黄芩回流提取工艺优选

于良富　赵　宇　鲍　旭

（辽宁省抚顺市中心医院药剂科，抚顺113008）

黄芩回流提取工艺优选

于良富赵宇鲍旭

（辽宁省抚顺市中心医院药剂科，抚顺113008）

目的优选最佳黄芩回流提取工艺，为工业生产提供依据。方法以黄芩苷提取总量为指标，采用单因素考察优选出最佳提取溶媒，采用正交试验设计考察3个因素(溶媒量A、提取时间B、提取次数C)的3个水平对提取效果的影响。结果黄芩最佳提取工艺为：采用12倍量50%乙醇提取3次，每次1 h。结论该实验结果为大规模提取黄芩苷提供了可靠依据。

黄芩；黄芩苷；回流提取；高效液相色谱法

黄芩为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根。具有清热燥湿、泻火解毒、止血、安胎之功效。可用于治疗湿温、暑湿，胸闷呕恶，湿热痞满，泻痢，黄疸，肺热咳嗽，高热烦渴，血热吐衄，痈肿疮毒，胎动不安［1］。

目前国内对黄芩的提取方法主要由水煎煮［2］、回流提取［3］、超声提取［4］和微波法［5］等。有研究表明，回流提取较其它提取方法效率更高［6，7］，且相对超声提取和微波提取而言，其污染少，更适宜用于规模性生产。但诸多研究中，只对提取方法进行比较，并未继续对最佳提取方法进行详细工艺考察。故本实验中选用正交试验设计对回流提取黄芩进行考察。黄芩中的主要成分为黄芩苷，本实验采用黄芩苷为指标，优选黄芩最佳回流提取工艺。

1　实验材料

1.1仪器岛津LC-20AD高效液相色谱仪；SPD-20A紫外检测器；Sartorius BSA224S电子天平（北京赛多利斯科学仪器有限公司）；HWS24型电热恒温水浴锅（上海一恒科学仪器有限公司）。

1.2试药黄芩药材；黄芩苷对照品（含量以94%计，中国食品药品检定研究所，批号：110715-201016）；甲醇为色谱纯，水为去离子水；其它试剂均为分析纯。

2　实验方法

2.1色谱条件色谱柱：Inertsil ODS-SP C18（460 mm× 250 mm，5 μm）；流动相:甲醇-3%甲酸水溶液（V/V）（50∶50）；流速：1.0 mL/min；检测波长6∶280 nm；理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于2500。

2.2对照品溶液制备精密称取黄芩苷对照品3.98 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻线，摇匀，既得（每1 mL含黄芩苷74.824 μg，10℃以下保存）。

2.3精密度考察精密吸取黄芩苷对照品（74.824 μg/ mL）10 μL，连续进样5次，记录峰面积，结果黄芩苷峰面积的RSD为0.4965%，结果见表1。

表1　精密度考察结果表

结果表明，该仪器精密度良好。

2.4标准曲线绘制精密吸取黄芩苷对照品（74.824 μg/ mL）2 mL、4 mL、6 mL、8 mL、10 mL，分别置于10mL量瓶中，加甲醇至刻线，混匀，各吸取20 μL注入液相色谱仪中，测定峰面积。以黄芩苷浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程:Y= 84785X-31053，r=0.9998。测定结果表明，黄芩苷在0.299296 μg～1.49648 μg范围内线性关系良好。

2.5稳定性考察精密吸取同一供试品溶液20 μL，分别在0 h、2 h、4 h、6 h、8 h时进行测定，记录峰面积，结果黄芩苷峰面积的RSD为1.4475%，结果见表2。

表2　稳定性试验结果表

结果表明，供试品溶液在8h内稳定性良好。

2.6单因素考察优选提取溶媒称取药材，共计5份，每份10 g，分别加入10倍量30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、90%乙醇、水，回流提取1 h，滤过，记录提取液体积。

2.6.1供试品制备分别精密吸取样品续滤液10 mL，置于25 mL量瓶中，加提取溶剂至刻线，摇匀。精密吸取1 mL，转移至25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻线，摇匀，作为供试品溶液。

2.6.2含量测定精密吸取供试品溶液和对照品溶液各20 μL，采用2.1项下条件测定黄芩苷含量，并计算黄芩苷提取总量，结果见表3。

表3　单因素考察结果表

根据以上测定结果，50%乙醇提取的黄芩苷总量最多，故确定提取溶媒为50%乙醇。

2.7正交试验设计优选提取工艺

2.7.1供试品制备记录每份提取液提体积，精密吸取续滤液10 mL，转移至25 mL量瓶中，加50%乙醇稀释至刻线，摇匀。精密吸取1 mL，转移至25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻线，摇匀，作为供试品溶液。

2.7.2含量测定精密吸取供试品溶液和对照品溶液各20 μL，采用2.1项下条件测定黄芩苷含量，并计算黄芩苷提取总量。

2.7.3确定因素水平与考察指标以50%乙醇为溶剂，选取加醇量（A）、提取时间（B）、提取次数（C）为考察因素，以黄芩苷提取总量为指标，采用L9（34）正交表安排试验，提取工艺优选因素水平见表4。

表4　提取工艺因素水平表

2.7.4正交试验结果及方差分析称取药材，共计9份，每份5 g，按正交表安排试验。以黄芩苷提取总量为指标，采用2.1项下色谱条件测定黄芩苷含量，结果及直观分析结果见表5，方差分析结果见表6。

表5　正交试验结果及直观分析表

表6　方差分析结果

由正交试验的直观分析和方差分析结果可知，三种因素对黄芩提取所得的黄芩苷含量影响效果依次为：C（提取次数）＞A（加醇量）＞B（提取时间），且三种因素对提取量均无显著性影响。确定最佳提取工艺为A2B1C3，即加12倍50%乙醇提取3次，每次1小时。

3　结果与讨论

黄芩中的黄酮类是其主要成分，该类成分易溶于乙醇。由正交试验结果可知，回流提取黄芩药材时，采用12倍50%乙醇提取3次，每次1小时为最佳提取工艺。结合实际生产，在单因素考察优选提取溶媒时发现，黄芩苷在稀醇中的溶解效果较好。该实验结果为工业中的放大生产提供了依据。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典2010版[S].北京：中国医药科技出版社，2010：282-283.

[2]胡上达，唐彩泉，刘霞.黄芩提取工艺优化[J].医药导报，2002，21(7)：438-439.

[3]梁英，韩鲁佳，任成才，等.黄芩中黄芩苷醇提方法的优化[J].云南中医中药杂志，2009，30(1)：52-54.

[4]王胜男，徐源梅，李红玉.超声循环提取黄芩中黄芩苷的工艺研究[J].中华中医药学刊，2008，26(6)：1332-1333.

[5]贾艳萍，张春玲，鞠振国，等.微波辅助提取黄芩苷[J].食品与生物技术学报，2008，27(3)：57-59.

[6]周芳，池汝安，吴元欣，等.黄芩中黄芩苷浸取工艺优化[J].中药材，2007，30(3)：332-335.

[7]赵越平，雷其云，苏永芝，等.黄芩中黄芩甙不同提取方法的比较[J].第四军医大学学报，1996，17(6)：475-476.

[8]于千，张杨.正交设计法对黄芩提取工艺的研究[J].沈阳医学院学报，2011，13(3)：171-172.

The Optimization on the Reflux Extraction Processes of Scutellaria Baicalensis Georgi

YU Liangfu，ZHAO Yu，BAO Xu
（Department of Pharmacy，Fushun City Central Hospital，Liaoning Province，Fushun 113008，China）

Objective To oPtimize the best reflux extraction Processes of Scutellaria baicalensis Georgi，and to Providea basis for industrial Production.Methods The content of baicalin was taken as the indexe，single factor was used to choose the best extraction solvent，and orthogonal exPerimental design was adoPted to examine 3 levels of 3 factors（the amount of solvent-A，the extraction time-B，the extraction times-C）on the extraction effect.Results The oPtimum extraction Process of Scutellaria baicalensis Georgi as follows:with an amounts of 12 times 50%ethanol extracted three times and 1h each time.Conclusion The exPerimental results Provided a reliable basis for large-scale extraction of baicalin.

Scutellaria baicalensis Georgi；baicalin；reflux extraction；HPLC

10.3969/j.issn.1672-2779.2016.17.060

1672-2779（2016）-17-0138-02

（本文编辑：张文娟本文校对：赵宇2016-05-17）