正交试验法优选强力五虎合剂的水提取工艺

田杰，王艳平，宁娱，王仲艳，徐竞

(宁夏自治区中医医院，宁夏 银川 750021)

·中药工业·

正交试验法优选强力五虎合剂的水提取工艺

田杰，王艳平*，宁娱，王仲艳，徐竞

(宁夏自治区中医医院，宁夏 银川 750021)

目的：优选强力五虎合剂水提取工艺。方法：以苦杏仁苷和盐酸麻黄碱含量及总浸膏得率为主要考察指标，采用L9(34)正交试验法考察加水量、提取次数、提取时间对水提取工艺的影响，选择最佳提取工艺。结果：最佳提取工艺为加8倍水量，煎煮3次，每次1 h。结论：优选的工艺稳定可行，有效成分提取率最高，重现性好，可为强力五虎合剂规范化生产提供参考。

强力五虎合剂；提取工艺；正交试验

强力五虎合剂[1]由麻黄、苦杏仁、黄芩、僵蚕等组方，具有清热化痰、止咳平喘的功能，适用于小儿支气管炎、支气管肺炎等。该方是宁夏自治区中医医院临床应用多年的处方，2000年取得院内制剂批号，疗效确切。为进一步提高制剂工艺，本研究采用正交试验法[2-3]，以君药麻黄中的盐酸麻黄碱，臣药苦杏仁中的苦杏仁苷含量为指标，结合浸膏得率进行综合分析，以优选其最佳提取工艺。

1 仪器与试药

1.1 仪器

1.2 试药

对照品苦杏仁苷、盐酸麻黄碱(中国食品药品检定研究院，批号分别为110820-201305，171241-201007)；蜜麻黄、苦杏仁、黄芩等中药材均购自宁夏明德中药饮片有限公司；甲醇、乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯；水为重蒸水。

2 方法与结果

2.1 总浸膏得率的测定

按处方比例称取适量药材，加水提取，提取液浓缩成流浸膏，移置经110 ℃干燥3 h至很重的蒸发皿中，水浴蒸干，于105 ℃干燥3 h，取出，移置干燥器中，冷却至室温，迅速精密称定，计算浸膏得率。

2.2 盐酸麻黄碱的含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：WondaSil C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.1%磷酸水(5∶95)；检测波长：207 nm；流速：1.0 mL·min-1；柱温：25 ℃；进样量：10 μL。理论塔板数以盐酸麻黄碱计不低于5000。色谱图见图1。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取盐酸麻黄碱对照品适量，加甲醇制成质量浓度为4 μg·mL-1的溶液，即得。

2.2.3 供试品溶液的制备 精密吸取供试液1 mL，加浓氨水0.5 mL(pH值约为10)，振摇，加入三氯甲烷定容至50 mL，称定质量，超声处理30 min，放冷，称定质量，用三氯甲烷补足减失的重量。振摇，滤过，弃去初滤液，精密量取续滤液25 mL，加盐酸乙醇(1→20)溶液4 mL(PH值呈酸性)，置水浴锅上蒸干，残渣加0.1 mol·L-1的盐酸溶液溶解，转移至25 mL量瓶中，定容至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。

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2.2.4 阴性对照溶液的制备 按处方比例配置除麻黄以外其余药味的阴性样品，照上述供试品溶液的制备方法，制备阴性对照溶液。

2.2.5 线性关系考察 精密吸取盐酸麻黄碱对照品溶液(4 μg·mL-1)2、4、6、8、10、12 μL，按2.2.1项下色谱条件进行测定，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，盐酸麻黄碱的回归方程为Y=1 582 500X-3 209.9(r=0.999 9)，结果表明，盐酸麻黄碱在0.008～0.048 μg与峰面积呈良好的线性关系。

注：A.空白溶剂；B.对照品溶液；C.样品；D.阴性对照溶液；1.麻黄碱。图1 盐酸麻黄碱的HPLC图

2.3 苦杏仁苷含量的测定

2.3.1 色谱条件与适用性试验 色谱柱：WondaSil C18(250 mm ×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-乙腈-水(80∶16∶4)；检测波长：207 nm；流速：1.0 mL·min-1；柱温：30 ℃；进样量：10 μL，理论塔板数以苦杏仁苷计不低于4000。色谱图见图2。

注：A.空白溶剂；B.对照品溶液；C样品；D.阴性对照液；1.苦杏仁苷。图2 苦杏仁苷的HPLC图

2.3.2 对照品溶液的制备 精密称取苦杏仁苷对照品适量，加甲醇制成质量浓度为40.8 μg·mL-1的溶液，即得。

2.3.3 供试品溶液的制备 取供试液1.5 mL，置于预处理的大孔吸附树脂柱，放置1 h后，先用60 mL水洗脱至流出液为无色，弃去洗脱液，再用50 mL的60%乙醇洗脱，收集60%乙醇洗脱液，置60 ℃水浴中蒸干。加10 mL甲醇超声15 min，溶液转移至25 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，过滤，弃去初滤液。精密吸取滤液5 mL至10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，即得。

2.3.4 阴性对照溶液的制备 按处方比例配置除苦杏仁以外其余药味的阴性样品，照上述供试品溶液的制备方法，制备阴性对照溶液。

2.3.5 线性关系的考察 精密吸取苦杏仁苷对照品溶液(40.8 μg·mL-1)2、5、10、15、18、20 μL，按2.3.1项下色谱条件进行测定，以进样量为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，苦杏仁苷的回归方程为Y=506 795X+10 460(r=0.999 4)，结果表明，苦杏仁苷在0.081 6～0.816 0 μg与峰面积呈良好的线性关系。

2.4 水提取工艺优选

称取1/2处方量药材，按L9(34)正交设计表进行试验，选取加水量、提取次数、提取时间为考察因素，每个因素设3个水平，以浸膏得率和盐酸麻黄碱、苦杏仁苷含量为评价指标，应用综合加权评分法进行分析。权重系数分别为0.2、0.4、0.4，即综合评分=浸膏得率/(浸膏最高得率×0.2×10)+盐酸麻黄碱含量/(盐酸麻黄碱最高含量×0.4×10)+苦杏仁苷含量/(苦杏仁苷最高含量×0.4×10)。因素水平见表1，试验安排及结果见表2，方差分析见表3。

表1 水提取工艺优选正交试验因素水平表

表2 水提取工艺优选正交试验安排

表3 水提取工艺方差分析

注：F0.05(2，2)=19.0。

由直观分析可知，各因素对水提取工艺的影响程度为C>A>B。方差分析表明，因素C对提取工艺的影响显著。其他因素则影响不显著。确定最佳提取条件为A2B1C3，即提取加水量8倍，提取3次，每次1 h。

2.5 验证试验

称取1/2处方量药材，按优选的水提取工艺进行3次验证试验，结果3批强力五虎合剂水提工艺测定结果见表4，表明优选的工艺稳定可行。

表4 3批强力五虎合剂水提工艺测定结果(n=3)

3 讨论

强力五虎合剂为宁夏自治区中医医院院内制剂，在市场上尚无供应，对其质量标准的研究也未见报道，具有一定的新颖性。方中麻黄为君药，主要活性成分是盐酸麻黄碱，可以扩张支气管、镇咳、化痰[4]。苦杏仁苷为臣药，主要活性成分为苦杏仁苷，具有镇咳平喘的作用[5]。同时出膏率与产品生产及质量关系密切，故本试验以盐酸麻黄碱和苦杏仁苷含量及浸膏得率为评价指标。综上，本研究优选的水提工艺稳定、可行，重现性好，可用于强力五虎合剂的提取控制。

[1] 田杰，王华，王艳平.强力五虎合剂制备及临床研究[J].辽宁中医药大学学报，2011，13(3)143-144.

[2] 姜玲艳，张小华，张宏武，等.正交试验法优选健胃清肠合剂的水提醇沉工艺[J].中国实验方剂学杂志，2013，19(17)：35-37.

[3] 郭廷东，唐志立，谢雨洮，等.正交试验法优选芍黄通便合剂的水提取工艺[J].中国药业，2012，21(24)：67-68.

[4] 张保国，刘庆芳.麻黄汤现代药效学研究与临床运用[J].中成药，2007，29(3)：415-422.

[5] 魏金婷，刘文奇.方药中苦杏仁苷的研究和应用进展[J].海南医学院学报，2007，13(6)：589-591.

OptimizationofWaterExtractionProcessofQiangliWuhuMixturesbyOrthogonalTest

TIANJie，WANGYanping*，NINGYu，WANGZhongyan，XUJing

(TraditionalChineseMedicineHospitalofNingxiaAutonomousRegion,Yinchuan750021,China)

Objective： To optimize water extraction of Qiangli Wuhu mixtures.Method:With ephedrine and amygdalin extract rate as the main index, the L9(34) orthogonal design was used to screen the optimal water extraction.Results:The optimal water extraction process of Qiangli Wuhu mixture was as follows: adding 8 times amount of water, decocting three times, 1h each time.Conclusion:The technology is optimized under simulated production conditions with high extraction rate of active ingredient, good reproducibility, stability and feasibility, which can provide reference for the mass production technology of Qiangli Wuhu Mixture.

Qiangli Wuhu mixture；water extraction technology；orthogonal design

10.13313/j.issn.1673-4890.2016.6.021

2016-02-26)

宁夏自治区科技支撑计划项目[宁科技字2013(20)]；中央本级重大增减支项目(2060302)

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王艳平，主任药师，研究方向：制剂研究；Tel：(0591)5600655，E-mail：13895013806@163.com