丹参饮片、标准水煎剂、配方颗粒HPLC特征图谱相关性研究

周维，胡昌江，戴德荣，张秀环，冯健

(四川新绿色药业科技发展股份有限公司，四川 彭州 611930 )

丹参饮片、标准水煎剂、配方颗粒HPLC特征图谱相关性研究

周维，胡昌江*，戴德荣，张秀环，冯健

(四川新绿色药业科技发展股份有限公司，四川 彭州611930)

目的：采用高效液相色谱法对丹参饮片、标准水煎剂、配方颗粒的特征图谱进行相关性研究，考察不同的存在形式对丹参化学成分的影响。方法：采用菲罗门luna5uC18柱(250mm×4.6mm，5μm)色谱柱，以乙腈-0.4%磷酸水溶液为流动相进行梯度洗脱；检测波长为286nm；流速为10mL·min-1；进样量为10μL。分别建立10批丹参饮片、10批丹参标准水煎剂、10批丹参配方颗粒的特征图谱。结果：丹参配方颗粒HPLC特征图谱的7个特征峰均可在饮片、标准水煎剂中得到追踪，并从7个共有峰中指认出迷迭香酸、丹酚酸B、丹参素钠、原儿茶醛4个成分。结论：丹参饮片、标准水煎剂、配方颗粒的主要化学成分组成基本相同。

丹参饮片；丹参标准水煎剂；丹参配方颗粒；特征图谱

丹参为唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根和根茎，具有活血祛瘀、通经止痛、清心除烦、凉血消痈的功能[1]，其中脂溶性成分为丹参酮类，水溶性成分为丹酚酸类[2]。丹参配方颗粒为丹参饮片经现代技术提取、浓缩、干燥、制粒等工艺制备而成，已经失去了饮片的外观形态、显微特性，难以直观鉴别。如果仅用某成分的含量限度作为质量控制指标，则较难全面地判定配方颗粒的真伪与优劣。因此，需要制定出专属性更强、重复性更强、有效可控的方法来控制丹参配方颗粒的质量。特征图谱的研究能很好地给丹参配方颗粒的定性鉴别提供准确的依据，能够在化学成分的层面上进行全面的鉴别[3]。丹参配方颗粒做为丹参颗粒性饮片，应与丹参饮片及其水煎液具有相同的化学成分，这三者的相关性目前尚未见报道。本研究采用HPLC法建立了丹参饮片、丹参标准水煎剂、丹参配方颗粒的特征图谱，比较了三者化学成分的差异。

1 仪器与试药

1.1仪器

安捷伦1200型高效液相色谱仪；电子天平BP211D(Sautoris，德国)；超声波清洗器(昆山市仪器有限公司，KQ5200DB型)。

1.2试药

丹酚酸B、迷迭香酸(中国是食品药品检定研究院，批号分别为1152-200605，111871-201102)；丹参素钠(中国食品药品检定研究院，批号：110855-201210，含量91.2%)；原儿茶醛(中国食品药品检定研究院，批号：110810-200506)；甲醇为色谱纯；水为纯净水；磷酸(HPLC级)。

10批不同来源的丹参饮片产地为山东，经成都中医药大学胡昌江教授鉴定为唇形科植物丹参SalviamiltiorrhizaBge.的干燥根及根茎；10批丹参标准水煎剂按照《医疗机构中药煎药室管理规范》中煎药操作方法进行制备；10批丹参配方颗粒(四川新绿色药业科技发展股份有限公司，批号分别为1312085，1312086，1312087，1304044，1405321，1404231，1411124，1501325，1504155，1507214)。

2 方法与结果

2.1色谱条件

菲罗门LunaC18(2)(250mm×4.6mm，5μm)；以乙腈为流动相A，以0.4%磷酸溶液为流动相B，按表1的规定进行梯度洗脱；检测波长为286nm；柱温为25℃；流速为1.0mL·min-1[4-6]。

表1 梯度洗脱程序

2.2供试品溶液的制备

2.2.1丹参饮片溶液的制备 取丹参饮片50g，加水适量，煎煮1h，滤过，滤液用水定容至1000mL，即得。

2.2.2标准煎剂的制备 取丹参饮片50g，第一次加8倍水，浸泡30min，煎煮30min，滤过；第二次加6倍水，煎煮30min，滤过，合并水煎液，用水定容至1000mL，即得。

2.2.3丹参配方颗粒供试品的制备 取本品适量，研细，取约0.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水25mL，称定重量，超声处理(功率为250W，频率为33kHz)30min，取出，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.3方法学考察

2.3.1精密度试验 按照2.2.3项下方法制备丹参配方颗粒供试品溶液，连续进样6次，每次10μL，结果7个特征峰相对保留时间的RSD为0～0.2%，相对峰面积的RSD为0～0.55%，表明仪器的精密度良好。

2.3.2稳定性试验 按照2.2.3项下方法制备丹参配方颗粒供试品溶液，分别于0、4、8、12、24h测定，结果7个特征峰相对保留时间的RSD为0～0.53%，相对峰面积的RSD为0～0.46%，表明样品溶液在24h内稳定。

2.3.3重复性试验 按照2.2.3项下方法制备6份丹参配方颗粒供试品溶液，按照拟定方法测定，结果7个特征峰相对保留时间的RSD为0～0.2%，相对峰面积的RSD为0～0.83%，表明方法重复性良好。

2.4样品的测定

精密取10批丹参饮片供试品溶液、标准水煎剂、丹参配方颗粒供试品溶液各10μL，按拟定方法测定。

2.5特征图谱的建立

2.5.1参照峰的选择与共有特征峰的确定 采用拟定的方法分别对10批丹参饮片、10批丹参标准水煎剂、10批丹参配方颗粒进行特征图谱的测定，并建立了HPLC特征图谱，见图1～4。根据相对保留时间稳定及各批次样品均能检出，且峰相对较高的原则，采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统(2012版)进行Mark峰匹配。共选择了7个重复性较好的峰作为共有特征峰。通过与对照品色谱图比较可得，7个共有特征峰当中，峰1为丹参素钠，峰2为原儿茶醛，峰5为迷迭香酸，峰6为丹酚酸B。结果见图5。同时选择峰6(丹酚酸B)为参照峰。

注：S1～S10为10批丹参饮片样品；R为对照图谱。图1 10批丹参饮片HPLC特征图谱

注：S1～S10为10批丹参标准水煎剂样品；R为对照图谱。图2 10批丹参标准水煎液HPLC特征图谱

注：S1～S10为10批丹参配方颗粒样品；R为对照图谱。图3 10批丹参配方颗粒HPLC特征图谱

注：A.丹参配方颗粒；B.丹参标准水煎剂；C.丹参饮片。图4 丹参饮片、标准水煎剂、配方颗粒HPLC特征图谱比较

注：A.丹参饮片供试品溶液；B.对照品溶液；1.丹参素钠；2.原儿茶醛；5.迷迭香酸；6.丹酚酸B。图5 色谱峰的指认

2.5.2丹参饮片、标准水煎剂、配方颗粒相关性研究 由图4可得，丹参配方颗粒和标准煎剂7个特征峰均能在药材和饮片中检出，说明这些成分都来源于药材；同时丹参配方颗粒和标准煎剂中都能检出7个特征峰，说明颗粒和标准煎剂的有效成分基本一致[7]。

3 讨论

本方法考察了乙腈-0.4%磷酸、乙腈-0.4%冰乙酸、乙腈-0.05%磷酸3种流动性梯度洗脱的结果，其中乙腈-0.4%磷酸梯度洗脱分离条件下色谱峰多，且理论板数、分离度、对称性均更好。同时分别比较了检测波长为210、230、254、286、310、326nm下的色谱峰，而在286nm下的色谱峰数较多且各峰之间的分离度较好，信息量大。最终选择乙腈-0.4%磷酸梯度洗脱作为流动性，以286nm作为检测波长。

丹参配方颗粒的特征图谱在10min之前的峰数多于丹参饮片和丹参标准煎剂，这部分成分还有待研究。

丹参饮片样品、标准煎剂以及颗粒样品都是水提制备样品。其中丹参饮片样品加适量水煎煮1 h是为了保证其中的水溶性成分能够有效溶出。标准煎剂是按照国家中医药管理局关于印发医疗机构中药煎药室管理规范的通知(国中医药发〔2009〕3号)中第四章煎药操作方法制备。丹参配方颗粒是以水为溶媒，经现代技术提取、浓缩、干燥、制粒等工艺制备而成。三者的制备方法有差异，但是本质上都是水溶液。

[1] 杨晓日，孙巍.中药配方颗粒探讨[J].中国药业，2007，16(14)：60.

[2] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010.

[3] 杨小英，马泽通，党宏万，等.丹参配方颗粒中有效成分的比较[J].中国医院药学杂志，2011，31(4)：289-292.

[4] 贾晓斌，陈彦，施亚芳，等.HPLC法测定丹参配方颗粒中丹参素的含量[J].现代中药研究与实践，2003，17(3)：43-44.

[5] 吴志军，秦绪江，催嘉，等.丹参药材HPLC指纹图谱研究[J].黑龙江医药，2010，23(4)：537-538。

[6] 宋敏，杭太俊，张正行.丹参水溶性成分HPLC指纹图谱指纹对照品对照法的研究[J].中草药，2005，36(3)：360-364.

[7] 韦红言，温庆伟，陆东，等.虎杖饮片、水煎剂、配方颗粒高效液相色谱特征图谱相关性研究[J].中国药业，2014，23(18)：37-40.

StudyonCorrelationofCharacteristicHPLCChromatogramofPieces,StandardDecoctionandFormulaGranuleofRadixSalviaeMiltiorrhizae

ZHOUWei，HUChangjiang*，DAIDerong，ZHANGXiuhuan，FengJian

(SichuanNeo-GreenPharmaceuticalTechnologyDevelopmentCo.Ltd,Sichuan,611930,China)

Objective：To study the correlation of characteristic HPLC chromatogram of Radix Salviae Miltiorrhizae pieces, standard decoction and formula granule, and investigate the effect of different existence forms on the chemical constituents.Methods：The Luna5u C18FLM column (250mm×4.6mm,5m) was used with acetonitrile and0.4% phosphoric acid aqueous solution as mobile phase. The detection wavelength was286nm. The flow rate was10mL/min, and the sampling rate was10μL. The characteristic HPLC chromatogram of10batch of Radix Salviae Miltiorrhizae pieces,10batch of standard decoction and10batch of formula granule were established.Results：7characteristic peaks in the HPLC characteristic chromatograms from10batches of formula granules could be tracked in the pieces and standard decoction, in the7characteristic peaks, three of them were rosemary acid，salvianolic acid B，sodium danshensu，protocatechuic aldehyde.Conclusion：The main chemical constituents of Radix Salviae Miltiorrhizae pieces,standard decoction and formula granule composition is basically identical.

Radix Salviae Miltiorrhizae pieces;standard decoction; formula granule; characteristic chromatogram

*

胡昌江，教授，博士研究生导师，研究方向：中药炮制原理及饮片质量标准研究；E-mail：wind_61@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.9.003

2015-09-15)

国家中医药管理局中医药科学技术研究专项课题(国中医药科2013X07)；河北省科技计划项目(14272504D)

*[通信作者] 高晗，助理工程师，研究方向：药物工艺及质量标准研究；Tel：(0311)88030066，E-mail：gaohan24637447@126.com