麝香乌龙丸对中医不同证型类风湿关节炎血清MIF、ICAM-1、VCAM-1表达的影响

毕东敏，魏建芬，张万壮，李秀芝，张瑞凤，刘海涛，蔡江南，苗 柳，袁 强，王志文

（1.华北理工大学附属医院，唐山 063000；；2.华北理工大学，唐山 063000）

麝香乌龙丸对中医不同证型类风湿关节炎血清MIF、ICAM-1、VCAM-1表达的影响

毕东敏1，魏建芬1，张万壮1，李秀芝1，张瑞凤1，刘海涛1，蔡江南2，苗 柳2，袁 强1，王志文1

（1.华北理工大学附属医院，唐山 063000；；2.华北理工大学，唐山 063000）

目的：探讨麝香乌龙丸对中医不同证型类风湿关节炎（RA）血清巨噬细胞移动抑制因子（MIF）、细胞间黏附分子1（ICAM-1）、血管细胞粘附分子1（VCAM-1）表达的影响。方法：选取华北理工大学附属医院风湿免疫门诊及住院收治的类风湿关节炎患者90例，按照随机数字表法分为两组，每组45例；对照组采用白芍总苷胶囊治疗，观察组采用麝香乌龙丸；对比两组患者治疗前后血清C反应蛋白（CRP）、血沉（ESR）、类风湿因子（RF）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白介素1β（IL-1β）、MIF、ICAM-1、VCAM-1的水平变化。结果：观察组总有效率93.33%，明显高于对照组73.33%；两组治疗后血清CRP、ESR、RF、TNF-α、IL-1β的水平均显著下降；观察组治疗后血清CRP、ESR、RF、TNF-α、IL-1β的水平显著低于对照组；两组治疗后血清MIF、ICAM-1、VCAM-1的水平均显著下降；观察组治疗后血清MIF、ICAM-1、VCAM-1的水平显著低于对照组。结论：麝香乌龙丸能显著减轻类风湿关节炎的炎性反应，降低血清MIF、ICAM-1、VCAM-1的水平。

麝香乌龙丸；类风湿关节炎；MIF；ICAM-1；VCAM-1

类风湿关节炎（RA）的西药治疗主要是针对炎症的各个环节，主要治疗药物包括非甾体抗炎药、改善病情药物、糖皮质激素、生物制剂等［1］。许多药物有明显的副作用，患者耐受性及依从性差。而生物制剂疗效好但价格昂贵，给患者造成较大的经济负担。因此，探讨中医药治疗RA的机制，发掘有效且毒副作用小的中药制剂，成为国内RA治疗的一个研究热点［2］。麝香乌龙丸是在挖掘宋代《普济本事方》麝香圆的基础上，经反复工艺研究和多年临床应用研制而成的纯中药制剂，临床上治疗类风湿关节炎具有较好疗效［3］。我们通过探讨该药对患者血清MIF、ICAM-1、VCAM-1的影响，进一步明确可能的作用靶点及机制，从而为临床有效运用麝香乌龙丸治疗RA提供新的理论依据。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2014年7月～2015年6月华北理工大学附属医院风湿免疫门诊及住院收治的类风湿关节炎患者90例，按照随机数字表法分为两组，每组45例。观察组男28例，女17例，年龄39～73岁，平均（47.98±6.14）岁，病程3～12年，平均（6.17±1.05）年，按关节功能可分为Ⅰ级9例，Ⅱ级25例，Ⅲ级11例；按X线分期可分为Ⅰ期12例，Ⅱ期21例，Ⅲ期12例；按中医病证可分为风寒湿痹证19例，风湿热痹证17例，痰瘀凝滞证6例，肝肾亏损证3例。对照组男27例，女18例，年龄37～75岁，平均（48.04±5.83）岁，病程2～13年，平均（6.01±1.24）年，按关节功能可分为Ⅰ级11例，Ⅱ级24例，Ⅲ级10例；按X线分期可分为Ⅰ期13例，Ⅱ期22例，Ⅲ期10例；按中医病证可分为风寒湿痹证19例，风湿热痹证17例，痰瘀凝滞证6例，肝肾亏损证3例。两组性别、年龄、病程、关节功能、X线分期、中医病证对比差异无显著性意义（P＞0.05），具有可比性。

1.2 诊断标准 西医诊断标准［4］：符合①关节晨僵至少持续1个小时；②出现软组织水肿或积液的关节数≥3个；③指间关节、掌指关节、腕关节中至少1个出现关节肿胀；④有对称性关节炎；⑤有类风湿结节；⑥血清类风湿因子（RF）呈阳性；⑦X线片显示关节间隙狭窄、骨质疏松或其它骨损病变。上述7项中满足4项即可诊断为类风湿性关节炎。

中医诊断标准：符合《实用中医风湿病学》中相关诊断标准［5］，①风寒湿痹证，主症，关节肿胀、疼痛、屈伸不利，有灼热感，晨僵；次症，全身酸痛、恶寒恶湿；舌红苔白黄，脉濡数。②风湿热痹证，主症，关节红肿、疼痛，得凉疼痛减轻；次症，关节晨僵、肿胀、活动不利、灼热感，舌红苔黄或腻，脉滑数或濡数。③痰瘀凝滞证，主症，关节畸形、肿胀、刺痛；次症，活动痛甚，屈伸不利，皮肤干燥、无弹性或有瘀斑、紫癜，皮下结节；舌暗紫或淡苔白腻，脉沉细。④肝肾亏损证，主症，关节畸形，消瘦，骨节烦痛；次症，关节僵硬，活动不利，肌肉萎缩，疲乏、气短、心悸、大便稀，舌淡苔白，脉沉细。

1.3 纳入和排除标准 纳入标准：①关节功能及X线分期I～III级者；②30d内未接受相关治疗者；③患者同意知情；④符合西医及中医诊断标准。

排除标准：①关节功能IV级或X线分期IV级；②关节严重畸形；③合并其他免疫系统病变；④心、肝、肺、肾、造血系统、神经系统等严重疾病患者；⑤严重消化性溃疡患者；⑥依从性差或精神异常者。

1.4 治疗方法 对照组：口服白芍总苷胶囊（宁波立华制药有限公司，批准文号：国药准字H20055058，规格：0.3g/片），每日3次，每次2片，连续治疗60d。

观察组：口服麝香乌龙丸（由颈复康药业集团加工），每日2次，每次30粒，连续治疗60d。

1.5 疗效标准 参照《实用中医风湿病学》中相关标准拟定。如下6项内容：①晨僵低于15分钟；②无疲乏感；③关节无压痛；④关节疼痛消失；⑤关节无软组织肿胀；⑥患者ESR（男）≤20mm/h，（女）≤30mm/h。

痊愈：满足6项内容；显效：符合5项内容；有效：符合3～4项内容；无效：符合＜3项内容。总有效率=（痊愈例数+显效例数+有效例数）/全部例数×100%。

1.6 观察指标 于治疗前及末次治疗后晨起空腹条件下抽取静脉血5mL，留存于无菌非抗凝试管中，在采集后2h内，3000r/min 条件下离心 10min，留取上清液分装于Eppendorf管中，快速冷冻，置-80 ℃深低温冰箱保存待测。应用免疫速率散射比浊法检测患者血清CRP、RF水平变化；采用血沉分析仪（Ves-matic20型）运用魏氏法检测ESR水平变化；采用放射免疫法检测血清TNF-α、IL-1β水平变化；应用酶联免疫吸附双抗体夹心法测定各组患者治疗前后血清中MIF、ICAM-1、VCAM-1的含量，试剂盒均由美国贝克曼公司生产。

1.7 统计学处理 运用SPSS21.0数据处理，疗效等计数资料运用百分率表示，行χ2检验；生化指标等计量资料采用mean±SD表示，符合正态分布的计量资料组内比较行配对t检验，组间比较行独立样本t检验，以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组疗效比较 观察组总有效率93.33%，对照组为73.33%，两组对比差异有显著性意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组疗效比较

2.2 两组治疗前后血清CRP、ESR、RF、TNF-α、IL-1β水平变化 两组治疗后血清CRP、ESR、RF、TNF-α、IL-1β的水平均显著下降（P＜0.05）；观察组治疗后血清CRP、ESR、RF、TNF-α、IL-1β的水平显著低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 两组治疗前后血清CRP、ESR、RF、TNF-α、IL-1β水平变化

2.3 两组治疗前后血清MIF、ICAM-1、VCAM-1水平变化 两组治疗后血清MIF、ICAM-1、VCAM-1的水平均显著下降（P＜0.05）；观察组治疗后血清MIF、 ICAM-1、VCAM-1的水平显著低于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表3。

表3 两组治疗前后血清MIF、ICAM-1、VCAM-1水平变化

3 讨论

RA是以关节炎症为主的慢性反复发作的全身性疾病，是最常见的系统性自身免疫病。我国类风湿关节炎的患病率约为0.32%～0.36%，且有增长趋势。RA的基本病理变化为滑膜炎和血管翳形成，多种细胞因子、抗原抗体及粘附分子等参与［6］。滑膜炎反复发作可导致骨质、关节软骨和关节囊的破坏，最终可致关节变形及活动明显受限。近年来在分子生物学、免疫学、遗传学等方面对RA的研究不断深入，发现了RA的发生与影响滑膜组织细胞增生及血管生成的因子有关［7］。其中，巨噬细胞移动抑制因子（MIF）、细胞间粘附分子-1 （ICAM-1）、血管细胞黏附分子（VCAM-1）与RA发病密切相关［8］。 MIF是一种重要的调节细胞生长、分化的前炎症细胞因子，能起到调节炎症程度的作用，作为TNF-α和IL-1β的上游细胞因子，其调控作用在RA发病机制中发挥重要作用［9］。唐茜等研究表明，MIF可作为RA治疗的新靶点［10］。ICAM-1和VCAM-1属免疫球蛋白超家族，ICAM-1可介导滑膜细胞与细胞以及滑膜细胞与细胞外基质之间的粘附，导致滑膜细胞的移行增生，引起一系列病理改变；正常情况下VCMA-1呈现低表达，当机体受到炎性因子刺激时，其表达增强，并能促进免疫细胞浸润，使单核细胞和淋巴细胞紧密地粘附于内皮，并进一步促进炎症反应［11-12］。

中医认为，RA属“痹症”范畴，又称为“历节”、“白虎历节”、“鹤膝风”、“顽痹”、“尫痹”等。主要病机为风、寒、湿、热、痰、瘀痹阻气血，治疗以祛邪通络为基本原则。研究显示，多种中药治疗RA既能抗炎镇痛，又可调节免疫，有独特的临床优势［13］。麝香乌龙丸是在挖掘宋·许叔微《普济本事方》“麝香圆”的基础上，结合现代临床和反复工艺研制而成。该药由麝香、川乌、全蝎、地龙、黑豆组成，具有温经散寒，舒筋活络，行血祛瘀，消肿止痛的作用。其中对于缓解关节疼痛、晨僵、消除关节肿胀、恢复关节功能等方面疗效显著。前期动物实验研究表明麝香乌龙丸有明显的抗炎、镇痛作用［14］。该药可抑制基质降解素-1（MMP-3）和明胶酶-B（MMP-9）的高表达和胶原过度降解，上调骨保护素（OPG），下调核因子-KB 受体活化因子配体（RANKL）的表达，降低 RANKL /OPG 的比例，从而阻止大鼠佐剂性关节炎软骨破坏及促进软骨修复。可调节垂体促肾上腺皮质激素、β-内啡肽的表达，从而发挥镇痛作用。麝香乌龙丸可调节MIF、ICMA-1、VCAM-1的失衡，与抑制滑膜组织血管生成和抑制AA大鼠炎症进展有关［15］。

本研究结果显示，观察组治疗后患者血清中炎性指标（CRP、ESR、RF、TNF-α、IL-1β）及MIF、ICMA-1、VCAM-1的水平均显著下降，且下降的程度优于对照组。结果进一步证实了，麝香乌龙丸可通过多靶点、多途径改善类风湿关节炎临床症状，提高治疗效果。本研究也存在一些不足，由于研究时间有限，未对患者远期疗效进行对比；由于样本量限制，未对中医不同证型的类风湿关节炎进行分类对比分析；这些方面不足也为后期进一步研究指明的方向。

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Effect of ShexiangWulong Pill on different TCM Syndromes of rheumatoid arthritis serum MIF， ICAM-1， VCAM-1 expression

Bi Dong-min1， Wei Jian-fen1， Zhang Wan-zhuang1， Li Xiu-zhi1， Zhang Rui-feng1， Liu Hai-tao1， Cai Jiang-nan2， Miao Liu2， Yuan Qiang1， Wang Zhi-wen1
（1. Affiliated Hospital of North China University of Science & technology， Hebei， Tangshan 063000；2. North China Institute of technology， Hebei， Tangshan 063000）

Objective To explore the relationship of ShexiangWulong Pill on different TCM Syndromes of rheumatoid arthritis（RA）of serum macrophage mobile inhibition factor（MIF）， intercellular adhesion molecule 1（ICAM-1）， vascular cell adhesion molecule 1（VCAM-1）expression of affect. Methods North Polytechnic University hospital rheumatology outpatient and inpatient patients admitted 90 cases of rheumatoid arthritis. They were randomly divided into two groups， 45 cases in each group. Control group with total glucosides of paeony capsule in the treatment of. Observation group was treated with Shexiang-Wulong pill. Changes of serum CRP， ESR， RF， TNF-α， MIF， IL-1β， ICAM-1 and VCAM-1 levels before and after treatment were compared between two groups. Results The total efficiency of 93.33% in observation group， the control group was 73.33%. There was a significant difference between the two groups. The two group after treatment， serum CRP， ESR， RF， TNF-α， IL-1β levels were significantly decreased. The levels of serum CRP， ESR， RF， TNF-α， IL-1β of the observation group after treatment was significantly lower than the control group. The difference was statistically significant. The two group after treatment， serum MIF， ICAM-1 and VCAM-1 were significantly decreased. The levels of serum MIF， ICAM-1， VCAM-1 of the observation group after treatment was significantly lower than the control group， the difference was statistically significant. Conclusion the inflammatory reaction of ShexiangWulong pill can significantly reduce rheumatoid arthritis， reduce serum MIF，ICAM-1 and VCAM-1 levels.

shexiangWulong pill； rheumatoid arthritis； MIF； ICAM-1； VCAM-1

R259

A

1673-016X（2016）04-0129-04

2016-01-10

毕东敏，E-mail: 2844521391@qq.com