;质量分析；紫外分光光度法；薄层分析

蛇床子Cnidiummonnieeri(L.)Cuss是伞形科植物的干燥成熟果实。性辛、温，有小毒，归肾经。主要功能有温肾壮阳、燥湿，祛风，杀虫。用于阳痿，宫寒，寒湿带下，湿痹腰痛；外治外阴湿疹，妇人阴痒，滴虫性阴道炎[1]。据近代药理研究蛇床子有止痒作用[2],抗炎作用[3]、抗皮肤过敏[4]、防治骨质疏松症[5]等作用。蛇床子的主要有效成分为香豆素类和挥发油，其中香豆素是各种蛇床子药材具有生理活性的主要成分，而蛇床子素、欧前胡素分别占总香豆素含量的第一、第二[6]。

目前，对蛇床子的研究已经逐渐深入。刘国林等人采用红外光谱分析技术对不同类别和产地的42种蛇床子进行分析，结果显示，不同地域的蛇床子在红外光谱上存在一定差异性[7]。秦路平等人在研究蛇床子生物学及其应用时发现，不同产地蛇床子对细菌和真菌的抑制作用有一定差异[8]。曹晖等人，采用PCR直接测序技术，对蛇床子中叶绿素matk基因进行分析研究，根据排序比较,蛇床子6个居群间的matK基因序列和氨基酸序列均存在变异位点，邻接法构建的系统分支树表明蛇床子居群间的亲缘关系与地理分布及所含香豆素化学型呈良好的相关性[9]。亦有使用CO2超临界方法对蛇床子的含量进行测定，结果表明采用超临界萃取法可以将蛇床子中蛇床子素基本提取完全[10]。目前采用紫外分光光度计法和薄层分析法测定蛇床子含量的方法已经存在，采用这两种方法进行测定简单易行，两者对比使用，结果更加准确可靠。

从目前的研究来看，多数是针对蛇床子药材的某项含量或药理性质进行研究分析，结合产地分析其质量的研究较少。故本试验对四种产地的蛇床子药材进行客观性的性状比较，以蛇床子素为对照品，采用紫外分光光度法和薄层分析法，对比湖北、安徽、浙江、山东四种产地蛇床子药材的质量，选出品质较优的蛇床子产地，为蛇床子药材的进一步研究提供依据。

1　材料与方法

1.1仪器与材料

紫外分光光度计T6新世纪(北京普析通用有限责任公司)；旋转蒸发器RE 52-98(上海亚荣生化仪器厂)；离心机LG10-2.4A(北京医用离心机)；硅胶板H 100 mm*200 mm(安徽良臣硅源材料有限公司)；紫外灯；电子天平；抽滤装置；水浴锅；展开缸(10*20 cm)；100 mL容量瓶；100 mL烧杯等。七月下旬到八月间采集的四种产地蛇床子药材，其中湖北蛇床子药材采自大别山、安徽蛇床子药材采自淮南、浙江蛇床子药材采自浙江药材市场(大盘山)、山东药材采自亳州药材市场。经本院刘汉珍老师鉴定均为伞形科植物蛇床子Cnidiummonnieeri(L.) Cuss的干燥成熟果实；蛇床子素对照品(110822-201405)，购自上海哈灵生物科技有限公司；微量定量点样管(1 μL)；石油醚(60-90 ℃)、乙酸乙酯、95%乙醇均为分析醇，药用活性炭，实验用水均为蒸馏水。

1.2《中国药典》中蛇床子药材性状规定

本品为双悬果，呈椭圆形，长2～4 mm，直径约2 mm。表面灰黄色或灰褐色，顶端有2枚向外弯曲的柱基，基部偶有细梗。分果的背面有薄而突起的纵棱5条，接合面平坦，有2条棕色略突起的纵棱线。果皮松脆，揉搓易脱落。种子细小，灰棕色，显油性。香气，辛味凉，有麻舌感。

1.3试验设计

取蛇床子药材30 g,加300 mL 95%乙醇浸润10 min，再水浴加热连续提取3次，第一次提取40 min，后两次提取30 min。水浴温度控制在85～90 ℃，合并提取液，55 ℃浓缩回流至50 mL，以 2500 r/min转速离心30 min,取上清液，加6 g活性炭趁热吸附，迅速抽滤，用95%乙醇定容至100 mL。取定容后溶液10 mL稀释1000倍待用。再采用紫外分光光度法和薄层分析法进一步分析比较。

1.4测定项目及分析方法

1.4.1标准品波长扫描配置不同浓度的蛇床子素标准液，使用紫外分光光度计扫描波长，在合适浓度下测得蛇床子标准品的波长。

1.4.2标准曲线的制作取蛇床子素对照品10.00 mg，用电子天平精密称定，置100 mL烧杯中，搅拌，使溶解，并完全转移至100 mL容量瓶中，加95%乙醇定容，摇匀。取适量配制好对照品溶液，加95%乙醇稀释,摇匀，配成浓度分别为0.01 mg/mL、0.02 mg/mL、0.03 mg/mL、0.04 mg/mL、0.05 mg/mL ，在322 nm波长处测定吸收度,并以浓度C(mg/mL)为横坐标,吸光度为纵坐标进行线性回归。等体积准确进样，通过扫描，得出标准曲线。

1.4.3紫外-可见分光光度法测定供试品吸光度蛇床子中主要成分为香豆素类化合物[11-12]。根据蛇床子中香豆素类化合物在波长322 nm处紫外吸收程度不同，进行测量。实验中，以蛇床子素溶液为对照组，不同产地蛇床子的提取物为供试品溶液。在规定波长322 nm处测定供试品溶液和对照品溶液的吸光度。

1.4.4薄层色谱法比较将四个不同产地蛇床子的提取物配制成一定浓度的供试溶液，以同一浓度蛇床子标准品为对照，用毛细管进行点样，以石油醚-乙酸乙酯(5.5 ∶1)为展开剂，使展开剂展开到硅胶板2/3处，取出，干燥后，放入紫外灯下观察。

2　结果与分析

2.1外观分析

性状鉴定结果显示山东、湖北、浙江、安徽蛇床子均为双悬果，呈椭圆形，长2～4 mm，其中山东蛇床子表面灰黄略有青色，湖北蛇床子表面灰褐色，浙江、安徽蛇床子表面灰黄色。四地蛇床子顶端均有两枚向外弯曲的柱基，基部偶有细梗。分果的背面有薄而凸起的纵棱5条，接合面平坦，有2条略凸起的纵棱线，其中安徽蛇床子多椭圆8翅，为分果未分开，其他三个产地蛇床子有此现象但无安徽蛇床子明显。果皮松脆，揉搓易脱落。种子细小，灰棕色，显油性。香气，辛味凉，有麻舌感。主观分析四地蛇床子以浙江产地蛇床子最为纯净，安徽次之，湖北最次；饱满度以山东最优，浙江次之，湖北最次。

2.2紫外测定标准曲线线性

使用紫外分光光度计扫描波长，在浓度为0.04 mg/mL浓度下测得蛇床子素标准品的最大波长为322 nm，如图1所示。

图1　标准品波长扫描

图2　蛇床子素标准曲线

在322 nm波长处扫描不同浓度蛇床子素标准液,并以浓度C(mg/mL)为横坐标,吸光度为纵坐标进行线性回归紫外测定标准曲线线性方程为：Conc.=(0.0184)*A+(-0.0015),r=0.9954

2.3结果比较

结合紫外标准曲线方程和四种产地的药材的吸光度得出数据，数据显示四种产地其中香豆素含量较高的是安徽产区，最低的是湖北地区。

表1　各地蛇床子供试品的吸光度测定结果及计算所得浓度

2.4薄层层析

四种不同产地蛇床子的提取物配制成一定浓度的供试溶液，以同一浓度蛇床子素标准品为对照，在硅胶板上点样，所得薄层现象如图3。

图3　四种产地的蛇床子与标准品薄层分析图

3　结论与讨论

本研究中通过各地蛇床子干燥果实(药材)的外观比较，初步判断各产地蛇床子药材的优劣。四种不同产地来源的蛇床子药材药理作用的有效成分主要是香豆素类[10]，香豆素类成分中蛇床子素含量用外标法计算为29.97%，较有代表性。其中香豆素类成分蛇床子素的薄层图谱如图3，通过四种产地蛇床子素供试品溶液与蛇床子素标准溶液的薄层色谱图，对比图谱中不同产地的蛇床子供试品展开斑点，对药材质量进行评价，安徽产地蛇床子较其他三种产地图谱斑点明显，质量较优。而其他产地相对较次，粗略的认为，薄层研究测定的总香豆素含量由高至低分别为安徽、山东、浙江、湖北。

通过本实验紫外分光光度计法的分析，根据平行实验原则，记录各供试品吸光度，计算各浓度，比较浓度大小。数据显示四种产地的蛇床子中香豆素含量最高的是安徽，最低的是湖北，见表1。从表1看出：浙江与山东香豆素含量高于湖北，可被认为是质量较好的蛇床子药材；安徽高于山东、浙江，被认为是四种产地中质量最好的蛇床子药材；湖北药材含量浓度较低说明与对照药材差别较大，能否作为合格药材使用还需要进一步研究。

实验结果显示薄层法与紫外分光光度法所得的实验结果非常一致。蛇床子是临床常用中药,目前临床上多取其燥湿、杀虫作用,外用治疗外科、妇科及皮肤科诸疾。随着蛇床子治疗真菌，抗肿瘤新作用的发现,以及我国对中药新品开发的重视程度越来越高，为了使蛇床子有广阔的应用前景，因此辨清道地产区的蛇床子就显得尤为重要。本实验的蛇床子的性状分析为蛇床子药材道地性提供一定的的线索，同时薄层色谱和紫外吸光度的分析，对于道地药材的品质评价能够起到指导性作用，本研究也可为评价蛇床子的质量提供参考依据。

[1]国家药典委员会．中华人民共和国药典[M]．北京：化学工业出版社，2009：315．

[2]彭涛，冯玛莉，周然．蛇床子止痒有效成分的筛选[J]．中国药物与临床，2002，2(5)：283-285．

[3]张志祖，胡晓，周俐，等．蛇床子总香豆素的抗炎作用[J]．赣南医学院学报，1995，06(2)：87-89．

[4]武蕾蕾，许晓义．蛇床子抗皮肤过敏实验研究[J]．牡丹江医学院学报，2011，32(3)：8-10．

[5]魏显招，敏郭惠，汪滋民．蛇床子有效成分防治骨质疏松症的研究进展[J]．上海中医药杂志，2010，44(2)：73-75．

[6]张新勇，向仁德．蛇床子化学成分的研究[J]．中草药，1997，28(10)：588-590．

[7]刘国林，蔡金娜，李伟，等．近红外光谱技术在中药蛇床子分类中的应用[J]．计算机与应用化学，2000，17(1)：109-110．

[8]秦路平，张卫东，张汉明.蛇床子生物学及其应用[M].四川，成都科技大学出版社，1996.

[9]曹晖;蔡金娜;刘玉萍．蛇床子地理分布与叶绿体matK 基因序列的相关性分析[J]．中国药学杂志，2001，36(6)：373．

[10]典灵辉，吴铁，崔燎．蛇床子二氧化碳超临界萃取物中有效成分的含量测定[J]．时珍国医国药，2009，20(4)：853-854．

[11]张立坚，李宝红，庄海旗，等．蛇床子素-聚乙二醇6000固体分散体中蛇床子素含量的测定[J]．广东医学院学报，2004，22(4)：418-419．

(责任编辑：马世堂)

Four Habitats Research and Analysis of the Quality ofFructusCnidii

QIAO Yan, YANG Xi-feng,WU Pei，XU Chong,WANG Ning,RONG Xiang Yu ,SUN Jing-bo，ZHANG Xin-yong*

( College of Food and Drug, Anhui Science and Technology University, Fengyang 233100, China)

Objective:the experiment of variety and quality was carried out in different kinds of methods in Hubei, Anhui, Zhejiang, Shandong four areas ofFructusCnidii, to determine the superior quality of Fructus Cnidii origin.Methods: Four herbs sampled with 95% ethanol extraction, concentration, centrifugal and absorption.Indicators of total coumarins in Fructus cnidii were used for research, by UV spectrophotometry method and thin-layer analysis method for the determination of total coumarins of Fructus cnidii from four habitats content analysis for comparison.Results: The UV spectrophotometer measured in Shandong, Hubei，Zhejiang,Anhui four areas with a concentration of extract of Fructus Cnidii, the concentration of the extract on the standard curve at the same level is 0.1033mg/mL, 0.0181 mg/mL, 0.0976 mg/mL, 0.1096 mg/mL.TLC analysis revealed that the control standard in four different places in Anhui's largest Osthol fluorescence point, Shandong times , Zhejiang origin of fluorescence better than Hubei origin significantly. Conclusion: Taking coumarin as indicators, four quality of osthole is in order for Anhui > Shandong > Zhejiang > Hubei.

frutus cnidii;coumarins;quality analysis;ultraviolet spectrophotometry ;thin-layer chromatography

2016-02-01

安徽省大学生创新创业计划(108792015054)。

乔燕(1993-)，女，安徽省阜阳市人，在读本科生，主要从事中药学研究。*通讯作者：张新勇，研究员，E-mail:zhangxy@ahstu.edu.cn。

R917

A

1673-8772(2016)04-0042-04