猪巴氏杆菌的分离鉴定与药敏试验

吴艳萍　山东省博兴县畜牧兽医局　256500

猪巴氏杆菌的分离鉴定与药敏试验

吴艳萍山东省博兴县畜牧兽医局256500

2015年10月，山东省博兴某猪场饲养的仔猪发生一种以呼吸严重困难和败血症为主要特征的疫病。无菌采集病死猪的肺脏等组织进行病原分离，通过分离菌株的菌落特征、形态特征和生化特性等鉴定，分离菌株为猪巴氏杆菌，致病性试验显示分离菌株具有较强的致病性，药敏试验显示分离菌株对青霉素、氨苄西林、头孢噻呋、氟苯尼考和卡那霉素5种药物敏感。

猪巴氏杆菌；分离鉴定；药敏试验

猪巴氏杆菌病是由猪多杀性巴氏杆菌引起的一种以出血性败血病、咽喉炎和肺炎为主要特征的急性、继发性、细菌性传染病［1.2］。该病的发生无明显季节性，但秋冬气候剧变、饲养条件改变和长途运输等容易诱发，故该病在我国一直呈散发性和地方性流行［3-4］。2015年10月，山东省博兴某猪场饲养仔猪发生以精神沉郁、体温升高、呼吸困难、口鼻流白色泡沫、气管内有大量泡沫黏液和肺脏充血、出血、淤血等为主要特征的疫病。本研究进行了病原的分离鉴定与药敏试验，筛选出了针对该致病菌的敏感性药物，为发病猪场防治措施的制定提供了参考。

1　材料与方法

无菌采集病死猪的肺脏、脾脏、肝脏、肾脏和淋巴结等组织。细菌微量生化反应管购自杭州天和微生物试剂有限公司，洁级昆明系小白鼠购自山东省实验动物中心，药敏纸片购自北京天坛药物生物技术开发公司。将采集的临床病料样品划线接种于血液琼脂平板，37℃恒温培养24小时后，挑取生长良好的单菌落划线接种于平板进行纯化，连续传3代，观察菌落的生长特征。挑取纯化后的单菌落涂片，革兰氏染色、镜检，观察分离菌株的形态特征。将分离菌株分别接种于生化反应管，18小时后观察生化试验结果。将分离菌株腹腔注射昆明系小白鼠5只，0.2mL/只，同时取5只小白鼠腹腔注射培养基作为对照。隔离饲养，观察小白鼠的发病和死亡情况，对死亡小白鼠进行解剖，观察病理变化。利用K-B菌液涂布法分别测定分离菌株对青霉素等12种常见药物的敏感性，筛选出针对分离菌株的高敏药物。判定标准为：当抑菌环直径在15mm以上判为高敏，抑菌环直径在10～15mm之间判为中敏，抑菌环直径在10mm以下判为耐药。

2　结果与分析

（1）病原菌分离培养与纯化结果。培养24小时后的血液琼脂平板上可见露珠状菌落，无溶血现象。经连续3代纯化后，得到大小均一、半透明、光滑湿润和边缘整齐的露珠状菌落。

（2）分离菌株形态特征观察结果。革兰氏染色后镜检可见革兰氏阴性菌，呈短杆状。

（3）分离菌株生化特性鉴定结果。分离菌株的生化特性如表1所示，其与猪巴氏杆菌的生化特性相符。

表1　分离菌株的生化特性

（4）致病性试验结果。接种分离菌株的5只小白鼠在接种后1小时，开始出现精神沉郁等不适反应，在接种后12小时内全部死亡。解剖死亡小鼠可见肝脏、肺脏和心脏等脏器组织均具有出血点，取死亡小鼠的肝脏、肺脏和心脏等组织可再次分离出巴氏杆菌。同时接种培养基的5只小白鼠均生长正常，无不适反应。

（5）药敏试验结果。如表2所示，分离菌株对青霉素等12种药物表现出了不同程度的敏感性，其中高敏药物5种（青霉素、氨苄西林、头孢噻呋、氟苯尼考、卡那霉素），中敏药物3种（氧氟沙星、庆大霉素、诺氟沙星），耐药药物4种（环丙沙星、四环素、土霉素、复方新诺明）。

表2　分离菌株对12种药物的敏感性

3　讨论

猪巴氏杆菌在猪群中属于条件性致病菌，即该菌在猪群中广泛存在，当猪的免疫力和抗病力下降，该病原菌可大量增殖并侵入机体发生内源性感染，进而引起发病。故该病的综合防治措施应采取以加强饲养管理和环境卫生为主的预防方法，采取“防重于治”的原则，从源头上控制该病的发生和流行。

目前，临床上控制猪巴氏杆菌病最有效、最快速的方法是使用抗菌药物进行治疗，但是随着抗菌药物大量、盲目的滥用，细菌的耐药性亦越来越严重，给食品安全和人类健康造成潜在的威胁。张显浩等［5］研究表明，猪巴氏杆菌分离株对青霉素、氨苄西林和头孢类药物均产生了一定的耐药性。马增军等［6］研究表明，猪巴氏杆菌部分分离株对复方新诺明、庆大霉素和卡那霉素3种药物耐药。本研究中的分离菌株虽然对青霉素、氨苄西林、头孢噻呋、氟苯尼考和卡那霉素5种药物高度敏感，为发病猪场筛选出了治疗性药物，但是本研究中的分离菌株已对环丙沙星、四环素、土霉素和复方新诺明4种药物产生了不同程度的耐药性。综合以上研究结果可以看出，猪巴氏杆菌不同地域分离株对不同药物均已产生了一定的耐药性，其整体耐药性的发展趋势不容乐观，应加强重视。

［1］朱侠.猪巴氏杆菌病及其防控措施［J］.中国畜牧兽医文摘，2015，31（11）：132-133.

［2］王炎炎，黄坤英，丁孟建.猪多杀性巴氏杆菌病的诊治［J］.黑龙江畜牧兽医，2013，（1）：101-102.

［3］史正明.仔猪巴氏杆菌病病原的分离与鉴定［J］.山东畜牧兽医，2015，36（9）：32-33.

［4］范灵霞.猪巴氏杆菌病的诊断与防治［J］.中国畜牧兽医文摘，2014，30（12）：117.

［5］张显浩，陈敏鸿，李冰，等.猪A型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及耐药性分析［J］.黑龙江畜牧兽医，2016（1）：110-112.

［6］马增军，芮萍，张军辉，等.猪源多杀性巴氏杆菌分离鉴定与药敏试验［J］.畜牧与兽医，2015，47（7）：93-95.