2005—2014年华中科技大学同济医学院附属同济医院细菌耐药性监测

闫少珍， 孙自镛， 陈中举， 朱旭慧， 简 翠， 田 磊， 汪 玥， 李 丽， 张 蓓

·论著·

2005—2014年华中科技大学同济医学院附属同济医院细菌耐药性监测

闫少珍， 孙自镛， 陈中举， 朱旭慧， 简 翠， 田 磊， 汪 玥， 李 丽， 张 蓓

目的 分析武汉同济医院2005年1月—2014年12月临床分离细菌分布及其对常用抗菌药物耐药性变迁。方法 采用纸片扩散法（K-B法）进行抗菌药物敏感性试验，E试验检测青霉素和头孢曲松对肺炎链球菌及万古霉素对葡萄球菌属的MIC。 结果 10年间共获得非重复临床分离菌株56 205株，其中革兰阴性菌38 628株，占68.7%，革兰阳性菌17 577株，占31.3%。排名前5位的分离菌分别为大肠埃希菌、不动杆菌属、金黄色葡萄球菌（金葡菌）、克雷伯菌属和铜绿假单胞菌。10年间不动杆菌属分离率呈现逐年升高趋势，凝固酶阴性葡萄球菌呈现逐年下降趋势。甲氧西林耐药金葡菌（MRSA）和甲氧西林耐药凝固酶阴性葡萄球菌（MRCNS）的平均检出率分别为64.7%和79.8%，有逐年增高趋势。粪肠球菌在10年间维持对氨苄西林、青霉素、万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺、高浓度庆大霉素、左氧氟沙星较高敏感率，而屎肠球菌对多种抗菌药物耐药率高，并呈现耐药率增高趋势，仅对万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺耐药率较低。10年来，大肠埃希菌、克雷伯菌属（肺炎克雷伯菌和产酸克雷伯菌）、奇异变形杆菌中产ESBL菌株的比例呈逐年增长趋势，产ESBL菌株对检测抗菌药物敏感率均低于非产ESBL菌株。碳青霉烯类耐药的肠杆菌科细菌（CRE）近年增长显著。不发酵糖革兰阴性杆菌中不动杆菌属分离率逐渐增加并成为医院感染最常见的菌种，不动杆菌属对多种检测抗菌药物耐药率呈逐年上升趋势，而铜绿假单胞菌对测试抗菌药物仍保持较高的敏感率。结论 细菌耐药性监测10年间，多重耐药菌分离率呈上升趋势，且多数临床分离菌也呈增长趋势，给临床治疗带来一定挑战。

细菌耐药性监测； 抗菌药物； 多重耐药菌

随着抗菌药物的广泛使用，多重耐药菌及泛耐药菌的逐年增多，合理使用抗菌药物越来越受到重视，现总结我院2005—2014年细菌耐药监测数据，对病原菌分布及主要细菌对抗菌药物敏感性结果进行分析，为临床合理使用抗菌药物提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株来源 2005年1月—2014年12月本院临床分离病原菌56 205株，剔除同一患者相同部位的重复分离株。

1.1.2 培养基和抗菌药物试剂 MH培养基购自武汉中晋科技有限公司，血MH培养基、HTM培养基干粉和营养补充剂SR0158及抗菌药物纸片购自英国OXOID公司。万古霉素、亚胺培南、美罗培南、青霉素、头孢曲松、替考拉宁、利奈唑胺E试验条及检测β内酰胺酶的头孢硝噻吩纸片均为法国生物梅里埃公司产品。

1.2 方法

1.2.1 药敏试验 E试验法检测肺炎链球菌对青霉素和头孢曲松的敏感性、金黄色葡萄球菌（金葡菌）对万古霉素的敏感性以及少见耐药菌的药敏结果复核；其余采用纸片扩散法（K-B法）。质控菌株为大肠埃希菌ATCC25922和ATCC35218、肺炎克雷伯菌ATCC700603、铜绿假单胞菌ATCC27853、金葡菌ATCC25923和ATCC29213、肺炎链球菌ATCC49619以及流感嗜血杆菌ATCC49247。药敏试验操作方法、结果判读及质量控制遵循美国CLSI 2014版指南［1］。

1.2.2 β内酰胺酶检测 采用头孢硝噻吩纸片定性试验检测流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌中的β内酰胺酶。

1.2.3 甲氧西林耐药葡萄球菌（MRS）检测 采用头孢西丁纸片筛选MRS菌株。

1.2.4 青霉素不敏感肺炎链球菌的检测 经苯唑西林纸片法测定青霉素抑菌圈直径≤19 mm的肺炎链球菌，采用青霉素E试验条的方法测定其MIC，脑膜炎株和非脑膜炎株分别按CLSI 2013年判断标准判定为青霉素敏感、中介或耐药。

1.2.5 万古霉素耐药肠球菌（VRE）检测 对于纸片扩散法万古霉素不敏感的肠球菌，用万古霉素和替考拉宁E试验条检测其MIC值，如果MIC≥8 mg/L，则采用QIAGEN细菌基因组提取试剂盒提取肠球菌属DNA，参照文献资料合成引物［2］。常规PCR扩增细菌耐药基因，产物经1.2%琼脂糖凝胶（含1∶10 000 GelRed）电泳后，GelDoc-XR凝胶成像系统下观察结果。部分菌株采用PCR确认万古霉素耐药基因型别。

1.2.6 耐碳青霉烯类肠杆菌科（CRE）细菌确证 纸片扩散法中肠杆菌科细菌如果出现亚胺培南和（或）美罗培南不敏感菌株，需要采用E试验条检测其MIC值。

1.2.7 统计分析 采用WHONET 5.6软件进行统计分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 细菌分布

2005—2014年共收集非重复临床分离菌株56 205株，其中革兰阴性菌38 628株，占68.7%，革兰阳性菌17 577株，占31.3%。分离率最高的5种细菌分别是大肠埃希菌（16.6%）、不动杆菌属（13.6%）、金葡菌（13.0%）、克雷伯菌属（11.0%）和铜绿假单胞菌（10.7%）。主要细菌分离率见表1。

表1 10年间所有分离菌的菌种分布Table 1 Distribution of bacterial species during the period from 2005 to 2014

门诊患者分离菌2 459株，占4.4%，主要为大肠埃希菌（27.9%，685/2 459）、铜绿假单胞菌（12.4%，304/2 459）和肺炎克雷伯菌（9.4%，230/2 459）；住院非ICU患者分离菌48 082株，占85.5%，主要为大肠埃希菌（17.1%，8 231/48 082）、金葡菌（12.7%，6 094/48 082）和不动杆菌属（12.1%，5 821/48 082）；住院ICU患者分离菌5 664株，占10.1%，主要为不动杆菌属（29.2%，1 653/5 664）、金葡菌（17.3%，981/5 664）和铜绿假单胞菌（11.9%，676/5 664）。

56 205株临床分离株中来自呼吸道标本有29 843株，占53.1%，其中93.2%为痰标本；尿标本占16.3% （9 171/56 205）；血液标本占10.0%（5 594/ 56 205）；无菌体液（胸腹水、胆汁、关节液）占4.9% （2 756/56 205）；分泌物占7.2%（4 023/56 205）；脓 液 占3.5%（1 987/56 205）；脑 脊 液占1.7% （949/56 205）。10年间不同标本所占比例略有波动，但变化不大。不同标本细菌分离率排名前5位见表2。

血培养中凝固酶阴性葡萄球菌分离率从2005—2008年的47.4%降低到2012—2014年的36.3%，降幅明显，见表3。整体分离的菌种谱从2005年的107种扩展到165种，其中布鲁菌增长尤其显著，2012年分离到布鲁菌6株，2013年21株，2014年56株。

2.2 革兰阳性菌对抗菌药物的敏感性

表2 10年间不同标本分离率排名前5位的菌种列表Table 2 Top five bacterial species by specimen type during the period from 2005 to 2014

2.2.1 葡萄球菌属 2005—2014年金葡菌中MRSA的平均检出率为64.7%（4 718/7 291），MRCNS的平均检出率为79.8%（2 415/3 027），10年间MRSA及MRCNS检出率均显著升高，MRSA检出率从2005—2008年的57.2%升至2012—2014年的69.2%，增长迅速。MRCNS检出率从2005—2008年的77.5%升至2012—2014年的80.7%，见表4，MRSA除了对甲氧苄啶-磺胺甲唑、磷霉素、替考拉宁、利奈唑胺和万古霉素敏感率较高外，对其他检测抗菌药物均保持高水平耐药。MRCNS仅对红霉素、替考拉宁、利奈唑胺和万古霉素敏感性较好。MRSA和MRCNS对β内酰胺类、大环内酯类、氨基糖苷类和喹诺酮类抗菌药物的耐药率均高于MSSA和MSCNS，见表5、6。2013年4月份发现1株万古霉素中介的金葡菌［3］。2005—2014年共发现8株替考拉宁耐药的凝固酶阴性葡萄球菌，但仅经纸片扩散法和E试验方法确认，未对其耐药机制作进一步研究。

表3 2005—2014年不同阶段血培养凝固酶阴性葡萄球菌检出率Table 3 Prevalence of coagulase-negative Staphylococcus from blood culture

表4 2005—2014年甲氧西林耐药葡萄球菌的检出率Table 4 Prevalence of methicillin-resistant Staphylococcus strains during the period from 2005 to 2014

表5 10年间金葡菌对抗菌药物耐药率和敏感率Table 5 Susceptibility of S. aureus to antimicrobial agents during the period from 2005 to 2014 （%）

表6 10年间凝固酶阴性葡萄球菌对抗菌药物耐药率和敏感率Table 6 Susceptibility of coagulase-negative Staphylococcus to antimicrobial agents during the period from 2005 to 2014 （%）

2.2.2 肠球菌属 2005—2014年共分离到肠球菌5 141株，其中屎肠球菌1 824株（35.5%），粪肠球菌1 740株（33.8%），45%肠球菌来自于尿标本。屎肠球菌对于所检测抗菌药物敏感率均显著低于粪肠球菌。整体耐药性高，仅对利奈唑胺、万古霉素和替考拉宁敏感性较好，但也出现了万古霉素和替考拉宁不敏感菌株，尚未检出利奈唑胺不敏感菌株。粪肠球菌对青霉素、氨苄西林、呋喃妥因、利奈唑胺、万古霉素和替考拉宁敏感率均高于80%，对红霉素和环丙沙星敏感率较低，分别为7.4%和36.6%。10年间共检出VRE 82株，耐药率为1.6%，其中屎肠球菌70株，占85.4%；替考拉宁耐药肠球菌8株（0.2%）。部分菌株经PCR检测万古霉素耐药基因，多数屎肠球菌携带vanA型基因，有4株鹑鸡肠球菌携带vanA和vanC基因。10年间粪肠球菌和屎肠球菌对抗菌药物敏感率略有波动，粪肠球菌对多种抗菌药物耐药率略有降低，但对于耐药率较高的抗菌药物仍保持高水平耐药。见表7，8。

2.2.3 链球菌属 2005—2014年共分离到β溶血链球菌251株，其中A群86株，B群57株，C 群14株，F群15株，G群43株，未分群36株，β溶血链球菌及草绿色链球菌均对红霉素、克林霉素耐药率较高，对其他检测抗菌药物敏感率较高，未发现对万古霉素耐药链球菌和对青霉素耐药的β溶血链球菌，见表9。

2.3 革兰阴性杆菌对抗菌药物敏感性

2.3.1 肠杆菌科细菌 2005—2014年共分离到肠杆菌科细菌19 219株，主要为大肠埃希菌、克雷伯菌属、肠杆菌属和变形杆菌属。10年间，产ESBL菌株分离率呈上升趋势，大肠埃希菌产酶率最高，为72.2%，其次为肺炎克雷伯菌（50.9%）、产酸克雷伯菌（48.7%），奇异变形杆菌产酶率最低，为21.6%，见表10。上述产ESBL菌株对青霉素类、头孢菌素类、氨基糖苷类、喹诺酮类、甲氧苄啶-磺胺甲唑等的耐药率均显著高于非产ESBL菌株。肠杆菌科细菌普遍对氨苄西林、哌拉西林、头孢唑林、头孢呋辛、头孢噻肟耐药率高，对亚胺培南、美罗培南、阿米卡星耐药率最低，低于或接近10%。其次为酶抑制剂复方制剂（哌拉西林-他唑巴坦、头孢哌酮-舒巴坦）。但10年间大肠埃希菌、克雷伯菌属、肠杆菌属和变形杆菌都出现了对亚胺培南、美罗培南、哌拉西林-他唑巴坦、头孢哌酮-舒巴坦耐药率逐年升高的趋势，尤其是克雷伯菌属对2种碳青霉烯类抗生素耐药率增长显著，对亚胺培南耐药率从0增长到5.7%，对美罗培南从0增长到6.2%，见表11～15。10年间共检出CRE 394株，近2年CRE频见报道，2013、2014年共分离到148株CRE，其中有94株为肺炎克雷伯菌，占63.5%。且这148株CRE中，有45株来自儿科病房，27株来自新生儿病房，3株来自儿科ICU，儿童患者检出率占到了50.7%，有集中分布的现象。

表7 10年间粪肠球菌对抗菌药物耐药率和敏感率Table 7 Susceptibility of E. faecalis to antimicrobial agents during the period from 2005 to 2014 （%）

表9 链球菌属对抗菌药物耐药率和敏感率Table 9 Susceptibility of Streptococcus spp. to antimicrobial agents （%）

表10 2005—2014年肠杆菌科细菌ESBL阳性菌株检出率Table 10 Prevalence of ESBLs-producing strains in Enterobacteriaceae during the period from 2005 to 2014 ［n（%）］

表11 2005—2014年大肠埃希菌对抗菌药物耐药率和敏感率Table 11 Susceptibility of E. coli to antimicrobial agents during the period from 2005 to 2014 （%）

表12 2005—2014年克雷伯菌属细菌对抗菌药物耐药率和敏感率Table 12 Susceptibility of Klebsiella spp. to antimicrobial agents during the period from 2005 to 2014 （%）

表13 2005—2014年变形杆菌属细菌对抗菌药物耐药率和敏感率Table 13 Susceptibility of Proteus spp. to antimicrobial agents during the period from 2005 to 2014 （%）

表13（续）Table 13（continued）（%）

表14 2005—2014年肠杆菌属细菌对抗菌药物耐药率和敏感率Table 14 Susceptibility of Enterobacter spp. to antimicrobial agents during the period from 2005 to 2014 （%）

表15 2005—2014年枸橼酸杆菌属细菌对抗菌药物耐药率和敏感率Table 15 Susceptibility of Citrobacter spp. to antimicrobial agents during the period from 2005 to 2014 （%）

2.3.2 不发酵糖革兰阴性杆菌 10年中共检出不动杆菌属7 618株，其对哌拉西林、氨曲南、庆大霉素敏感率较低，均低于30%，对其他受检的抗菌药物敏感率也不高于50%，敏感性差。且对多种抗菌药物耐药率出现逐渐升高的趋势，尤其对头孢哌酮-舒巴坦、氨苄西林-舒巴坦、亚胺培南、美罗培南耐药率增长明显，头孢哌酮-舒巴坦耐药率从9.7%增长至54.0%，氨苄西林-舒巴坦耐药率从34.4%增长至68.7%，亚胺培南耐药率从42.6%增长至70.4%，美罗培南耐药率从41.1%增长至67.5%，见表16。碳青霉烯耐药不动杆菌主要分布于ICU（29.8%）、呼吸科（12.0%）、神经内科（11.2%）和胸外科（10.1%），与医院感染密切相关。铜绿假单胞菌对抗菌药物敏感性优于不动杆菌属，除了对甲氧苄啶-磺胺甲唑、米诺环素、替卡西林-克拉维酸敏感性较低，分别为7.8%、8.9%、12.6%，对其他多种抗菌药物敏感率均高于50%。10年间铜绿假单胞菌对亚胺培南、美罗培南、阿米卡星出现耐药率略升高的趋势，对其他检测的多种抗菌药物耐药率有所波动，未出现明显变化趋势，见表17。嗜麦芽窄食单胞菌对甲氧苄啶-磺胺甲唑、左氧氟沙星和米诺环素敏感率良好，均高于85%，见表18。

2.4 苛养菌对抗菌药物的耐药性

2.4.1 流感嗜血杆菌 2005—2014年共分离到流感嗜血杆菌1 546株，前5年和后5年流感嗜血杆菌分离率无明显差异，维持在平均2.5%的水平。其中儿童患者731株，占47.3%，成人患者815株，占52.7%。产β内酰胺酶512株，除对氨苄西林和甲氧苄啶-磺胺甲唑耐药率较高外（分别为91.3%和77.4%），对其他检测抗菌药物耐药率较低。β内酰胺酶阴性但对氨苄西林耐药91株，其对检测的抗菌药物耐药性均高于β内酰胺酶阴性且氨苄西林敏感菌株，见表19。

表16 2005—2014年不动杆菌对抗菌药物耐药率和敏感率Table 16 Susceptibility of Acinetobacter spp. to antimicrobial agents during the period from 2005 to 2014 （%）

表17 2005—2014年铜绿假单胞菌对抗菌药物耐药率和敏感率Table 17 Susceptibility of P. aeruginosa to antimicrobial agents during the period from 2005 to 2014 （%）

表18 2005—2014年嗜麦芽窄食单胞菌对抗菌药物耐药率和敏感率Table 18 Susceptibility of S. maltophilia to antimicrobial agents during the period from 2005 to 2014 （%）

表19 流感嗜血杆菌对抗菌药物耐药率和敏感率Table 19 Susceptibility of H. influenzae to antimicrobial agents （%）

2.4.2 肺炎链球菌 10年间共分离到肺炎链球菌1 301株，其中来自儿童患者936株，前5年平均分离率为1.9%，后5年较前5年分离率有明显上升，为2.2%。2005—2014年脑膜炎患者分离的肺炎链球菌对青霉素敏感（PSSP）3株、耐药（PRSP） 16株。脑膜炎患者PSSP株对除红霉素、克林霉素外，对其余抗菌药物均敏感。16株PRSP菌株对左氧氟沙星、莫西沙星、万古霉素均敏感，对红霉素、克林霉素均耐药。非脑膜炎株对抗菌药物的耐药率见表20。

表20 肺炎链球菌非脑膜炎株对常用抗菌药物耐药率和敏感率Table 20 Susceptibility of nonmeningitis S. pneumoniae to antimicrobial agents （%）

2.4.3 卡他莫拉菌 2005—2014年共分离卡他莫拉菌469株，其中产β内酰胺酶446株，占95.1%，非产β内酰胺酶23株，占4.9%，有256株分离自儿童患者，213株分离自成人。10年间，卡他莫拉菌分离率呈逐年上升的趋势，从2005年的0.17%上升到2014年的0.68%，增长明显。

3 讨论

本研究通过回顾性统计分析我院2005—2014 年10年间临床分离病原菌的菌种分布及药物敏感性变迁，为流行病学调查及临床合理使用抗生素提供依据。

本研究结果显示，临床分离率最高的病原菌主要有大肠埃希菌、不动杆菌属、金葡菌、克雷伯菌属、铜绿假单胞菌和肠球菌。近5年来，凝固酶阴性葡萄球菌分离率逐渐降低，不再成为分离率排名前5位的病原菌，这可能与临床规范化采集标本及实验室不断强化标本送检质量有关。尤其是血培养中凝固酶阴性葡萄球菌的检出率从2005年的52.5%降低到2014年的34.0%。不动杆菌属分离率较前5年有明显增加，从2005的8.3%上升至2014年14.2%，逐渐成为我院分离率排名前3的病原菌。10年间菌种谱不断扩大，从2005年的107种扩展到165种，少见菌、难分离到的菌种逐渐增多，其中布鲁菌近2年增加尤其明显，从2012年分离到非重复菌株6株，到2013年的21株，2014年的56株，这与微生物实验室的检测能力和临床医师送检意识的提升有关。就标本构成来看，10年间无明显变化，呼吸道标本比例始终最高，且有逐渐升高的趋势，占53.1%，其次是尿标本，占16.3%，再次是血标本，10.0%，这与CHINET细菌耐药监测网标本构成基本一致［4］。

56 205株临床分离株中呼吸道标本主要分离菌为不动杆菌属、金葡菌和铜绿假单胞菌；尿标本主要分离菌为大肠埃希菌和肠球菌；血液标本主要为凝固酶阴性葡萄球菌、大肠埃希菌和肠球菌；无菌体液（胸腹水、胆汁、关节液）主要为肠球菌和大肠埃希菌；分泌物、脓液主要分离菌均为金葡菌、大肠埃希菌、肠球菌；脑脊液主要分离菌为凝固酶阴性葡萄球菌、不动杆菌、肠球菌和金葡菌，这可能与临床送检标本质量有关。了解不同标本的常见病原菌，可为临床经验用药提供依据。

近年来，MRSA、MRCNS及产ESBL甚至CRE检出率均有逐渐升高的趋势，MRSA检出率从2005—2008年的57.2%升高到2012—2014年的69.2%，平均检出率为64.7%，这与张小江等［5］报道的北京协和医院MRSA检出率降低的趋势有所不同，且高于他们52.8%的检出率，但低于药小萍等［6］报道的上海地区MRSA 86.4%的检出率。可能与医务人员手卫生和医院感染管理相关。MRSA和MRCNS对氨基糖苷类、β内酰胺类、氟喹诺酮类和大环内酯类等抗菌药物耐药率均显著高于MSSA和MSCNS，从整体药敏结果来看， 除万古霉素、替考拉宁、利奈唑胺外，MRSA仅对甲氧苄啶-磺胺甲唑敏感性较好，敏感率为93.2%，其次是磷霉素、红霉素和克林霉素，敏感率分别为63.3%、30.0%和41.9%，对其他检测抗菌药物敏感率均较低。且出现1株万古霉素中介的金葡菌以及8株替考拉宁耐药的凝固酶阴性葡萄球菌，给临床治疗增加难度。尚未发现利奈唑胺不敏感菌株。此外，异质性万古霉素中介金葡菌（hVISA）或万古霉素中介耐药金葡菌（VISA）导致临床治疗失败的病例也时有报道，我院hVISA的检出率高达21.4%，应引起临床的足够重视［7］。尽管甲氧苄啶-磺胺甲唑敏感性较高，但容易产生耐药，临床不宜单独使用。我院分离到MRSA的基因型主要为SCCmecⅢ型和agr-1型，因此临床应合理使用抗生素尤其是糖肽类药物，避免VISA和万古霉素耐药金葡菌（VRSA）株产生［5］。

临床分离到的肠球菌主要为屎肠球菌（占35.5%）和粪肠球菌（占33.8%），粪肠球菌对抗菌药物的耐药性普遍低于屎肠球菌，除对红霉素耐药率较高（72.5%）外，对其他多种抗菌药物耐药性偏低。但屎肠球菌除对万古霉素、替考拉宁和利奈唑胺耐药率较低外，对其他抗菌药物耐药率均较高。粪肠球菌和屎肠球菌均检出万古霉素耐药和替考拉宁耐药株，尚未发现利奈唑胺不敏感菌株。10年间粪肠球菌对多种抗菌药物耐药率略有降低，但对于耐药率较高的抗菌药物仍保持高水平耐药。

10年间分离到的β溶血链球菌主要为A群链球菌，其次为B群、G群链球菌。β溶血链球菌均表现为对红霉素、克林霉素耐药率较高，除B群链球菌对左氧氟沙星耐药率为41.4%外，对其他抗菌药物耐药率均低于5%，尚未发现对万古霉素和青霉素耐药β溶血链球菌。

本研究结果显示，肠杆菌科细菌对多种抗菌药物耐药性呈逐年上升趋势，且产ESBL检出率也逐年增加，产酶株对抗生素敏感性普遍低于非产酶株。但是由于近2年未进行ESBL的确认试验，因此实际ESBL可能比统计数据略高。近2年来，我院CRE检出率明显增加，主要为肺炎克雷伯菌，占63.5%，且有50.7%的分离株都来自儿科病房，提示我院近2年不断增长的CRE可能存在耐药克隆的传播，应引起高度重视。肺炎克雷伯菌耐药机制主要是金属β内酰胺酶（MBL）和非金属碳青霉烯酶（KPC，GES或OXA型），也可能与膜孔蛋白改变有关。有研究显示，多黏菌素类、替加环素、磷霉素和阿米卡星对CRE抗菌活性良好［8］，联合用药疗效优于单一用药，联合碳青霉烯类治疗结果显示疗效最好［9-10］。

在不发酵糖革兰阴性杆菌中，不动杆菌属检出率逐年增多，成为检出率最高的不发酵糖革兰阴性杆菌。并且其对受检抗菌药物敏感率均有显著降低，尤其是对以往敏感性较好的抗菌药物，如亚胺培南、美罗培南、头孢哌酮-舒巴坦、氨苄西林-舒巴坦等，敏感率降幅显著。不动杆菌属主要为医院感染病原菌，分离率逐年增加，耐药率升高显著，且多重耐药及泛耐药菌在院内流行广泛，对临床治疗造成极大困难和负担。郭萍等［11］研究显示耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌（CRAB）上升明显，2009年高达59.4%。CRAB克隆株的广泛传播是中国多所医院分离碳青霉烯类抗生素耐药率增加的重要原因［12］。对于多重耐药和泛耐药鲍曼不动杆菌可以选择联合用药或者使用替加环素等新型抗菌药物。

铜绿假单胞菌是医院感染的另一重要病原菌，10年间铜绿假单胞菌对多种抗菌药物保持较高的敏感率，尚未出现耐药率上升的趋势。除了甲氧苄啶-磺胺甲唑、米诺环素和替卡西林-克拉维酸敏感率较低外，对其余检测抗菌药物抗菌活性都在50%以上，但也均低于80%。因此对铜绿假单胞菌感染的治疗更依赖于实验室的药敏试验结果，合理使用抗生素。嗜麦芽窄食单胞菌对左氧氟沙星、甲氧苄啶-磺胺甲唑和米诺环素敏感率均较高，但低于CHNIET监测的水平［4］。

肺炎链球菌、流感嗜血杆菌和卡他莫拉菌是社区获得性肺炎的主要病原菌，10年间肺炎链球菌、卡他莫拉菌检出率呈逐年上升的趋势，流感嗜血杆菌分离率维持在2.5%的水平略有波动。

综上，2005—2014年10年间临床分离病原菌数量增长明显，随着实验室检测能力的不断提升，菌种谱不断增加，少见菌分离不断出现。这与临床医师的微生物标本送检意识不断加强相关。多重耐药菌分离率逐年增加，少见耐药表型的出现和流行，都给临床治疗带来了极大挑战。因此，实验室应及时监测菌种谱变化及药敏试验结果，为临床合理使用抗生素提供依据，同时与医院感染管理科室密切沟通，控制耐药菌在院内的流行传播。

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Surveillance of antimicrobial resistance in clinical isolates from Tongji Hospital during the period from 2005 to 2014

YAN Shaozhen， SUN Ziyong， CHEN Zhongju， ZHU Xuhui， JIAN Cui， TIAN Lei， WANG Yue， LI Li， ZHANG Bei. （Department of Laboratory Medicine， Tongji Hospital Affiliated to Tongji Medical College of Huazhong University of Science and Technology， Wuhan 430030， China）

Objective To investigate the distribution and changing antimicrobial resistance of bacterial strains isolated from patients in Tongji Hospitial during the period from January 2005 through December 2014. Methods Antimicrobial susceptibility was tested by Kirby-Bauer method. The minimum inhibitory concentrations of penicillin and ceftriaxone against Streptococcus pneumoniae and vancomycin against Staphyloccus spp. were determined by E-test. Results A total of 56 205 strains were isolated during the 10-year period， including gram-negative bacteria （38 628， 68.7%） and gram-positive bacteria （17 577， 31.3%）. The top five pathogenic bacterial species were Escherichia coli， Acinetobacter spp， S. aureus， Kelbsiella spp. and P. aeruginosa. The proportion of Acinetobacter isolates increased year by year during the 10-year period， but the proportion of coagulase-negative Staphylococcus was on decline. The average prevalence of methicillin resistant strains in S.aureus and coagulase-negative Staphylococcus was 64.7% and 79.8%， respectively with an increasing trend during the 10-year period. The Enterococcus faecalis strains still showed high susceptibility rate to ampicillin， penicillin， vancomycin， teicoplanin，linezolid， gentamicin （high level）. But the E. faecium isolates were highly resistant to most antimicrobial agents except vancomycin，teicoplanin， and linezolid. Over the 10-year period， the prevalencce of ESBLs-producing strains in Escherichia coli， Klebsiella spp. （K. pneumoniae and K. oxytoca）， and Proteus mirabilis showed an increasing trend. The ESBLs-producing strains were always more resistant than the corresponding non-ESBLs-producing strains. The growth of carbapenem-resistant Enterobacteriaceae was remarkable in the last two years. The number of Acinetobacter spp. strains gradually increased in recent years and became one of the most common pathogens of nosocomial infection. The resistance rates of Acinetobacter spp. to multiple antimicrobial agents were on the rise， while the susceptibility profile of P. aeruginosa remained stable over years. Conclusions Surveillance of bacterial resistance in hospitals across China during the 2005-2014 period showed that the prevalence of multi-drug resistant bacteria was on the rise. The increasing resistance of common pathogens has become a major challenge to clinical practice.

bacterial resistance surveillance； antimicrobial agent； multi-drug resistant bacterium

R378

A

1009-7708（2016）02-0165-14

10.16718/j.1009-7708.2016.02.009

2015-04-10

2015-09-24

华中科技大学同济医学院附属同济医院检验科，武汉 430030。

闫少珍（1987—），女，本科，主管技师，主要从事细菌耐药性监测及流行病学调查。

孙自镛，E-mail： zysun@tjh.tjmu.edu.cn。