HPLC法测定注射用双黄连（冻干）中5-羟甲基糠醛含量

栾　兰，　 任嘉鹏，　 王钢力，　 林瑞超，　 李先加*

（1. 北京医药集团职工大学，北京 100079；2. 北京诺信达医药企业管理有限公司，北京 100020；3. 中国食品药品检定研究院，北京 100050；4. 北京中医药大学，北京100029；5. 漯河医学高等专科学校，河南 漯河，462002）

HPLC法测定注射用双黄连（冻干）中5-羟甲基糠醛含量

栾兰1， 任嘉鹏2， 王钢力3， 林瑞超4， 李先加5*

（1. 北京医药集团职工大学，北京 100079；2. 北京诺信达医药企业管理有限公司，北京 100020；3. 中国食品药品检定研究院，北京 100050；4. 北京中医药大学，北京100029；5. 漯河医学高等专科学校，河南 漯河，462002）

建立了HPLC测定注射用双黄连（冻干）中5-羟甲基糠醛的含量，采用Agilent TC-C18色谱柱（250×4.6 mm，5 μm），以甲醇―水为流动相，梯度洗脱，流速1.0 mL/min，检测波长284 nm，柱温35℃。结果表明，5-羟甲基糠醛能得到很好的分离，线性关系良好，平均回收率在97.06%～103.41%之间。该方法准确、简便、重现性好，可以实现注射用双黄连（冻干）多成分质量控制。

HPLC；注射用双黄连（冻干）；5-羟甲基糠醛

注射用双黄连（冻干）为中药抗菌抗病毒的著名方剂，是由金银花、黄芩、连翘三味中药经提取、精制、冷冻干燥所得的供静脉滴注的中药粉针剂，对呼吸道合胞病毒、流感病毒、疱疹病毒、腺病毒及麻疹病毒等具有显著地抑制作用，是一种广谱的抗病毒药物[1]。有报道称5-羟甲基糠醛是葡萄糖等单糖化合物在高温或弱酸等条件下脱水产生的一个醛类化合物，该化合物可能引发并促进肠小囊异常生长及具有一定程度的基因毒性[2-3]。本文对注射用双黄连（冻干）中的5-羟甲基糠醛进行测定，所建立的方法简便、准确度高、重复性好，能更好的控制注射用双黄连（冻干）的质量，并为其安全性研究提供参考依据。

1　实验

1.1仪器与试药

注射用双黄连（冻干），哈药集团中药二厂；甲醇，色谱纯，J.J.Baker公司；重蒸水；5-羟甲基糠醛对照品，中国药品生物制品检定所提供。

高效液相色谱仪（Waters 2998型二极管阵列检测器，Waters公司），AE 240型十万分之一电子分子天平（METTLER公司），KQ=250 DE型医用数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），MiLLi-Q超纯水处理系统。

1.2色谱条件

色谱柱，AgiLent Zorbax SB-C18（250×4.6 mm，5 μm）；检测波长，284 nm；柱温，35℃；流动相，A相为水（V/V），B相为甲醇，流速1.0 min/mL；洗脱程序如表1所示。

表1　HPLC梯度洗脱程序

1.3溶液配制

对照品溶液的制备：精密称取5-羟甲基糠醛对照品6.25 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，从中精密吸取1 mL，置50 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。

供试品溶液的制备：精密称取供注射用双黄连（冻干）样品89.9 mg置10 mL容量瓶中，加水定容，摇匀，即得。

2　结果与讨论

2.1标准曲线线性关系的考察

取上述对照品溶液，分别进样1.0、3.0、6.0、9.0、12.0 μL，记录色谱图，如图1所示。以各对照品浓度为横坐标，峰面积对数为纵坐标，分别绘制标准曲线，线性回归得回归方程y＝8E＋06 x＋1 485.4，r＝0.999 7，线性回归曲线表明，在2.5～30 μg进样量范围内，5-羟甲基糠醛的进样量与色谱峰峰面积分值程良好的线性关系。结果见图2和表2所示。

图1　5-羟甲基糠醛对照品色谱图

表2　5-羟甲基糠醛线性关系考察试验结果

2.2检测方法准确性考察

2.2.1精密度试验

精密吸取同一上述混合对照品溶液10 μL，注入高效液相色谱仪，连续进样5针，记录色谱图，计算仪器精密度，结果如表3所示。由表3可见，5-羟甲基糠醛峰面积的相对标准偏差（RSD）＝2.7%，表明本法精密度良好。

表3　5-羟甲基糠醛精密度考察试验结果

2.2.2重复性试验

按所拟订的“含量测定”项下方法，对同一批样品，平行制备5份供试品溶液，进样10 μL，分别计算各测定成分的含量，结果如表4所示。由表4可见，5-羟甲基糠醛含量的相对标准偏差（RSD）＝3.0 %，表明本法重复性良好。

表4　5-羟甲基糠醛重复性考察试验结果

2.2.3稳定性试验

图2　5-羟甲基糠醛标准曲线

按拟订的“含量测定”项下方法，对同一供试品溶液，分别在室温下放置0、1、2、4、8 h，精密吸取10 μL注入高效液相色谱仪，测定，结果如表5所示。由表5可见，5-羟甲基糠醛在8 h之内基本稳定。

表5　5-羟甲基糠醛稳定性考察试验结果

2.2.4 加样回收试验

采用加标回收法，精密量取已知准确含量的注射用双黄连样品为基底，精密加入5-羟甲基糠醛（C＝2.5 μg/mL）1.3 mL依法测量，测定加标回收率，结果如表6所示。

表6　5-羟甲基糠醛回收率测定结果

2.3样品含量测定

图3是注射用双黄连（冻干）样品色谱图。按所拟订的含量测定方法，测定了6批双黄连注射液样品中5-羟甲基糠醛的含量，结果如表7。

图3　5-注射用双黄连（冻干）样品色谱图

表7　双黄连注射液样品中5-羟甲基糠醛的含量

3　结论

药典关于该品种的质量标准中未涉及5-羟甲基糠醛的限量要求，但是鉴于其安全性评价的相关研究结果[4]，对其含量进行监测应该引起足够的重视，确保用药安全。本研究测定了6批注射用双黄连（冻干）中5-羟甲基糠醛的含量，平均为0.113‰，所建立的方法简便、准确度高、重复性好，能更好的控制注射用双黄连（冻干）的质量，并为其安全性研究提供参考依据。

[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典[S]. 一部. 北京: 化学工业出版社, 2001: 135.

[2] Zhang X M, Chan, C C, Stamp D, et al. Initiation and promotion of colonic aberrant crypt foci in rats by 5-hydroxymethyl-2-furaldehyde in thermolyzed sucrose[J]. Carcinogenesis, 1993, 14(4): 773-775.

[3] Surh Y J, Tannenbaum S R. Activation of the Maillard reaction product 5-(hydroxymethy) furfural to strong mutagens via vallylic sulfonation and chlorination[J]. Chem Res Toxicol, 1994, 7(3): 313-318.

[4] 张玉玉, 宋戈, 李全宏. 食品中糠醛和5-羟甲基糠醛的产生机理、含量检测及安全性评价研究进展[J]. 食品科学, 2012, 33(5): 275-280.

HPLC Determination of 5-HMF in Shuanghuanglian Injection

LUAN Lan1,REN Jia-peng2,WANGgang-li3,
LIN Rui-chao4,LI-Xian-jia5*
（1. China Academy of Chinese Medical Sciences, China Academy of Traditional Chinese Medicine, Beijing 100700, China;
2. Beijing NuoXinDa Pharmaceutical Enterprise Mananement Co., Ltd, Beijing 100020, China;
3. National institute for Food and Drug Control, Beijing 100050, China;
4. Bejing university of Chinese Medicine, Beijing 100029, China
5. Luohe Med & Cal College, Luohe 462000, China）

To establish an HPLC method for the determination of 5-HMF in Shuanghuanglian Injection. The optimal conditions of separation and detection were achieved on an TC-C18(250×4.6 mm, 5 μm) eluted with agradient of methanol and water, at a flow rate of 1.0 mL/min, detected at 284 nm. Thegood resolution can be achieved and the method was linear over the investigated concentration range. The average recovery was between 97.06%～103.41%, and the method was accurate, easy and reproducible, which could be applied to quality control of Shuanghuanglian Injection.

HPLC; Shuanghuanglian Injection; 5-HMF

R284.1

A

1009-220X(2016)02-0043-05 DOI: 10.16560/j.cnki.gzhx.20160204

2015-12-21

栾 兰（1978～），女，博士研究生；主要从事中药化学成分及质量控制的研究。

李先加（1976～），男，硕士，副教授；主要从事生物化学的研究。nzr110@163.com