亳州疏毛罗勒挥发油化学成分及抗氧化与抑菌活性研究

刘超祥，丁锐

(亳州职业技术学院药学院，安徽 亳州 236800)

王珊

(亳州职业技术学院药学院，安徽 亳州 236800;安徽中医药大学药学院，安徽 合肥 230000)

丁连峰

(安徽济人药业有限责任公司，安徽 亳州 236800)

刘耀武

(亳州职业技术学院药学院，安徽 亳州 236800)



亳州疏毛罗勒挥发油化学成分及抗氧化与抑菌活性研究

刘超祥，丁锐

(亳州职业技术学院药学院，安徽 亳州 236800)

王珊

(亳州职业技术学院药学院，安徽 亳州 236800;安徽中医药大学药学院，安徽 合肥 230000)

丁连峰

(安徽济人药业有限责任公司，安徽 亳州 236800)

刘耀武

(亳州职业技术学院药学院，安徽 亳州 236800)

疏毛罗勒(OcimumbasilicumL)；挥发油(;抗氧化性;抑菌活性

疏毛罗勒(OcimumbasilicumL)为唇形科罗勒属一年生全草植物，别名兰香、九层塔等。其味辛甘、性温，有疏风解表、行气活血、解毒消肿之功效。主治感冒头痛、发热咳嗽、食积不化、中暑等症[1,2]，还可用于蛇虫咬伤和湿疹骚痒，且无毒副作用。近年来，罗勒的化学成分及生物活性研究引起国内外科研工作者关注，疏毛罗勒药理学研究主要集中在降低血糖活性、抗应激活性、驱虫活性、治疗腹泻、抗真菌活性和抗辐射引起的染色体损伤等领域[3,4]。

对亳州疏毛罗勒(罗勒变种，俗称香花子)的实地调研和临床观察，发现亳州疏毛罗勒挥发油成分对蚊虫叮咬引起的痛痒和炎症具有特殊疗效[5]。基于此，本研究对亳州地区疏毛罗勒挥发油的化学成分分析、抗氧化及抑菌活性进行了研究，试图找到疏毛罗勒挥发油成分对蚊虫叮咬引起的痛痒与抑菌活性、抗氧化活性之间的联系，为亳州地区疏毛罗勒的进一步开发利用提供参考依据。

1　材料与方法

1.1材料

样品：采自安徽省亳州职业技术学院药用植物园，经安徽中医药大学方成武教授鉴定。

主要仪器：RE-52A旋转蒸发仪(亚荣生化仪器厂产品)，FA2004N电子天平(菁海仪器有限公司产品)，752紫外可见分光光度计(菁华科技仪器有限公司产品)，SHZ-(Ⅲ)循环水式多用真空泵(河南省予华仪器有限公司产品)，HH-1数显恒温水浴锅(晶波实验仪器厂产品)，456-GC型气相色谱(Bruker公司生产),SCION单四级杆质谱仪(Bruker公司生产)，SPX-150B生化培养箱、MJX-160B霉菌培养箱、HPX -9082MBE电热恒温培养箱(均为上海博迅实业有限公司产品)，AR5120电子分析天平(美国奥豪斯国际贸易有限公司产品)。

试剂：羟甲基氨基甲烷、DPPH·、抗坏血酸(Vc)、邻苯三酚、0.9%无菌氯化钠溶液、丙酮等，所用试剂均为分析纯。

菌株及培养基：大肠埃希菌(Escherichiacoli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、白色念珠菌(Candidaalbicans)、营养肉汤培养基、营养琼脂培养基、改良马丁(琼脂)培养基、氯化钠蛋白胨缓冲液(pH 7.0)均由安徽济人药业有限责任公司检测中心提供。

1.2方法

1.2.1挥发油的提取

取疏毛罗勒200g，剪碎，装入500mL的圆底烧瓶中，水蒸气蒸馏提取挥发油[6]，乙醚萃取，使用旋转蒸发仪回收乙醚后，得到淡黄色透明油状物0.9g，挥发油得率0.45%，具有特殊香味，低温保存备用。

1.2.2化学成分分析

采用气-质联用技术对疏毛罗勒挥发油成分进行分析。

气相色谱条件：弹性毛细管色谱柱(BR-17型，奥嵩科学仪器有限公司产品，0.25μm×250μm×30m)，载气：高纯氦气(南京上元工业气体厂产品)，纯度大于99.99%，柱流量1.0mL/min，采用分流进样，分流比 10∶1，进样量1.0μL，进样口温度为 220℃；程序升温条件：初始温度为40℃(2min)，以2℃/min的速度升温至100℃(保持2min)，再以5℃/min的速度升温至250℃。

质谱条件：EI离子源，电子能量70eV，离子源温度为220℃，传输线温度为260℃，四级杆温度 为150℃；全扫描模式，扫描周期 1s，质谱检索标准库：NIST 11.L。

1.2.3抗氧化活性测定

抑制率 (I)={[(△D/△t)对照- (△D/△t)]/ (△D/△t)对照}× 100%

2)清除DPPH·自由基能力测定参考文献[10,11]的方法测试目标化合物清除二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)的能力。向1mL DPPH·乙醇溶液中加入不同浓度的疏毛罗勒挥发油使总体积达到2mL。振荡器混匀后，室温，避光放置30min后，在518nm波长处测定光密度D1，DPPH·乙醇溶液在518nm波长处测定光密度D0，平行测定3次，按下式计算清除率。用Vc进行空白对照。

清除率=[(D0-D1)/D0]×100%

1.2.4抑菌活性测定

采用杯碟法[12]，检测疏毛罗勒挥发油对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的抑制作用。样品设5个浓度，分别为1050、525、262.5、131.25、65.625 μg/mL。

2　结果与分析

2.1疏毛罗勒挥发油化学成分

采用GC/MS分析对疏毛罗勒挥发油化学成分进行分析，共检测出27个峰。对总离子流图中的各峰经质谱扫描后得到质谱图，经计算机质谱数据库检索按各色谱峰的质谱裂片图并结合有关文献对峰质荷比和相对丰度等进行直观比较，同时还对一些主要成分采用标准物质对照，分别对各色谱峰加以确认，鉴定了疏毛罗勒挥发油组分中的化学成分，按面积归一法确定各组分相对含量，分析结果见表1。

表1　疏毛罗勒挥发油化学成分的GC/MS的分析结果

由表1可知，疏毛罗勒挥发油成分鉴定出27种化合物，主要成分为萜类物质，占挥发油成分的60.61%。相对含量较高的是十六酸乙酸乙酯(44.16%)、酸松油酯(17.01%)、(s)-2,5,5,8-四甲基-1,2,3,6-四氢化薁-4-酮(9.92%)、香叶醇(3.05%)、3-(1,3-丁间二烯基)-2,4,4-三甲基-环己烯(2.42%)、肉桂酸甲酯(2.35%)、香树烯(1.35%)、1,2,3,4,5,6,7,8,8a-八氢-1,4-二甲基-7-(1-异丙烯基)-甘菊环烃(1.52%)、莰烯(1.32%)及B-瑟林烯(1.09%)，其他成分含量较少。结合植物生源代谢途径分析，认为疏毛罗勒挥发油成分主要通过甲戊二羟酸代谢合成途径、莽草酸代谢合成途径和乙酰-丙酮酸代谢合成途径完成，没有发现氨基酸代谢合成途径产物。

2.2疏毛罗勒挥发油的抗氧化活性

表2　疏毛罗勒挥发油抗氧化活性

2.3 疏毛罗勒挥发油的抑菌活性

从表3结果可以看出，疏毛罗勒挥发油样品有一定抑菌活性，对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌均有一定的抑菌作用并成浓度依赖，浓度越高，抑菌作用越明显；但是对枯草芽孢杆菌的抑菌效果最差。

表3　疏毛罗勒挥发油抑菌活性的结果分析

3　结论

现代医学研究证实诸多疾病的发生和发展与自由基导致的机体细胞氧化损伤密切相关，从天然产物中寻找安全有效的抗氧化剂成为近年来的研究热点之一。本研究以抗DPPH·自由基能力为指标，评价疏毛罗勒挥发油成分的抗氧化能力；发现疏毛罗勒挥发油所含化学成分有较好的抗氧化性[13,14]；其挥发油对大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、白色念珠菌3株菌种随浓度升高抑菌效果越明显。试验过程中还将其制成液体溶剂用于蚊虫叮咬实验，止痒效果也较明显。此外，课题组从疏毛罗勒挥发油组分中分离纯化到一个具有驱蚊活性的单体化合物和一个具有止痒效果的单体化合物，对2个化合物的药理活性正在进一步研究和开发。

[1]刘勇民.维吾尔药志[M].乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社,1999:336～338.

[2]国家中医药管理局,中华本草编委会.中华本草[M].上海:上海科学技术出版社,1999.

[3]周绪霞,李卫芬.罗勒的应用与展望[J].中草药,2003,(2):25～26.

[4]刘超祥,方成武,刘耀武.罗勒化学成分与抗氧化活性影响因素研究进展[J].贵州农业科学,2014,(6):51～55.

[5]胡云飞，吴德玲，徐国兵，等.GC-MS结合化学计量学对5个产地牡丹皮提取物的比较分析[J].中草药,2015,37(9):2003～2007.

[6]卢汝梅,李耀华.桂产罗勒挥发油化学成分的分析[J].广西植物,2006,26(4):456～458.

[7]El-Toumy S A,Souda S S E,Mohamed T K,etal.Anthraquinone glycosides from Cassia roxburghii,and evaluation of its free radical scavenging activity[J].Carbohydrate Research,2012,360:47～51.

[8]陆洲,刘超祥,余星,等.新型脱氢枞胺衍生物的合成及其抗自由基活性[J].有机化学.2013,33(3):562～567.

[9]Chao-Xiang Liu,Zhong-Xiang Lin,Zhou Lu,etal. Antitumor and scavenging radicals activities of some polyphenols related to dehydroabietylamine derivatives[J].Journal of Asian Natural Products Research,2013,15:819～827.

[10]Dawidowicz A L,Wianowska D,Olszowy M.On practical problems in estimation of antioxidant activity of compounds by DPPH,method (Problems in estimation of antioxidant activity)[J].Food Chemistry,2012,131:1037～1043.

[11]Chat O A,Najar M H,Mir M A,etal.Effects of surfactant micelles on solubilization and DPPH radical scavenging activity of Rutin[J].Journal of Colloid & Interface Science,2011,355:140～149.

[12]杨春杰,丁连峰,刘超祥,等.妇科止带片微生物限度检查的方法学验证研究[J].安徽医药,2014,(3):455～458.

[13]胡尔西丹,伊麻木,艾萨.罗勒子挥发油成分及抗氧化活性分析[J].安徽农业科学,2012,40(2):752～754.

[14]勾明玥,刘梁,张春枝.采用DPPH·法测定26种植物的抗氧化活性[J].食品与发酵工业，2010,36(3):148～150.

2016-04-18

安徽省质量工程—药学专业省级教学团队项目(2013jxtd067);安徽省质量工程—药品质量检测技术特色专业项目(2014tszy055);安徽省高等学校自然科学研究项目重点课题(KJ2015A358);亳州市中药科技创新团队项目(BZ2014zzb21)。

刘超祥(1972-)，男, 博士, 副教授, 主要从事天然产物化学成分及生物活性研究,cxliu888@163.com。

Q949.777.6

A

1673-1409(2016)21-0034-04

[引著格式]刘超祥，丁锐,王珊,等.亳州疏毛罗勒挥发油化学成分及抗氧化与抑菌活性研究[J].长江大学学报(自科版) ，2016，13(21)：34～37.