HPLC法研究金黄膏的稳定性及其质控标准

2016-10-13曹富宁南宁市中医医药学部广西南宁530001

中国医药导报 2016年24期

曹富宁南宁市中医医：药学部，广西南宁530001

曹富宁
南宁市中医医：药学部，广西南宁530001

目的探讨HPLC法测定金黄膏中小檗碱和巴马丁含量尧稳定性与质控标准。方法通过色谱条件的优化，建立一种金黄膏测定方法，采用高效液相色谱法，色柱为：Apollo C18（250mm伊4.6mm，5滋m），流动液相为乙腈-0.1豫磷酸（二元梯度洗脱），检测波长346 nm，流速为1.0mL/min，柱温为30益，测定样品的精确度尧准确度尧稳定性尧重现性及专属性特性。结果将金黄膏按照上述方式进行，并且根据色谱检测方式判断，盐酸小檗碱为2.04%，巴马丁为1.95%，具有较好的稳定性曰盐酸小檗碱RSD为1.51%，巴马丁RSD为2.03%。巴马丁平均回收率为98.8%，RSD为1.85%，盐酸小檗碱平均回收率为100.9%，RSD为2.5%。由此说明，盐酸小檗碱和巴马丁在两种不同的药物成分在24 h内稳定性相对较好，且该检测方法具有较好的重现性。结论HPLC测定法分析金黄膏中小檗碱和巴马丁含量及稳定性与质控标准效果理想，该方法准确尧简便，重现性好，能够为制订质控标准提供依据，值得推广应用。

HPLC测定法曰金黄膏曰小檗碱曰巴马丁曰稳定性曰质控标准

[Abstract]Objective To investigate content and stability and quality control standard assays of berberine and golden cream palmatine by HPLC determination.M ethods Through the optimization of the chromatographic conditions,a gold—en pastedeterminationmethod established,high-performance liquid chromatographywasused:Apollo C18column(250mm伊4.6mm,5滋m),liquid phase was acetonitrile-0.1%phosphoric acid(binary gradient elution).The detection wavelength was 346 nm,velocity of flow was 1.0 mL/min.The column temperature was 30益,determination of accuracy,accuracy, stability and reproducibility and specificity characteristics were detected.Results The golden cream was conducted in accordance with the above-described manner and judged in accordance with chromatographic detection mode,berber—inewas 2.04%,palmatine was 1.95%,with good stability;berberine hydrochloride RSD was 1.51%,palmatine RSD was 2.03%.Average palmatine recovery was 98.8%,RSD was 1.85%,hydrochloric small firewood average recovery was 100.9%,RSD was 2.5%.It showed that berberine palmatine stability in two different pharmaceutical ingredientwithin 24 h was relatively good,and the detectionmethod had good reproducibility.Conclusion HPLC assay analysis of gold—en cream and palmatine content and stability and quality control standard of berberine is satisfactory,thismethod is accurate,simple,reproducible,and can provide the basis for the development of quality control standards,which should bewidely applied.

[Key words]HPLC assay;Golden cream;Berberine;Palmatine;Stability;Quality control standards

金黄膏出自明代陈实功编著的叶外科正宗曳[1]，主要由大黄尧黄柏尧姜黄尧白芷尧天花粉尧天南星等组成，为我国2010年版叶中国药典曳（一部）收录的品种，具有消肿止痛尧活血化瘀等功效，在疮疡肿痛尧丹毒流注尧跌打损伤等症中广为应用。南宁市中医医：药学部（以下简称野我部冶）自制的金黄膏，其制作工艺中除凡士林尧冰片（研细）外，其余粉碎成细粉，过筛，混匀。取凡士林加热融化，加入上述细粉搅匀，放置，60益左右加入冰片，搅匀，分装即得。金黄膏为黄色软膏，气微香尧味苦。叶中国药典曳[2]上规定了金黄膏中姜黄素的含量测定，但是临床上也有采用高效液相色谱（HPLC）测定散剂或贴膏剂中大黄成分尧小檗碱或姜黄素的含量。本研究采用HPLC法测定金黄膏中小檗碱和巴马丁含量，研究其稳定性与质控标准。

1　仪器与试剂

1.1仪器

SSIPC2000型高效液相色谱仪（美国科学系统公司），EZChrom Elite Client/Server色谱工作站，AL104电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）。510二元汞，996二极管阵列检测器。使用智能药物检测仪。1.2药品与试剂

所有试剂均为AR级，水为蒸馏水，在实验前使用0.45滋m滤膜过滤。将甲醇溶液作为金黄膏的对照物，由我部特制金黄膏作为此次实验的样品。小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110713-200911。巴马丁对照品（天津科曼斯特医药科技发展有限公司提供）。

2　方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：Apollo C18（4.6 mm伊250 mm，5滋m），流动相：A相为乙腈，B相为0.1豫磷酸水溶液，检测过程中采用梯度洗脱程序进行。见表1。控制流速为1.0mL/min，检测波长为346 nm，柱温控制在30益，理论板数根据盐酸小檗碱峰计算不低于20 000[3]。

表1　梯度洗脱表

2.2方法学考察

2.2.1对照品溶液的配制采用精密天平称取盐酸小檗碱和巴马丁对照品，分别采用乙腈配制成浓度为0.290 mg/mL以及0.221 mg/mL的溶液作为储备溶液。准确吸取50尧100尧250尧500尧800尧1000滋L溶液，将其放置在10mL的容量瓶中，加入乙腈进行稀释，经过0.45滋m微孔滤膜[4]。

2.2.2线性关系分别取上述对照品溶液5滋L注入液相色谱仪中，根据设置的色谱条件测定峰面积。以各进样量对峰面积进行线性回归分析，回归方程及线性范围见表2。

表2　回归方程及线性范围

2.2.3测试样品制备精确称取1.5 g金黄膏，放置在三角瓶中，加入30 mL石油醚，温度控制在60~90益下进行5min超声处理。取出后静置，取上层溶液，加入20 mL石油醚，充分震荡均匀，静置，吸取上层溶液，残渣挥干溶剂。采用25mL甲醇以及0.1%磷酸水溶液根据1颐1比例分次转移到容量瓶中，在超声下进行30min处理，放冷，加入提取溶剂到刻度[5-6]。

2.2.4精密度试验将测试溶液连续采样5次，得到巴马丁和盐酸小檗碱的峰面积，计算相应的标准偏差（RSD）。实验结果显示：盐酸小檗碱为2.04%，巴马丁为1.95%。由此说明仪器的精密度良好。

2.2.5稳定性试验将获得的检测样品，分别在1尧2尧3尧4尧5尧6尧7尧8尧9尧10 min等时间段进行测试，从而将得到的峰面积进行统计。实验结果显示，盐酸小檗碱RSD为1.51%，巴马丁RSD为2.03%。由此说明：盐酸小檗碱和巴马丁在24 h内稳定性相对较好。

2.2.6重现性试验根据实验获得的供测试溶液的方法制备5份样品，分别测定并计算其含量。实验结果显示，巴马丁RSD为3.87%，盐酸小檗碱RSD含量为1.17%。由此看出两种成分含量采用HPCL方法检测重现性较好。

2.2.7专属性试验除去黄柏，根据我部自拟处方称取金黄膏其余药物组成，制备金黄膏，采用同样的方法进行测定，实验结果显示：该方法测定盐酸小檗碱和巴马丁成分时有较好的专属性。

2.2.8加样回收率试验精密称取6份1.5 g药膏，分别加入5mg巴马丁和5mg小檗碱，同上脱脂方法进行操作，然后采用50 mL浓度为0.1%的甲醇溶液转移到50mL容量瓶中，采用超声进行30min处理，取出，放冷，然后加入提取溶液到相应的刻度，过膜，获得20滋L进样，结果显示：巴马丁平均回收率为98.8%，RSD为1.85%，盐酸小檗碱平均回收率为100.9%，RSD为2.5%。

3　讨论

金黄膏是临床上常用的中成药，该药物主要由大黄尧黄柏尧姜黄尧白芷尧天花粉及天南星等组成，多用于跌打损伤等。传统的方法虽然能满足临床治疗需要，但是患者治疗时由于不同的病症导致临床治疗针对性较差。我部生产的金黄膏使用传统的工艺，具有较好的疗效及较高的质量。金黄膏具有消肿止痛尧活血化瘀的功效，是我部研发用于治疗跌打损伤尧软组织损伤尧骨折肿痛尧红肿热痛等安全的外用中药制剂[7]。

而患者一旦出现跌打损伤，若不尽早进行治疗，会不利于预后，导致损伤出现溃烂尧坏死的现象。在跌打损伤的治疗过程中，一般使用硫酸镁湿敷的方式进行处理，具有一定的临床疗效，但是效果没有预期的理想，会导致患者出现静脉血管硬化尧结节性变化等一系列副作用[8]。金黄膏在治疗药物导致跌打损伤中能够起到很好效果。跌打损伤中镇痛药物的使用会导致出现炎症，其主要发病原因是由于消肿药物的化学效果较强,与患者的血液敏感程度以及体质的差异有关[9]。丙泊酚也叫依托泊酚，是一种新型的苯巴比妥类的消肿药物，发挥时间短，消肿效果较强，优点在于见效快尧安全可靠，不会对患者的造血功能尧血液循环尧呼吸系统以及心脏等器官功能造成积蓄的影响，并且不会通过肝脏进行分解，对人体的伤害小尧药效快并且患者苏醒的时间也较短，不会导致患者出现释放现象，能够在伤口消肿中应用。但是丙泊酚在注射后有10%~20%的患者感受到疼痛，即使是静脉速注也会感受到疼痛，这主要与水溶液呈酸性有一定的联系，目前主要将邴太芬作为溶剂，将pH值减弱到5.5，可以缓解注射带来的疼痛[10]。在手部的静脉或慢注时患者感受到疼痛的发生率较高，也有相关学说认为静脉壁中的上皮细胞在接触到丙泊酚后会出现一定的反应是导致患者感受到疼痛的重要原因。丙甲醚又称为肽芬甲醚，一种高效的消肿型药物，其优势在于见效快尧药效发挥时间短尧患者苏醒时间快，并且应用过程中出现的副作用较少，一般在引导消肿尧辅助和维持消肿中应用的较多[11]。但是在上述跌打损伤的止痛药剂应用过程中有可能使患者出现炎症。

有相关文献指出[12]，金黄膏在早期跌打损伤中能够起到很好的消肿止痛作用，金黄膏中的黄柏具有清热解毒尧消肿祛湿的作用曰大黄具有泻火凉血尧祛瘀解毒的功效。大黄中的蒽醌类成分以及黄柏中的小檗碱等多种成分都具有消肿化瘀的功效，并且能够减轻伤口的溢液以及促进药品的渗透[13]。金黄膏中的姜黄及白芷成分能够消除患者的淤积尧畅通脉络尧疏导患者体内阻滞的气血，辅助药物消炎。天南星尧天花粉尧姜黄等成分具有消肿止痛尧活血祛瘀的功效曰厚朴尧陈皮尧苍术等成分能够起到调理患者气血的作用，其中厚朴中含有大量的茁-桉叶醇，具有抑制细菌增殖的功效，能够减轻患者的血管肿胀。甘草具有清热解毒尧调养气血的功效，能作为辅助成分使用，并且甘草中的甘草次酸具有消炎尧抗过敏的效果。黄芩中含有大量的活性矿物质，能够起到强健固本尧消除疲劳的效果[14]。冰片则具有清热散毒尧明目退翳的药效。金黄膏将天南星尧陈皮尧姜黄尧白芷尧甘草尧甘松尧大黄尧黄芩尧黄柏尧苍术尧厚朴尧天花粉尧冰片加入制作，能够达到祛火化瘀尧止痛消肿的作用。同时将药品做成膏样，能够加强药物对皮肤的渗透性，同时起到呵护皮肤尧保护痂皮尧有效预防伤口开裂，能够起到很好的止疼效果[15]。金黄膏在治疗跌打损伤中起到了见效快尧药效高尧操作简单以及不良反应较少，其应用价值大于硫酸镁，能够起到清热解毒尧祛瘀消肿的作用[16]。

关节炎症是一种由于茁-溶血性链球菌感染而导致患者的皮肤以及皮下组织尧淋巴结及周围结构发炎的一种常见疾病，其特征在于患者发炎部位的皮肤会呈现红肿，并感觉到发热尧疼痛，全身无力等相关症状，在身体的各个部位都会出现关节炎症，一般在手臂尧腿部尧头皮以及腹部等部位[17]。关节炎症的发病原因主要是由于真皮细胞出现病变而产生水肿，真皮中有脓性白细胞浸润，可在皮下组织中出现。关节炎症若不尽早进行处理会引起患者的淋巴结感染，导致淋巴堵塞，使得患者的血液循环受到影响而产生象皮腿的现象，严重情况可能导致患者出现链球菌中毒性休克综合征，需要对此尽快的处理。临床中一般使用擦拭硫酸镁的方式进行治疗，但是在临床应用中会反复出现尧不能够有效退肿，是导致关节炎症复发的主要原因，其中最关键的是关节炎症复发可能使得病菌炎症转化为慢性炎症以及亚急性炎症[18]。

在中医对关节炎症的看法是患者体内的火毒旺盛尧风热尧湿邪侵袭，在长期热毒堆积的影响下在皮肤中出现了反应，而造成患者的气血凝滞尧经脉阻塞等。因此在关节炎症的治疗过程中，需要患者保持正常的生活饮食以及起居习惯，对于高热患者需要做好降温处理，若持续高烧需要服用退烧药物治疗。金黄膏具有消肿化瘀尧活气固本的功效，其中金黄膏中的黄柏具有清热燥湿尧解毒祛湿的功效曰大黄具有清热活血尧祛瘀解毒的功效，金黄膏中的多种成分都具有消肿化瘀的功效，并且能够减轻皮肤红肿的程度以及延长药效持续的时间。苍术具有消肿化瘀的药效，天南星能够对患者皮肤炎症起到消炎尧消肿尧镇痛止痛尧化瘀消炎的作用，姜黄能够祛热解毒，消除患者体内的邪火。金黄膏具有清热解毒尧活血化瘀尧消肿止痛等药效，辅料甘草尧黄芩尧冰片具有消除皮肤炎症以及预防关节开裂的作用，具有较高的渗透性。金黄膏药效较高尧药物发挥时间较快，且价格相对廉价，药物安全性也比较高，并且具有消肿化瘀尧解毒止痛尧降温消炎尧促进关节愈合的疗效，并且其辅助成分能够很好地延长药品持续时间，利于患者的预后。在金黄膏治疗关节炎症的过程中，将金黄膏科学地涂抹在炎症出现的疼痛部位，并以纱布包裹，避免药膏沾到衣服等，能够消除关节炎症，同时还要注意清洁，预防各种细菌侵入导致的病毒感染，例如脚气尧皮疹尧皮癣等病毒的感染，是控制关节炎症的重要措施。有相关文献指出[19]，使用金黄膏在治疗关节炎症的有效率能够达到86.0%，7~10 d内即可见效，证实了金黄膏外在治疗关节炎症的临床应用效果比较理想，具有药效高尧治愈时间短尧消炎止痛的优势，能够缩短患者的病程，值得在关节炎症治疗中推广使用。

颈椎病是一种常见的关节炎并发症状，主要的临床表现为颈椎的边缘皮肤出现水肿尧充血尧隆起以及肿胀疼痛等，水肿是其主要特征，并且红肿周围的肿胀时间过长会导致颈椎淤血，一旦出现颈椎病的现象，严重影响了患者的预后情况，对患者的生活质量造成了影响，并且使得颈椎愈合的时间增长。现代一些学者认为，颈椎病的产生机制是源自手术过程，患者的颈椎周围的组织受到创伤，使得组织周围静脉淋巴循环受到影响尧周围血管血液阻滞导致血管堵塞而产生的。

中医学中对于颈椎病出现的原因认为是颈椎周围的经脉受阻尧气血不畅尧湿热淤积导致的。金黄膏在这方面具有较好的临床应用效果，其制成的成分大多具有消肿化瘀的功效，其中大黄尧白芷尧黄柏等具有活血化瘀的功效曰姜黄尧甘草具有清热解毒的药效，厚朴尧陈皮尧天花粉等药物具有平喘尧降气尧下气消积等功效。天南星能够起到消炎尧消肿尧镇痛止痛尧化瘀消炎的作用。金黄膏能够有效缓解颈椎病的症状，减轻患者的疼痛，清热解毒尧祛湿消肿尧活络经脉，能够在颈椎病的治疗中起到很好的治疗效果[20]。

文章主要应用HPLC测定法分析金黄膏的稳定性与质量，HPLC是一种有效的色谱检查方式，将液体作为流动物，并应用高压输液系统，将金黄膏制成溶剂后通过流动泵装入试剂后对其稳定性进行检测，是我国目前一种有效的分析技术。

综上所述，我部运用传统的工艺，通过各种实验观察都得到了较好的临床疗效，并且在本次HPLC测定法中测得金黄膏中相应的成份含量，具有较好的稳定性。其制作成份都具有一定的活血化瘀尧消炎消肿的效果，并且通过各种研究都取得了一定的临床疗效，值得推广使用。

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